陳海燕， 唐 俊， 劉曉薇， 吳開亞

（1.合肥工業(yè)大學(xué) 資源與環(huán)境工程學(xué)院，安徽 合肥 230009；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 資源與環(huán)境學(xué)院，安徽 合肥 230036；3.北京師范大學(xué)環(huán)境學(xué)院，北京 100875）

甲維鹽的活性高、殘留少、毒性低、安全性好、劑型先進，是一種高效、低毒、綠色環(huán)保的生物農(nóng)藥［1］，主要用于防治甘藍、菜花等蔬菜田中的小菜蛾等害蟲和魚類養(yǎng)殖中的寄生蟲，其毒性較阿維菌素低。雖然甲維鹽生物毒性低，選擇性強，但是抗性的產(chǎn)生速度比較快［2］。文獻［3］采用田間試驗對甲維鹽在甘藍和土壤中的殘留動態(tài)進行了研究，并在室內(nèi)研究了甲維鹽在滅菌與非滅菌土壤中的降解情況。文獻［4］研究了甲維鹽微乳劑藥液在結(jié)球甘藍葉和水稻葉上的表面張力特性及展布情況，結(jié)果表明甲維鹽微乳劑藥液的表面張力小于結(jié)球甘藍葉和水稻葉臨界表面張力。文獻［5］采用反相高效液相色譜法對煙草及土壤中甲維鹽進行殘留量分析，結(jié)果表明其在煙葉中的平均回收率為94.92%～102.18%，相對標準偏差為2.66%～3.69%；在土壤中的平均回收率為96.76%～99.02%，相對標準偏差為2.23%～4.48%。對于菜地生態(tài)系統(tǒng)中該藥的研究較少，且隨著該藥在蔬菜上的廣泛使用，有必要對于其中的消解動態(tài)情況進行詳細研究。

對于甲維鹽的測定，一般采用LC－MS－MS法［6］、柱 前 衍 生－HPLC－FLD［7］和 HPLC－UVD法［8］進行蔬菜中的含量分析。本文采用 HPLCFD方法研究安徽、重慶兩地1%甲維鹽微乳劑在小青菜上的殘留消解動態(tài)，結(jié)果表明甲維鹽在菜地生態(tài)系統(tǒng)中的使用是安全、有效的，從而為該農(nóng)藥的消解速率評價和食用安全評估提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

采用的儀器設(shè)備如下：Agilent1200高效液相色譜儀（熒光檢測器），美國安捷倫科技有限公司（色譜柱為EclipseXDB－C18，4.6mm×150mm）；多功能食品粉碎機，SQ2119，上海帥佳電子科技有限公司；SHA－C水浴恒溫振蕩器，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；氮吹儀，N－EVAPTM112，Organomation Associates，Inc；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RE－52AA型，上海青浦滬西儀器廠；電子天平，F(xiàn)A1104型，上海天平儀器廠；TPZ5多管架自動平衡離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司；離心管；量筒；濃縮瓶；容量瓶、三角瓶、漏斗等各種玻璃器皿。

1.2 試劑

試劑如下：甲維鹽標準品（97.6%，國家農(nóng)藥標準中心）；甲維鹽1%微乳劑（佳木斯興宇化學(xué)有限公司）；乙腈（GR，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司）；無水Na2SO4（AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；氯化鈉（AR，上海市試劑一廠）；乙酸乙酯（AR，汕頭市西隴化工廠有限公司）；二氯甲烷（AR，汕頭市西隴化工廠有限公司）、丙酮（AR，上海振企化學(xué)試劑有限公司）、N－甲基咪唑（上?；瘜W(xué)試劑研究所）、三氟乙酸酐（上海天蓮精細化工有限公司）、蒸餾水等。

