倪春曉 李曉光

(1.泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271016； 2.泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院，山東 泰安 271000)

口腔癌是目前世界上最常見(jiàn)的十大惡性腫瘤之一，占全身惡性腫瘤的 5%，其中，90%為上皮源性的鱗狀細(xì)胞癌。近年來(lái)口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，發(fā)病年齡也趨于年輕化[1-2]。因而建立與人類(lèi)口腔癌相似的動(dòng)物模型，有利于探討口腔癌的病因、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。口腔癌動(dòng)物模型的建立方法目前常用的有化學(xué)誘導(dǎo)劑法、腫瘤細(xì)胞株接種法或腫瘤組織塊移植法、基因突變法等。本文就口腔癌動(dòng)物模型建立方法的研究進(jìn)展作一綜述。

1 化學(xué)誘導(dǎo)劑法

化學(xué)試劑誘導(dǎo)發(fā)生口腔惡性腫瘤是最常見(jiàn)的一種方法，也比較成熟，半個(gè)世紀(jì)以來(lái)一直被國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者采用。此類(lèi)制作方法的優(yōu)點(diǎn)是：可較好的模仿人類(lèi)口腔癌的發(fā)生過(guò)程，能在嚴(yán)格控制各種條件下短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出大量口腔惡性腫瘤動(dòng)物模型。缺點(diǎn)是：制作周期長(zhǎng)，腫瘤發(fā)展緩慢；且所建立的動(dòng)物模型和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面還存在一定程度的差異。因此，這類(lèi)制作方法多用于腫瘤的病因?qū)W及預(yù)防研究,不利于做腫瘤治療及進(jìn)展研究。

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

迄今為止，國(guó)內(nèi)外學(xué)者使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要有金黃地鼠、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠[3]等，其中以金黃地鼠、大鼠、小鼠為常用。

金黃地鼠因?yàn)榇嬖谔厥獾慕馄式Y(jié)構(gòu)頰囊(頰囊被覆角化復(fù)層鱗狀上皮，對(duì)致癌劑敏感，常作為誘癌的部位[4])，被廣泛作為誘癌動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)性金黃地鼠頰囊癌被認(rèn)為是一個(gè)簡(jiǎn)單、方便、重復(fù)性好、較穩(wěn)定而又容易建立的口腔粘膜化學(xué)致癌動(dòng)物模型，在癌癥的病因、病理、治療實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。用于實(shí)驗(yàn)的金黃地鼠最適宜的鼠齡是 5 周，體重一般是60～80 g。大鼠因食性廣泛，容易飼養(yǎng)，亦常作為誘癌動(dòng)物，常用的有Wistar大鼠和 SD 大鼠。用于實(shí)驗(yàn)的 Wistar 大鼠一般為 6～8 周鼠齡，體重為150～180 g；SD 大鼠鼠齡為130～150 d，體重為 180～230 g[3]。小鼠性溫順、易捕捉，也可用作誘癌動(dòng)物，用于實(shí)驗(yàn)的小鼠鼠齡約為40 d ，體重為 18～25 g[7-8]?？捎脕?lái)誘導(dǎo)牙齦癌、上腭癌、舌癌等[5]。

1.2致癌劑的選擇

應(yīng)用于口腔惡性腫瘤動(dòng)物模型誘導(dǎo)的致癌劑分為以下幾種：二甲苯蒽(10-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA)，5-溴脫氧尿苷(5-bromodexyuridine,BrdUrd)，N-氧化-4- 硝基喹啉(4-nitroquinoline-1-oxide，4NQO)，3-甲基膽蒽(methylcholanthrene,MCA)，拉帕醇(lapachol,LAP)，二氯甲烷(methylene chloride)，碘化鉀(potassiumiodide,KE)，磷酸鉻(chromic colloidal phosphate,CCP)，其中最常用的是DMBA,其次還有4NQO及MC[6]等。

