熊 濤 劉 镕 趙琴平 明珍平 鐘沁萍 蔣明森 董惠芬

武漢大學基礎醫(yī)學院人體寄生蟲學教研室，武漢430071；＃通訊作者

目的：課題組前期研究已經篩選出日本血吸蟲肺期童蟲的差異基因-生長激素誘導的跨膜蛋白（GHITM）基因，其可能在日本血吸蟲的生長發(fā)育中起關鍵作用。本文克隆、表達GHITM基因，以便進一步探索其在血吸蟲生長發(fā)育過程中的作用。方法：根據GHITM基因的序列，分別設計含有酶切位點的GHITM基因引物，以日本血吸蟲成蟲的總RNA為模板進行RT-PCR，PCR產物提純后使用EcoR I和Xho I雙酶切，然后與使用同樣酶雙酶切的pET-28a-c質粒連接并轉化DH5α宿主菌，使用卡那霉素篩選陽性克隆后測序。將測序結果與已發(fā)表的序列進行比對，選取序列準確的克隆擴大培養(yǎng)并提取質粒，轉化BL21宿主菌，并用1mM IPTG誘導其表達，SDS-PAGE鑒定，鎳柱親和層析純化重組蛋白。結果：通過使用設計的特異性引物，RT-PCR后獲得長度為1 000bp左右的GHITM基因特異性產物；PCR產物切膠回收，表達載體與目的片段同時雙酶切，經連接、轉化后隨機挑取10個陽性克隆，行PCR篩選，瓊脂糖凝膠電泳檢測后測定其序列，挑選突變率最低的克隆擴大培養(yǎng)、轉化宿主菌并誘導表達，SDS-PAGE電泳發(fā)現在分子量為42KD左右有一特異性條帶，純化獲得了GHITM蛋白。結論：成功構建了含GHITM基因的原核表達質粒pET-28a-c，并誘導表達了GHITM蛋白。

＊國家自然科學基金（81273010）