1.3 田間試驗及樣品制備

試驗時間為夏季；安徽和重慶的年均氣溫為15～16℃與16～18℃，濕度均為70%左右。

按照我國農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所頒布的農(nóng)藥殘留試驗準則進行了田間試驗設(shè)計，每個小區(qū)面積為30m2，小青菜出苗后20d，用甲維鹽1%微乳劑兌水噴霧，施藥劑量為9g／ha，噴霧后2h、1、2、3、5、7、14、21d采集小青菜全株，去除根后切碎，四分法分樣后留200g，放入－20℃冰箱保存?zhèn)錅y。

1.4 室內(nèi)分析步驟

1.4.1 提取

稱取10g經(jīng)處理后的小青菜樣品和5g的NaCl于50mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯與水的混合溶液（體積比1∶1），在恒溫振蕩器上振蕩提取30min，提取3次。4000r／min離心5min。收集上清液過無水硫酸鈉于150mL的濃縮瓶中，40℃下濃縮至近干，用6mL丙酮洗入5mL棕色容量瓶中，用氮氣吹干，再用1mL乙腈溶解，待衍生化。

1.4.2 衍生化

通過三氟乙酸酐和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的反應(yīng)，使甲維鹽衍生化，產(chǎn)生熒光性基團，因而可以對熒光檢測器產(chǎn)生高靈敏度的響應(yīng)。該衍生化反應(yīng)與阿維菌素的衍生化反應(yīng)原理類似，是一項研究較為成熟的反應(yīng)，很多文獻都有涉及，因此，本試驗采用此方法對甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽進行了衍生化反應(yīng)。

在待衍生化樣品（小青菜植株）中加入250μL N－甲基咪 唑試劑，混旋 30s；再加 入250μL三氟乙酸酐試劑，此時有大量白色霧氣，需立即將蓋子蓋緊，混旋30s；避光靜置30min后取樣進行HPLC分析。

1.5 液相色譜檢測條件

色譜柱為EclipseXDB－C8，4.6mm×150mm；柱溫30℃，流動相為乙腈的水溶液（體積比93∶7）。流速為1.0mL／min，熒光檢測器，激發(fā)波長為365nm，發(fā)射波長為475nm，進樣體積為20μL。

1.6 殘留量計算公式

殘留量公式為：

其中，R樣為從標準曲線上計算出樣品中甲維鹽質(zhì)量；V終為樣品溶液的最終定容體積；X為測定溶液占總提取液的比例；V樣為樣品溶液進樣體積；W為樣品質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線

吸取不同質(zhì)量比甲維鹽標準溶液（用乙腈配制）1mL進行衍生化，步驟如前所述。采用外標法對甲維鹽進行定量計算。以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線，如圖1所示。甲維鹽標樣色譜圖如圖2所示，其保留時間為10.4min左右。

圖1 甲維鹽標準曲線

圖2 甲維鹽標樣色譜圖

2.2 添加回收實驗

在0.10～0.01mg／kg質(zhì)量比范圍甲維鹽進行不同質(zhì)量比添加回收實驗，結(jié)果見表1所列。

由表1可知，小青菜中3個添加質(zhì)量比平均回收率為80.43%～87.53%，回收率比較高，說明實驗所使用的方法是可靠的；變異系數(shù)為8.48%～10.91%，在農(nóng)藥殘留測定所允許的范圍內(nèi)；甲維鹽的最小檢出量為0.2ng，甲維鹽最低檢測質(zhì)量比為0.01mg／kg，符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

甲維鹽空白及添加回收樣品色譜圖如圖3、圖4所示。

表1 小青菜中甲維鹽添加回收結(jié)果

圖3 小青菜空白樣品色譜圖

圖4 小青菜添加0.01mg／kg色譜圖

2.3 甲維鹽在小青菜中消解動態(tài)

1%甲維鹽微乳劑9g／ha施用后，甲維鹽消解動態(tài)曲線如圖5所示，其在安徽（合肥）和重慶兩地小青菜中殘留消解速率見表2所列。

圖5 甲維鹽消解動態(tài)曲線

甲維鹽在安徽和重慶兩地小青菜中原始沉積量為0.130、0.241mg／kg，合肥試驗點1d時消解率達83.85%，3d后殘留量便低于最小檢出質(zhì)量比。重慶試驗點1d時消解率達75.93%，3d時超過90%，7d時殘留量為0.01mg／kg。