DMBA是多環(huán)芳香烴類(lèi)致癌物，是直接致癌劑， 對(duì)上皮細(xì)胞的 DNA 有較強(qiáng)毒性，當(dāng)一定量的 DMBA 經(jīng)歷一段時(shí)間積累作用于黏膜上皮細(xì)胞后，DNA 發(fā)生突變，細(xì)胞發(fā)生異常增生，被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物腫瘤模型的建立。DMBA 為黃色粉末，可用液體石蠟或丙酮配制成 0.5%溶液，使用方法是口腔黏膜局部涂抹法或直接注射法。

4NQO 是水溶性喹啉衍生物，是一種很強(qiáng)的水溶性前體致癌劑，屬芳香胺雜環(huán)化合物。在體內(nèi)被 4NQO 還原酶代謝為近致癌物 4-羥氨基喹啉-1-氧化物，再進(jìn)一步代謝為終致癌物 4-乙酰氨基喹啉-1-氧化物(4-AAQO)，4-AAQO以共價(jià)鍵的方式與靶器官細(xì)胞 DNA 結(jié)合，并破壞染色體的結(jié)構(gòu),使鼠第 7 號(hào)染色體上 H-ras1 基因第 12 位密碼子發(fā)生 G→A 轉(zhuǎn)換，進(jìn)一步影響抑癌基因和癌基因表達(dá),最終導(dǎo)致癌發(fā)生[7]。4NQO呈淡黃色粉末狀，可配置成 0.5%的 4NQO 丙二醇溶液或二甲亞砜液，也可用蒸餾水配成 0.1%溶液，使用方法是用自來(lái)水稀釋成0.002%濃度放到避光瓶中由動(dòng)物自由飲用。

MCA為淺黃色細(xì)長(zhǎng)棱柱體結(jié)晶，可溶于二甲基亞砜(DMSO)，溶于苯、甲苯和二甲苯,微溶于戊醇,不溶于水。常用來(lái)誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上誘導(dǎo)纖維肉瘤和皮膚癌。常用使用方法是直接注射法。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1DMBA 或4NQO溶液涂抹法 Siddavaram Nagini 等[8]用0.5%的DMBA 石蠟油溶液涂抹金黃地鼠頰囊，每周 3 次，連續(xù) 14 周，所有鼠均誘導(dǎo)出分化良好的鱗癌.邱存平等[9]采用DMBA涂抹金黃地鼠舌粘膜的同時(shí)分別使用刺破粘膜和切割誘發(fā)腫瘤，每周2次,共 25周；結(jié)果成瘤率為95% (38/40),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均經(jīng)歷了上皮異常增生、原位癌、浸潤(rùn)癌和轉(zhuǎn)移癌幾個(gè)階段，3只金黃地鼠出現(xiàn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，組織學(xué)呈高分化鱗狀細(xì)胞癌表現(xiàn)。鄭金華等[10]采用1%DMBA丙酮液涂抹聯(lián)合應(yīng)用舌創(chuàng)傷致 SD 大鼠和金黃地鼠左側(cè)舌癌，共 24 周；結(jié)果SD 大鼠和金黃地鼠 3 d 后舌背黏膜左側(cè)緣相繼出現(xiàn)潰瘍、白斑、腫大；SD大鼠 8 周可見(jiàn)上皮層增生和基底膜細(xì)胞的異型性改變，16 周癌變的基底細(xì)胞突破基底膜向深層浸潤(rùn)，鏡下見(jiàn)癌細(xì)胞分化程度差，無(wú)角化珠形成，致癌率 76.6%；金黃地鼠 8 周出現(xiàn)黏膜白斑或乳頭狀突起，繼之出現(xiàn)黏膜糜爛，10 周逐漸形成外生性腫塊，鏡下見(jiàn)癌細(xì)胞分化程度高,有角化珠形成，致癌率為 93.3%。Cavalcante DR等[11]用 DMBA 溶液涂抹大鼠舌背，每周3次，連續(xù) 20周，成功建立了大鼠舌癌模型。Burns JA等[12]應(yīng)用DMBA溶液涂抹21只倉(cāng)鼠的頰囊，結(jié)果19只倉(cāng)鼠成功建立頰囊部的鱗狀細(xì)胞癌。Hsu WH[13]及Rajkamal G等[14]應(yīng)用0.5%DMBA溶液涂抹金黃地鼠頰囊，每周3次，共14周，成功建立口腔鱗狀細(xì)胞癌。段開(kāi)文等[15]采用 0.5% 4-NQO丙二醇液涂抹27只Wistar大鼠腭中部每周 3次，成功獲得大鼠腭粘膜癌變的各期組織。

