駱震　王明友　張紅

摘 要：以千代田錦一年生健壯幼芽為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，探索了千代田錦的組培快繁技術(shù)，為其工廠化生產(chǎn)提供依據(jù)。結(jié)果表明：最佳啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+20 mg/L 6-BA+01 mg/L NAA，接種40 d后即可誘導(dǎo)出芽；增殖培養(yǎng)以MS+20 mg/L 6-BA+05 mg/L NAA較適宜；根的誘導(dǎo)以 1/2MS（大量元素減半）+ 05 mg/L NAA+05 mg/L IBA為其最適培養(yǎng)基。

關(guān)鍵詞：千代田錦；組培快繁

中圖分類號(hào)：S682.360.4+7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2012）11-0052-03

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation

Technique of Aloe variegata

Luo Zhen， Wang MingYou， Zhang Hong*

（Department of Agronomy ， Dezhou College， Dezhou 253023， China）

Abstract To provide theoretical guidance for the industrial production of Aloe variegate， its tissue culture and rapid propagation technologies were explored with the haleness plumules as explants and MS as basic medium. The results indicated that the optimum startup culture medium was MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA， and the buds could be induced after 40 days. MS+2.0 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA was better for multiplication， and 1/2MS （major elements was halved）+ 0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA was the optimum one for rooting culture.

Key words Aloe variegata； Tissue culture and rapid propagation

千代田錦是百合科蘆薈屬多年生肉質(zhì)草本植物，又叫什錦蘆薈、翠花掌、蛇皮掌。葉片三角狀披針形，肥厚多汁，邊緣具不明顯鈍齒；葉色濃綠油亮，上布許多白色斑點(diǎn)，并形成不規(guī)則的橫紋，株形俏麗，儀態(tài)剛健，是極富觀賞價(jià)值的高檔賞葉花卉。其常規(guī)繁殖多采用分株，繁殖系數(shù)較低[1，2]。本試驗(yàn)研究了該植物的組培快繁技術(shù)，對(duì)于其工廠化生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

11 試驗(yàn)材料

千代田錦一年生幼苗。

12 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

均以MS為基本培養(yǎng)基，添加瓊脂8 g及不同濃度的激素，啟動(dòng)、增殖培養(yǎng)基蔗糖添加量為30 g，生根培養(yǎng)基蔗糖為15 g，pH 58～60，培養(yǎng)室的溫度為24～26℃，光照時(shí)數(shù)為每天12 h。

13 啟動(dòng)培養(yǎng)

選取千代田錦一年生幼苗，流水沖洗干凈，去掉根，在無(wú)菌條件下用70%的酒精消毒10 s，再用01% HgCl2溶液消毒3～5 min，并加吐溫3～4滴，無(wú)菌水沖洗3～5次。將消毒的材料置于無(wú)菌濾紙上吸干水分，基部略去掉一點(diǎn)，葉片剝掉，把莖段一分為二，即成外植體。然后分別接種在S1：MS+6-BA 10+NAA 01（激素單位為mg/L，下同）； S2 ：MS+6-BA 20+NAA 01；S3：MS+6-BA 30+NAA 01三種培養(yǎng)基上，每瓶接1個(gè)材料，共接30瓶。14 增殖培養(yǎng)

將啟動(dòng)培養(yǎng)基上獲得的再生芽分別接種于A1：MS+6-BA 10+NAA 01；A2：MS+6-BA 10+NAA 05；A3：MS+6-BA 15+NAA 01；A4：MS+6-BA 15+NAA 05；A5：MS+6-BA 20+NAA 01；A6：MS+6-BA 20+NAA 05六種培養(yǎng)基中，每處理接種10瓶，每瓶接3個(gè)芽，一個(gè)月后觀察增殖培養(yǎng)效果。

15 生根培養(yǎng)

取健壯的增殖再生芽接到B1：1/2MS+NAA 01；B2：1/2MS+IBA 05；B3：1/2MS+NAA 05；B4：1/2MS+NAA 05+IBA 05四種生根培養(yǎng)基上，每處理接種10瓶，每瓶接3個(gè)再生芽，觀察生根情況。

16 煉苗移栽

當(dāng)組培苗根長(zhǎng)到2～3 cm時(shí)，將組培瓶拿到培養(yǎng)室外，放到自然散射光下，將瓶蓋擰松，煉苗3 d；用清水把根沖洗干凈，然后栽種到高壓蒸汽滅菌的腐熟有機(jī)肥和蛭石以1∶ 1比例混合的基質(zhì)中，栽好的苗澆透水，放到散射光下，覆膜保濕，3～5 d后開始放風(fēng)，逐漸把膜去掉，待苗開始生長(zhǎng)后再移到較強(qiáng)的光照下。

