趙 穎 那仁巴圖 蘇德斯琴 曹 平 張婧娟

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 010018

變異黃芪(Astragalus variabilis Bunge)為豆科多年生有毒黃芪屬植物，耐貧瘠，枯萎早 （3月下旬），枯萎遲（11月），生長(zhǎng)快，其花期5~6月，果期5~8月[1]。內(nèi)蒙古西部阿拉善盟大草原分布著大量有毒牧草，嚴(yán)重危害面積達(dá)67.6萬hm2，變異黃芪是主要毒草之一，它造成馬、牛、羊、駱駝等家畜慢性中毒[2]。黃有德[3]（1992）對(duì)變異黃芪進(jìn)行了有毒成分的分離分析；王生奎[4](1998)首次進(jìn)行了變異黃芪和黃花棘豆致使綿羊中毒的研究，發(fā)現(xiàn)二者中毒癥狀相似，但變異黃芪中毒更為嚴(yán)重；王銀朝，趙寶玉等[1]（2006）人對(duì)變異黃芪地上部分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究；國內(nèi)外研究均表明變異黃芪的有毒成分是吲哚茲定生物堿——苦馬豆素，是α-甘露糖甘酶的強(qiáng)烈抑制劑，引起甘露糖蓄積癥，造成細(xì)胞生物化學(xué)和形態(tài)學(xué)改變[6]。但是目前還沒有關(guān)于不同生長(zhǎng)時(shí)期的變異黃芪不同部位化學(xué)成分的系統(tǒng)研究報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)將枯萎期的變異黃芪分為三個(gè)部位：枯枝、根頸、根，分別進(jìn)行化學(xué)成分分析，達(dá)到搞清楚變異黃芪不同部位的主要成分的目的，及引起動(dòng)物中毒的主要部位和主要物質(zhì)，為農(nóng)牧民合理利用草場(chǎng)、科學(xué)放牧，有效避免家畜中毒提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品的制備

變異黃芪，采自阿拉善盟，陰干，分離出枯枝、根頸、根，分別粉碎備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

無水乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，氫氧化鈉，醋酸鉛，硫酸銅，苦味酸，茚三酮，三氯化鐵，鞣酸，次硝酸鉍，氯化汞，碘化鉀，硅鎢酸，磷鉬酸，濃鹽酸，鋅粉，濃硫酸，濃硝酸，硼酸，三氯乙酸，氨水，硝酸銀，α－萘酚，亞硝酰鐵氰化鈉，吡啶，無水硫酸鈉，以上藥品均為分析醇試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

HH-2－數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司），DHG－9243B5－III電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械有限公司），索式提取器，BL－2200H電子天平，粉碎機(jī)，常規(guī)玻璃器皿。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分別稱取變異黃芪枯枝、根頸、根的粗粉5g，加入50ml蒸餾水，50℃～60℃水浴加熱1h，過濾，濾液做糖及其苷類、有機(jī)酸、酚類、蛋白質(zhì)、氨基酸、皂苷、生物堿的檢識(shí)。

2.2 分別取變異黃芪枯枝、根頸、根的粗草粉10g，加入10倍量的無水乙醇，水浴加熱回流1h后過濾，濾液留5ml做酚類、有機(jī)酸、黃銅類、醌類、香豆素和內(nèi)酯、強(qiáng)心苷的檢識(shí)；將其余濾液濃縮成浸膏，浸膏中加入30ml 2%的鹽酸溶解，取10ml酸液做生物堿的檢識(shí)。

2.3 稱取枯枝、根頸、根的粗粉各5g，加入50ml氯仿，室溫浸泡2h，過濾后做皂苷類的檢識(shí)。

2.4 稱取枯枝、根頸、根的粗粉各5g，加入乙醚50ml，水浴回流20min，濾液進(jìn)行甾體、萜類、揮發(fā)油和油脂的檢識(shí)。

2.5 取各部位草粉5g，分別置于錐形瓶中，加5%硫酸溶液30ml，充分混合。在錐形瓶口放置一條浸過苦味酸試劑的濾紙條，塞緊瓶塞。在沸水浴中加熱10min，濾紙條沒有變色，說明不含氰苷[7]。