1.3.24NQO 溶液飲用法 李文薈等[16]采用4NQO溶液飲用法，對(duì)20只SD大白鼠舌粘膜進(jìn)行誘癌實(shí)驗(yàn)，至32周時(shí)，20只大鼠有14只出現(xiàn)高分化鱗狀細(xì)胞癌，3只為原位癌，余 3只為輕、中度異常增生。卜冬平等[17]采用0.001%和0.002% 4NQO飲水喂養(yǎng)Balb/c小鼠16～28周，結(jié)果顯示0.001% 4NQO是誘發(fā)小鼠舌癌前病變的理想濃度，0.002%是誘發(fā)小鼠舌癌的理想濃度。 陳慧等[18]采用100 μg/ml、50 μg/ml、10 μg/ml的4NQO通過(guò)飲水法作用于C57BL/6小鼠，結(jié)果可以觀察到舌和食管的病變經(jīng)歷了單純性上皮增生—異常增生—原位癌—浸潤(rùn)性癌這樣一個(gè)經(jīng)典的鱗狀上皮細(xì)胞癌的病變過(guò)程。El-Rouby DH等[19]使用4NQO飲水法成功誘導(dǎo)出舌鱗狀細(xì)胞癌。Zhou G等[20]采用100 μg/ml的4-NQO飲用水喂養(yǎng)CBA小鼠8周，成功建立小鼠口腔癌模型。

1.3.3DMBA 或MCA直接注射法 張寶平等[21]選取60只金黃地鼠采用預(yù)設(shè)濃度為0.4%,0.3%,0.2%,0.1%的DMBA丙酮注射法建立金黃地鼠頰囊癌模型,結(jié)果顯示12W時(shí)成癌率分別為25%，87%，42%，58%。李懷奇等[22]采用2%DMBA溶液注射入20只大鼠的頜下腺(每只0.05 ml)，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)1周后給予含0.05%苯巴比妥的飼料喂養(yǎng)3個(gè)月，結(jié)果誘瘤率為22%。馬長(zhǎng)路等[23]將MCA直接注射于46只SD大鼠頜下腺腺體內(nèi),共誘發(fā)產(chǎn)生腫瘤34例,其中鱗狀細(xì)胞癌4例,平滑肌肉瘤30例。

1.3.4DMBA局部植入法 Sumitomo等[24]用DMBA明膠海綿塊植入法成功誘發(fā)腫瘤，病理證實(shí)為鱗癌。曹選平等[25]用含有2%DMBA的明膠海綿塊(1 mm×1 mm×1 mm,約含DMBA 1.0 mg)植入大鼠頜下腺體內(nèi)的方法,對(duì)50只SD大白鼠頜下腺進(jìn)行誘癌實(shí)驗(yàn),共誘發(fā)腫瘤21例,均為鱗狀細(xì)胞癌。

2 腫瘤細(xì)胞株接種法或腫瘤組織塊移植法

這是80年代初興起的一種方法，即將活體腫瘤細(xì)胞株或腫瘤組織塊植入動(dòng)物體內(nèi)而建立腫瘤動(dòng)物模型。此類(lèi)制作方法的優(yōu)點(diǎn)是保留了人類(lèi)口腔癌的部分病理學(xué)、生物學(xué)特性，可以觀察到腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程；缺點(diǎn)是需要一定的外科手術(shù)技術(shù)和無(wú)菌條件，每次接種耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受手術(shù)創(chuàng)傷較大，術(shù)后感染、創(chuàng)口的粘連、腫瘤壞死率高等。

