束曉玉

芪黃顆粒劑為黃芪和大黃等中藥精制而成，可清熱祛邪、扶正固本、調(diào)節(jié)免疫，臨床上常用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡等病，多年的臨床結(jié)果顯示其療效確切［1-2］。本文采用HPLC法測(cè)定芪黃顆粒劑中大黃素含量。

1 儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀(美國(guó)，2487型紫外檢測(cè)器，1525型輸液泵，717自動(dòng)進(jìn)樣器，2996型檢測(cè)器，waterts Empower色譜軟件)，電子天平(SartorisBS110S十萬(wàn)分之一天平)。芪黃顆粒劑為本院制備，大黃素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，水為重蒸水，甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法

2.1色譜條件 色譜柱為ZORBAX SB C18(規(guī)格:4.6 mm×250 mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(11∶1)，流速每分鐘 1.0 ml，柱溫室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為 290 nm，進(jìn)樣量取 10 μl。

2.2供試品溶液的制備 稱取10.0 g芪黃顆粒劑，研細(xì)，過(guò)2號(hào)篩，混勻，精密稱10.7400 g。浸泡于100 ml甲醇中過(guò)夜，過(guò)濾。吸取20 ml濾液，在水浴上將甲醇揮去，加20 ml重蒸水溶解，加入4 ml鹽酸，然后在沸水上進(jìn)行酸化30 min，室溫冷卻后再用氯仿萃取四次(30、20、20、20 ml)最終合并氯仿液。在水浴上揮干氯仿，用甲醇溶解殘?jiān)?，然后?0 ml容量瓶中定容，即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品3.42 mg至25 ml容量瓶中，加入甲醇溶解至刻度，即得對(duì)照品貯備液。精密適量地吸取對(duì)照品貯備液，加入甲醇制成含大黃素為0.0820 mg/ml對(duì)照品溶液。

2.4重復(fù)性試驗(yàn) 精密取同一批次樣品，批號(hào)為20110428，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，并根據(jù)上述的色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得供試品中蘆薈大黃素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.0%，說(shuō)明本法的重復(fù)性較好。

2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取上述0.0082 mg/ml大黃素對(duì)照品溶液10L，連續(xù)依法進(jìn)樣5次，測(cè)得RSD=0.37%，λ=74985.2，說(shuō)明本儀器具有良好的精密度。

表1 大黃素含量的檢測(cè)結(jié)果

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取供試品溶液后，立即進(jìn)行色譜分析，每隔一定的時(shí)間進(jìn)樣一次，測(cè)定峰面積的積分1 d，測(cè)得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSI=1.0%，說(shuō)明大黃素在室溫1 d內(nèi)的穩(wěn)定性佳。

2.7加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取芪黃沖劑4份，分別在3份中加入0.8、1.2、1.6 ml對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下制備回收率試驗(yàn)溶液。獲取1個(gè)樣品液與3個(gè)不同濃度的加樣樣品液，分別吸取10μL進(jìn)樣，依法測(cè)定。得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=1.11%，平均回收率為96.59%(n=3)。說(shuō)明該方法具有較好的準(zhǔn)確性。

2.8樣品測(cè)定 稱取本品10 g，研細(xì)，過(guò)2號(hào)篩，混勻，精密稱取2.0 g，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，精密吸取10μL供試品溶液，并根據(jù)上述的色譜條件下測(cè)定。測(cè)得結(jié)果見表1，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)，3個(gè)平均含量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

3 討論

芪黃顆粒劑中大黃素主要以游離及結(jié)合苷形式存在，故使用酸水解法裂解大黃素苷，從而生成苷元大黃素，因此可更準(zhǔn)確檢測(cè)指標(biāo)性成分含量。本研究結(jié)果顯示，HPLC法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，為芪黃顆粒劑中大黃素含量測(cè)定提供了科學(xué)、專屬的方法。

［1］陳巖，黃青，劉秀華，等.HPLC法測(cè)定婦炎消片中大黃素及大黃酚的含量.中國(guó)藥師，2008，11(9):1074-1076.

［2］張翠，劉穎，王曉白.HPLC測(cè)定芪丑湯中大黃素的含量.黑龍江醫(yī)藥，2008，21(2):1-2.