2.6 準(zhǔn)確稱取各部位草粉20mg，置于試管中，加入1 ml 1 mol/L的鹽酸，室溫振搖2 h后，加20%氫氧化鉀1 ml，室溫振搖2 h，再加2 mol/L的冰醋酸1 ml和格林氏試劑1 ml，搖勻，若出現(xiàn)淡紅色或紅色，表明含有脂肪族硝基化合物，反之則為負(fù)反應(yīng)[8]。

3 結(jié)果與討論

3.1 結(jié)果

采用試管法對(duì)變異黃芪的枯枝、根頸、根三部分進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)和氰苷成分的專項(xiàng)試驗(yàn)，結(jié)果如表1、表2、表3所示。

表1 枯枝部分化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果Table 1 the chemical composition of the deadwood

3.1.1 枯枝部分結(jié)果分析

如上表所示，枯枝部分草樣的糖及其苷類、酚類物質(zhì)、氨基酸、內(nèi)酯和香豆素的檢測(cè)現(xiàn)象都非常明顯；有機(jī)酸、甾體和萜類檢測(cè)過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象較明顯，四種藥品對(duì)生物堿的檢識(shí)中碘化汞鉀試劑與磷鉬酸反應(yīng)較明顯，碘化鉍鉀試劑反應(yīng)有微量沉淀，而硅鎢酸沒有沉淀出現(xiàn)；醌類物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)及皂苷的泡沫試驗(yàn)均出現(xiàn)輕微現(xiàn)象；蛋白質(zhì)、強(qiáng)心苷、氰苷、脂肪族硝基化合物均為負(fù)反應(yīng)，即未檢出；揮發(fā)油試驗(yàn)表明草樣枯枝中含有油脂不含揮發(fā)油。

表2 根頸部分化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果Table 2 the chemical composition of the crown

3.1.2 根頸部分結(jié)果分析

如上表所示，根頸部分草樣的糖及其苷類、酚類物質(zhì)、氨基酸、內(nèi)酯和香豆素的檢測(cè)現(xiàn)象與枯枝部分相同，同時(shí)該部分的甾體萜類的檢識(shí)效果顯色非常明顯；有機(jī)酸檢測(cè)結(jié)果與3.1.1相同，生物堿的檢識(shí)與3.1.1相同；醌類物質(zhì)的檢識(shí)很顯著，黃酮類物質(zhì)及皂苷的泡沫試驗(yàn)也呈現(xiàn)正反應(yīng)，現(xiàn)象輕微；蛋白質(zhì)、強(qiáng)心苷、氰苷、脂肪族硝基化合物均同于3.1.1的結(jié)果；揮發(fā)油試驗(yàn)表明草樣根頸中含有油脂不含揮發(fā)油。

3.1.3 根部結(jié)果分析

如上表所示，根部草樣的糖及其苷類、酚類物質(zhì)、氨基酸、內(nèi)酯和香豆素的反應(yīng)現(xiàn)象與3.1.1相同，同時(shí)甾體萜類、醌類化合物的檢識(shí)也非常顯著；黃酮類物質(zhì)、有機(jī)酸的檢測(cè)過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象較明顯，皂苷的泡沫試驗(yàn)現(xiàn)象較明顯；四種藥品對(duì)生物堿的檢識(shí)均為負(fù)反應(yīng)；蛋白質(zhì)、強(qiáng)心苷、氰苷、脂肪族硝基化合物均為負(fù)反應(yīng)，即未檢出；揮發(fā)油試驗(yàn)表明草樣中含有油脂不含揮發(fā)油。

表3 根部化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果Table 3 the chemical composition of the root