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇 目前該種實(shí)驗(yàn)方法常用的動(dòng)物是小鼠、裸鼠和新西蘭大白兔等。用在腫瘤原位移植中的小鼠體重一般為 18～24 g；裸鼠，鼠齡 3～5 周，體重一般為 18～20 g。近年來(lái)，許多學(xué)者選擇應(yīng)用新西蘭大白兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立口腔癌動(dòng)物模型，且所建立的動(dòng)物模型與人類(lèi)口腔癌相似，而且由于兔體質(zhì)量相對(duì)較大，有利于CT等影像設(shè)備成像顯示，同鼠類(lèi)小動(dòng)物模型相比有無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)。用在實(shí)驗(yàn)中的新西蘭大白兔一般為 2～3 個(gè)月齡，體重 1.5～2.0 kg 。

2.2腫瘤細(xì)胞系或株的選擇 常用的細(xì)胞系或株有Tca8113細(xì)胞系、AT-84細(xì)胞系、SCC Ⅶ細(xì)胞系等，近年來(lái)許多學(xué)者嘗試應(yīng)用VX2細(xì)胞株。VX2細(xì)胞株是一種得到廣泛承認(rèn)的可移植的腫瘤細(xì)胞株,具有誘導(dǎo)時(shí)間短、侵襲性強(qiáng)、血供豐富、種植成功率高的特點(diǎn)，且生物學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，可種植于兔的多個(gè)部位建立原位腫瘤動(dòng)物模型，早期就可發(fā)生肝、肺、縱隔等處轉(zhuǎn)移[26]。用VX2腫瘤細(xì)胞株建立口腔局部腫瘤模型發(fā)展較臨床其他疾病研究晚許多，也是近幾年來(lái)才有學(xué)者試著用VX2瘤株植入到兔舌部或頰部等部位來(lái)建立動(dòng)物模型，且初步研究證明所建立的這種兔VX2鱗狀細(xì)胞癌模型操作簡(jiǎn)單，成瘤率高，且其在生化學(xué)、形態(tài)學(xué)和生物學(xué)行為上與人類(lèi)鱗狀細(xì)胞癌具有較高的相似性，而且不會(huì)產(chǎn)生特異性的抗體，能較好的體現(xiàn)原位癌的特點(diǎn)。 Jefferis等[27]首先報(bào)道了兔舌VX2鱗癌模型的建立。

2.3實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1人類(lèi)口腔癌種植于裸鼠 Cui等[28]采用人體鱗癌細(xì)胞懸浮液(細(xì)胞濃度1×105個(gè)/ml)注入鼠咀嚼肌，成功的建立了下頜骨鱗癌浸潤(rùn)動(dòng)物模型。Qiu等[29]將人舌癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移標(biāo)本同位移植到裸鼠的舌部，成功建立了舌鱗狀細(xì)胞癌裸鼠模型。 張燕等[30]選取新鮮的口腔鱗癌手術(shù)標(biāo)本,制備成1 mm3組織塊，植入BALB/c nu-nu裸鼠皮下，成瘤率為56%(15/27)。唐瞻貴等[31]將人口腔疣狀癌伴灶性鱗癌頸淋巴轉(zhuǎn)移組織,通過(guò)組織塊皮下接種法建立轉(zhuǎn)移灶模型，成瘤率87.5% (7/8)，且移植瘤具有人疣狀口腔癌轉(zhuǎn)移灶組織類(lèi)似的形態(tài)學(xué)特征。

2.3.2細(xì)胞系注射法 常用細(xì)胞系有Tca8113、AT-84、SCC Ⅶ細(xì)胞系等。余楊等[32]通過(guò)在裸鼠舌體及頰黏膜內(nèi)注射接種Tca8113細(xì)胞，建立移植瘤動(dòng)物模型；結(jié)果13只舌體接種移植瘤裸鼠中，有 3只出現(xiàn)下頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，5只出現(xiàn)淋巴結(jié)微灶轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率達(dá)到61.54%。15 只頰黏膜接種移植瘤裸鼠中，3 只出現(xiàn)下頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，3 只出現(xiàn)淋巴結(jié)微灶轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為 40.00%。 姚金光等[33]將舌鱗狀細(xì)胞癌Tca-8113細(xì)胞注射于裸鼠爪墊皮下的方法建立舌鱗狀細(xì)胞癌淋巴道轉(zhuǎn)移裸鼠模型，成瘤率為67.5%。Takeshi Nomura 等[34]將SCC Ⅶ細(xì)胞系注射入C3H/HeN 小鼠的咬肌區(qū)域，建立了侵犯頜骨的口腔癌模型。