甲維鹽在安徽和重慶兩地小青菜中消解半衰期分別為1.75、1.76d，表明該藥在小青菜中的消解速率快，并且在合肥的消解速率較快。圖5清晰地顯示出合肥試驗點的消解速率較重慶的快。

表2 甲維鹽在安徽和重慶小青菜中殘留消解動態(tài)

3 討 論

3.1 高效液相色譜法的確定

甲維鹽的常量分析可以使用氣相色譜法，但在殘留分析中不能使用該方法，因為甲維鹽的熱穩(wěn)定性較差，不滿足氣相色譜的分析條件，所以只能采用高效液相色譜法進行殘留分析。甲維鹽在365nm的波長激發(fā)下發(fā)出波長為475nm的光，選取乙腈與水的混合溶液為流動相、C18分離柱、熒光檢測器可以得到很好的峰型，并使其與雜質(zhì)很好地分開。

3.2 提取劑的選擇

由于甲維鹽在乙酸乙酯／水的溶解度比較大，因此用其進行反復(fù)提取，再用丙酮進一步提取，回收率達到要求，且無雜質(zhì)干擾。

3.3 熒光檢測器

本試驗采用熒光檢測器進行樣本檢測，其靈敏度高，最小檢出量可達10－14g，具有良好的選擇性，能夠避免不發(fā)出熒光的成分干擾。

4 結(jié)論

（1）小青菜中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽采用乙酸乙酯提取，衍生化測定，在0.01～0.10mg／kg添加質(zhì)量比下，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽回收率為 80.43% ～87.53%，變 異 系 數(shù) 8.48% ～10.91%，故所使用的方法可靠，均符合農(nóng)藥殘留分析實驗要求。

（2）1%甲維鹽微乳劑在安徽和重慶兩地的小青菜中消解動態(tài)符合一級動力學(xué)模型，在合肥試驗點半衰期為1.75d，重慶試驗點為1.76d，由此可知合肥試驗點消解速率較快?？傮w上看，由合肥與重慶的田間試驗的分析可知，1%甲維鹽半衰期短，降解速率快，屬低殘留農(nóng)藥，可以廣泛施用。盡管如此，為了安全有效地利用仍需要進行多次的試驗并結(jié)合毒性資料制定嚴格的最大允許殘留量。

［1］李 娟，王 斌，衛(wèi)軍峰，等.2.7%氟蟲脲·甲維鹽對飛蝗的室內(nèi)毒力測定及田間防效［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，8（5）：88－92.

［2］孫 娟，孟水強，劉幽良.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的產(chǎn)業(yè)史和發(fā)展前景［J］.世界農(nóng)藥，2010，1（Z1）：50－51.

［3］史陶中.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的殘留分析方法及其在甘藍土壤中的降解情況［D］.合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［4］范 鵬.甲維鹽微乳劑的研制及其在甘藍和水稻葉面的展布分析［D］.揚州：揚州大學(xué)，2009.

［5］曹愛華，孫惠青，徐金麗，等.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽在煙草及土壤中殘留分析方法的研究［J］.中國煙草科學(xué)，2010，31（4）：64－68.

［6］夏瀟瀟，潘 見，吳澤宇.超聲波萃?。咝б合嗌V－串聯(lián)質(zhì)譜快速檢測葉菜中殘留農(nóng)藥［J］.合肥工業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2009，32（2）：198－201，277.

［7］王 磊.毒死蜱、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽在甘藍和土壤中的殘留消解與相關(guān)光解研究［D］.合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

［8］張侃侃，胡德禹，張鈺萍，等.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽在水稻環(huán)境中的殘留及消解動態(tài)［J］.農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2010，12（2）：190－194.