3.2 討論

3.2.1 譚承建[9]（2005）報(bào)道了變異黃芪含有糖、多糖及苷類、氨基酸、皂苷生物堿、強(qiáng)心苷、酚性成分、油脂、黃酮及其苷類、甾體、萜類氰苷、而不含揮發(fā)油、內(nèi)酯、香豆素及苷、蒽醌及其苷類，不含硝基化合物。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，枯枝、根頸、根三個(gè)部位均含有酚類、黃酮及其苷類、糖及其苷類、氨基酸及多肽、皂苷、油脂、醌類及其苷類、甾體，萜類、有機(jī)酸，三個(gè)部位均不含揮發(fā)油、脂肪族硝基化合物，與譚承建所報(bào)道的相似。但是與之不同的是，此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明變異黃芪的三個(gè)部分均含有醌類化合物，樣液中加入氫氧化鈉明顯變橙紅色；枯枝、根頸、根部均不含強(qiáng)心苷和氰苷，試劑反應(yīng)均沒有現(xiàn)象。

另外，根據(jù)開環(huán)與閉環(huán)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)原理，香豆素類在堿性水溶液中受熱，導(dǎo)致內(nèi)酯環(huán)破裂，生成溶于水的羥基羧酸鹽，使溶液顯黃色，再加入酸，又能結(jié)合成環(huán)而形成香豆素精類沉淀析出。如果堿水解過程中加熱時(shí)間過長(zhǎng)，就會(huì)發(fā)生異構(gòu)化，順式變反式，遇酸就不能成環(huán)。譚承建（2005）研究表明變異黃芪不含有內(nèi)酯和香豆素，但是本實(shí)驗(yàn)在該部分的操作過程中，枯枝和根頸兩部分的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象均很明顯，說明這兩部分含有內(nèi)酯和香豆素，而根部卻不含內(nèi)酯和香豆素。

在實(shí)驗(yàn)操作過程中，糖及其苷類的檢測(cè)在三個(gè)部位的草樣里現(xiàn)象都很明顯，有清晰的紫色圓環(huán)出現(xiàn)；黃酮類物質(zhì)的檢識(shí)，根部現(xiàn)象明顯，加入堿式醋酸鉛后有紅色沉淀生成，但是枯枝部分和根頸部分反應(yīng)輕微，有少量黃色沉淀生成；樣品乙醇浸提液加入堿性試劑后有明顯變色現(xiàn)象，根部還有大量絮狀物產(chǎn)生，即含有醌類化合物；檢測(cè)氨基酸的反應(yīng)中，枯枝部分的現(xiàn)象為藍(lán)紫色，根頸部分和根部為藍(lán)色，現(xiàn)象明顯。

3.2.2.枯枝和根頸含有生物堿，但含量不多，反應(yīng)也不是很明星，只有微量沉淀生成，其中碘化汞鉀試劑出現(xiàn)白色沉淀，碘化鉍鉀出現(xiàn)淡黃色沉淀，與譚承建（2005）報(bào)道的變異黃芪化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)中生物堿的結(jié)果相似。本次試驗(yàn)的磷鉬酸有淺黃色沉淀生成，雖然硅鎢酸沒有沉淀，但是其他三種試劑表明草樣的地上部分是含有生物堿的；而根部，四種試劑均沒有沉淀生成，說明根部沒有生物堿。

3.2.3.本實(shí)驗(yàn)在檢測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)，采用雙縮脲反應(yīng)，但是沒有紫色物質(zhì)生成，用蛋白質(zhì)含量豐富的樣品檢測(cè)硫酸銅和氫氧化鈉試劑，均正常；再次采用蛋白質(zhì)常規(guī)檢測(cè)方法，證明草樣中有粗蛋白的存在。盡管雙縮脲反應(yīng)為負(fù)反應(yīng)，但是不能說明草樣中不含有蛋白質(zhì)。

4 結(jié)論

預(yù)試驗(yàn)是用簡(jiǎn)單而快速的方法，對(duì)樣品中所含的成分進(jìn)行初步的分析，為進(jìn)一步的鑒定打下基礎(chǔ)。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果可知，枯萎期的變異黃芪枯枝、根頸、根三個(gè)部位均含有酚類、黃酮及其苷類、糖及其苷類、氨基酸及多肽、皂苷、蒽醌及其苷類、甾體，萜類、油脂、有機(jī)酸；枯枝和根頸含有內(nèi)酯、香豆素、生物堿；而根部卻不含內(nèi)酯、香豆素、生物堿；同時(shí)三個(gè)部位均不含揮發(fā)油、強(qiáng)心苷、氰苷、脂肪族硝基化合物。

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