2.3.3動(dòng)物瘤株或組織塊口腔原位種植 最常用的為VX2細(xì)胞株。此類(lèi)制作方法細(xì)分為VX2細(xì)胞懸液注射，VX2組織塊接種法，VX2瘤組織塊懸液注射法[26]。Lin LM等[35]將VX2新鮮實(shí)體瘤塊種植到8只兔子的左臉頰,造成口腔潰瘍，6周后，8只動(dòng)物均發(fā)現(xiàn)低分化SCCs腫瘤生長(zhǎng)，無(wú)內(nèi)部器官轉(zhuǎn)移，在8只兔子中的4只發(fā)現(xiàn)11個(gè)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，平均每只兔子2.75頸部淋巴結(jié)，同時(shí)還注意到1只動(dòng)物有下顎骨和牙齒牙髓癌細(xì)胞入侵；結(jié)果表明，兔VX2誘導(dǎo)兔口腔癌可能是人類(lèi)口腔黏膜鱗狀細(xì)胞癌中潛在的癌癥模型。Liao GQ等[36]采用VX2組織塊移植法建立兔VX2舌鱗癌移植瘤模型，成瘤率為83.3%。田軍等[37]采用3種不同移植瘤方法：瘤組織塊植入法、改良瘤細(xì)胞懸液注入法、瘤細(xì)胞懸液注入法，于兔舌側(cè)緣中1/3黏膜下建立穩(wěn)定的兔VX2舌鱗癌移植瘤模型，成瘤率分別為83.3%，91.7%，33.3%,局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為71.4%，100.0%，37.5%,肺轉(zhuǎn)移率分別為35.7%，81.3%，0。沈毅等[38]將新西蘭白兔20只,隨機(jī)分為4組,每組5只,分別植入VX2鱗癌瘤塊，結(jié)果總成瘤率為75%,其中舌緣80%,舌中線(xiàn)區(qū)70%,頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均70%,舌癌和頸部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)均為低分化鱗癌。

3 轉(zhuǎn)基因法

這是 90 年代以來(lái)新發(fā)展起來(lái)的一種實(shí)驗(yàn)方法，常用的方法主要有顯微注射法、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法、胚胎干細(xì)胞法、電脈沖法、精子載體導(dǎo)入法等。此類(lèi)制作方法的優(yōu)點(diǎn)是：可以從分子水平研究口腔癌的形成過(guò)程中各種分子的改變；利用此技術(shù)可以精確地失活某些基因或增強(qiáng)某些基因的表達(dá)。缺點(diǎn)是：通常有外源基因的引入；轉(zhuǎn)錄效率低；在宿主基因組中的行為難以控制；導(dǎo)致基因的完全突變或缺失；有時(shí)不能表達(dá)或表達(dá)混亂以及不能遺傳給后代等；且轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的成活率低，易形成多個(gè)原發(fā)腫瘤且不能形成多個(gè)突變和轉(zhuǎn)移等。因此，這種制作方法也不常應(yīng)用。

4 展望

近年來(lái)隨著口腔頜面部腫瘤動(dòng)物模型的制作成功，尤其是兔VX2口腔頜面部腫瘤動(dòng)物模型的建立獲得了較滿(mǎn)意的效果，為研究相關(guān)腫瘤的生物學(xué)行為提供了臨床依據(jù)。在大型動(dòng)物模型的研究上具有很高的應(yīng)用價(jià)值，擬用于臨床抗癌藥物的篩選，最佳化療方案的選擇，一些緩釋藥物在口腔腫瘤治療中的應(yīng)用及放化療結(jié)合治療在頜面部轉(zhuǎn)移癌的療效機(jī)制。隨著認(rèn)識(shí)的不斷深入，兔VX2口腔頜面部腫瘤模型將會(huì)被應(yīng)用于更多的領(lǐng)域。

[1] Michael King, Kourt Chatelain, Dustin Farris, et al. Oral squamous cell carcinoma proliferative phenotype is modulated by proanthocyanidins: a potential prevention and treatment alternative for oral cancer[J]. BMC Complement Altern Med，2007, 19(7): 22.