2 結(jié)果與分析

21 啟動(dòng)培養(yǎng)情況

接種后10 d統(tǒng)計(jì)污染率，三種培養(yǎng)基污染率均較低，在10%～20%之間。30 d后觀察成活外植體的生長(zhǎng)狀況，發(fā)現(xiàn)接種的莖段都有所膨大，隨著BA 濃度的增加，外植體體積增加也越大，S1培養(yǎng)基上莖段的體積約為原有體積的1～2倍，芽點(diǎn)較少，顏色深綠；S2培養(yǎng)基上莖段的體積大約為原有體積的4～5倍，有突起的芽點(diǎn)形成，顏色綠；S3培養(yǎng)基上莖段的體積大約為原有體積的6～7倍，突起的芽點(diǎn)較多，顏色淺綠。40 d后莖段上有不定芽形成，其中以S3培養(yǎng)基上分化的芽最多，1 cm莖段形成約11個(gè)芽，芽細(xì)高、顏色淺綠，白色斑點(diǎn)淡化，出現(xiàn)了玻璃化現(xiàn)象；S2培養(yǎng)基分化的芽略少于S3培養(yǎng)基，1 cm莖段形成約9個(gè)芽，但芽較粗壯，色綠；S1培養(yǎng)基只有少量的芽形成，芽深綠、粗壯。

22 增殖培養(yǎng)情況

將經(jīng)過(guò)啟動(dòng)培養(yǎng)獲得的不定芽接種于增殖培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)低濃度的BA可以促進(jìn)芽增殖，但增殖系數(shù)低，芽生長(zhǎng)緩慢，隨著BA濃度的增加，芽的誘導(dǎo)率逐漸增加，BA濃度為20 mg/L時(shí)，芽的增殖率最高，生長(zhǎng)速度最快（見圖1、表1）。當(dāng)BA濃度一定，NAA濃度由01 mg/L增加到05 mg/L時(shí)，芽的增殖率雖有所下降，但芽的高度有所增加。綜合考率，千代田錦增殖的最佳培養(yǎng)基為A6：MS+6-BA 20+NAA 05。

圖1 不定芽的增殖

圖2 組培苗的生根

表1

不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽增殖的影響

培養(yǎng)

基 接種

芽數(shù)（個(gè)） 形成

芽數(shù)（個(gè)） 增殖

系數(shù) 芽的生

長(zhǎng)狀況

A1 30 67 22 暗綠，粗矮

A2 30 45 15 暗綠，粗矮

A3 30 98 33 較粗壯，葉深綠，較矮

A4 30 84 28 較粗壯，葉深綠，較矮

A5 30 164 55 細(xì)，葉綠，較高

A6 30 128 43 粗壯，葉綠，高

23 生根培養(yǎng)

組培苗生根的速度以B4培養(yǎng)基最快，其次為B3、B2，大約5 d左右可見白色的根原基，10 d左右根長(zhǎng)在2 cm左右。B1培養(yǎng)基生根最慢，15 d后才見少量苗有根生成。生根率和根數(shù)也存在差異，其中以B4培養(yǎng)基的生根數(shù)最多，且根的質(zhì)量較好，說(shuō)明適宜濃度的NAA和IBA有利于根的生成。由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+05 mg/L NAA+05 mg/L IBA （表2）。

表2

不同培養(yǎng)基對(duì)組培苗生根的影響

生根培養(yǎng)基 接種苗數(shù)

（株） 生根苗數(shù)

（株） 生根率

（%） 平均根數(shù)

（條/株）

B1 30 14 47 03

B2 30 21 70 16

B3 30 30 100 28

B4 30 30 100 42

24 煉苗與移栽

煉苗結(jié)束后將組培苗栽種到經(jīng)高壓蒸汽滅菌的腐熟有機(jī)肥和珍珠巖以1∶ 1比例混合的基質(zhì)中，澆透水，覆膜保濕，將栽好的苗放到散射光下，注意每天適量噴水，逐漸把膜去掉，待生長(zhǎng)比較穩(wěn)定后再逐漸放到較強(qiáng)的光照下，移栽后的成活率達(dá)95%以上。

3 小結(jié)

以千代田錦的莖段為外植體較宜誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生，芽的分化生長(zhǎng)是NAA和6-BA共同作用的結(jié)果，兩者比例大時(shí)利于芽的分化，比例小時(shí)利于芽的生長(zhǎng)；適宜濃度的NAA和IBA可相互促進(jìn)，有利于千代田錦根的生成。本研究發(fā)現(xiàn)，啟動(dòng)培養(yǎng)以MS+20 mg/L 6-BA+01 mg/L NAA 為培養(yǎng)基較適宜，芽分化多，較健壯，無(wú)玻璃化；增殖培養(yǎng)以MS+20 mg/L 6-BA+05 mg/L NAA較適宜，根的誘導(dǎo)以1/2MS（大量元素減半）+05 mg/L NAA +05 mg/L IBA為其最適培養(yǎng)基。參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 楊乃博 蛇皮掌的組織培養(yǎng)[J] 植物生理學(xué)通訊，1994，30（2）：120

[2] 兌寶峰 葉奇花艷翠花掌[J] 花友俱樂部，2004，3：38