[2] Ragin CC, Modugno F, Gollin SM. The epidemiology and risk factors of head and neck cancer: a focus on human papillomavirus[J]. J Dent Res，2007,86(2):104-114.

[3] 鄭艷利.Wistar大鼠口腔粘膜癌變過(guò)程的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志,2007,44(4)：41-44.

[4] Wani MK, Yarber RH, Ahmed A, et al. Cancer induction in the DMBA hamster cheek pouch: a modified technique using a promoter[J].Laryngoscope,2001, 111(2)：204-206.

[5] Gannot G, Buchner A, Keisari Y. Interaction between the immune system and tongue squamous cell carcinoma induced by 4-nitroquinoline N-oxide in mice[J].Oral Oncol, 2004, 40(3)：287-297.

[6] 童樹(shù)友,周健.兔口腔VX2腫瘤模型建立的實(shí)驗(yàn)研究[D].合肥：安徽醫(yī)科大學(xué),2008.

[7] 陳萬(wàn)濤.4-硝基喹啉-1-氧化物誘發(fā)大鼠舌黏膜鱗癌模型和分子發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用口腔科雜志,2010,3(7)：10-13.

[8] Nagini S,Letchoumy PV,ATCr R． Of humans and hamsters：a comparative evaluation of carcinogen activation,DNA damage,cell proliferation,apoptosis,invasion,and angiogenesis in oral cancer patients and hamster buccal pouch carcinomas[J]． Oral Oncol,2009,45(6)：31-37．

[9] 邱存平,溫玉明,王昌美. 金黃地鼠舌癌模型的建立及其頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[J].2000,16(1)：10-12.

[10] 鄭金華, 王琪, 李會(huì)平,等.二甲基苯并蒽涂抹聯(lián)合創(chuàng)傷誘發(fā)舌癌模型的比較研究[J].解剖學(xué)研究,2007,29(6)：10-12.

[11] Cavalcante DR, de Oliveira PS. Effect of green propolis on oral epithelial dysplasia in rats[J].Braz J Otorhinolaryngol,2011,77(3):278-284.

[12] Burns JA, Lopez-Guerra G, Kobler JB, et al.Pulsed potassium-titanyl-phosphate laser photoangiolytic treatment of mucosal squamous cell carcinoma in the hamster cheek pouch[J].Laryngoscope,2011,121(5):942-946.

[13] Hsu WH, Lee BH, Pan TM.Effects of red mold dioscorea on oral carcinogenesis in DMBA-induced hamster animal model[J].Food Chem Toxicol,2011,49(6):1292-1297.

[14] Rajkamal G, Suresh K, Sugunadevi G, et al.Evaluation of chemopreventive effects of Thymoquinone on cell surface glycoconjugates and cytokeratin expression during DMBA induced hamster buccal pouch carcinogenesis[J].BMB Rep,2010, 43(10):664-669.

[15] 段開(kāi)文,張蕓,楊保秀,等.大鼠實(shí)驗(yàn)性口腔癌前病變模型的建立及意義[J]. 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004,25(3)：39-41.

[16] 李文薈,周磊,耿華歐,等.舌癌動(dòng)物模型的建立[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2002,20(2):8-9.

[17] 卜冬平,馬國(guó)武.兩種濃度4NQO飲水法誘發(fā)小鼠舌癌及癌前病變動(dòng)物模型的比較[J].口腔醫(yī)學(xué)研究, 2008,24( 3): 35-38.

[18] 陳慧,高鑫,李剛,等.4NQO誘發(fā)C57BL/6小鼠舌癌及食管鱗狀細(xì)胞癌模型的建立[J].蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010,30(5)：81-83.

[19] El-Rouby DH.Histological and immunohistochemical evaluation of the chemopreventive role of lycopene in tongue carcinogenesis induced by 4-nitroquinoline-1-oxide[J].Arch Oral Biol,2011,56(7):664-671.

[20] Zhou G, Hasina R, Wroblewski K, et al.Dual inhibition of vascular endothelial growth factor receptor and epidermal growth factor receptor is an effective chemopreventive strategy in the mouse 4-NQO model of oral carcinogenesis[J].Cancer Prev Res (Phila),2010,3(11):1493-1502.

[21] 張寶平.金黃地鼠口腔頰囊癌動(dòng)物模型在重離子放射治療中的應(yīng)用[D].蘭州：蘭州大學(xué),2011.

[22] 李懷奇,邢樹(shù)忠,陳中堅(jiān),等.SD大鼠頜下腺腫瘤動(dòng)物模型的建立[J].口腔醫(yī)學(xué),2005,25(2):108-110.

[23] 馬長(zhǎng)路,張?jiān)茲h,郝志芳,等.頜下腺腫瘤動(dòng)物模型的建立[J].河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1997,32(3):60-62.

[24] Sumitomo S, Hashimura K, Mori M. Growth pattern of experimental squamous cell carcinoma in rat submandibular glands—an immunohisto chemical evaluation[J]. Eur J Cancer B Oral Oncol,1996,32(2):97-105.

[25] 曹選平,劉學(xué)軍,郝志芳,等.頜下腺鱗狀細(xì)胞癌動(dòng)物模型的建立[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2000,18(3)：156-158.

[26] 俆加菊,葉欣.兔VX2腫瘤動(dòng)物模型的建立[J].泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,31(3)：71-74.

[27] Jefferis AF, Berenbaum MC. The rabbit VX2 tumor as a model for carcinomas of the tongue and larynx[J]. Acta Otolaryngol, 1989,108(1-2):152-601.

[28] Cui N,Nomura T,Noma H,et al.Effect of YM529 on a model of mandibular invasion by oral squamous cell carcinoma in mice[J].Clin Cancer Res,2005,11(7)：2713-2719.

[29] Qiu C,Wu H,He H,et al.A cervical lymph node metastatic model of human tongue carcinoma: Serial and orthotopic transplantation of histologically intact patient specimens in nude mice[J].J Oral Maxillofac Surg,2003,61(6)：696-700.

[30] 張燕, 張萍,陳萬(wàn)濤.人口腔鱗癌手術(shù)標(biāo)本組織塊裸鼠移植瘤模型的建立 [J].口腔頜面外科雜志, 2008,18(4) :34-38.

[31] 王月紅,陳明偉,唐瞻貴,等.口腔疣狀癌伴灶性鱗癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶裸鼠移植瘤模型的建立[J]. 上?？谇会t(yī)學(xué),2010,19(1):55-59.

[32] 余楊,邱蔚六,呂燕,等.Tca8113細(xì)胞系下頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的建立[J].口腔頜面外科雜志,2009,19 (3 ):159-163.

[33] 姚金光,鄺曉聰,溫冠媚.舌鱗狀細(xì)胞癌淋巴道轉(zhuǎn)移裸鼠模型建立的實(shí)驗(yàn)研究[J].右江醫(yī)學(xué)，2006,34(6):581-583.

[34] Nomura T,Shibahara T,Katakura A,et al． Establishment of a murine model of bone invasion by oral squamous cell carcinoma[J]． Oral Oncol,2007,43(3)：257-262．

[35] Lin LM, Chen YK, Chen CH, et al. VX2-induced rabbit buccal carcinoma: a potential cancer model for human buccal mucosa squamous cell carcinoma[J]. Oral Oncol, 2009 ,45(11):196-203.

[36] Liao GQ, Tian J, Liu HC, et al.Establishment of transplanted model of VX2 tongue carcinoma in rabbits and observation of their major biological features [J].China Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, 2009,29(3):62-66.

[37] Tian J, Liao GQ, Liu HC,et al.A comparison of three methods in establishing transplanted model of VX2 tongue carcinoma in rabbits [J].West China Journal of Stomatology, 2009,27(3):326-329.

[38] 沈毅,孫堅(jiān),周曉健,等. 兔舌不同部位 VX2 鱗癌與頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型的生物學(xué)特性[J].上海口腔醫(yī)學(xué).2007,16(5):497-501.