張東升，朱瑩，孫靜嫻，李永涵

(大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點實驗室，遼寧大連116023)

卜氏晶囊輪蟲生活在溫帶、堿性富含營養(yǎng)的湖泊或池塘中，屬于較狹鹽性的淡水動物［1－4］，在鹽度大于8的半咸水池塘中不能生存，淤泥中也找不到它的休眠卵［3，5］。晶囊輪蟲是產(chǎn)大型卵 (大于7 mm)的淡水魚類魚苗的優(yōu)質(zhì)開口餌料，但同時又是培養(yǎng)小型輪蟲的天敵［6］，因此，鑒定池塘底泥中輪蟲休眠卵的種類和數(shù)量，對培養(yǎng)所需輪蟲致關(guān)重要。輪蟲休眠卵外殼上的修飾花紋，具有種的特異性［5，7－11］，利用花紋特異性鑒定輪蟲休眠卵種類，已被人們所熟知。此外，有些學(xué)者對某些輪蟲休眠卵卵膜進(jìn)行了透射和掃描電鏡觀察［7－9，12－15］，這為輪蟲休眠卵卵膜功能的研究提供了依據(jù)。

有關(guān)卜氏晶囊輪蟲Splanchna brightwelli休眠卵卵膜結(jié)構(gòu)的研究，最早見于1978年 Gilbert等［7］報道的掃描電鏡觀察，后由李永函等［5］、林里等［8］、張東升等［16］對卜氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜進(jìn)行了光鏡和電鏡觀察的報道，這些報道僅限于對卜氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜外表面的光鏡和掃描電鏡觀察，對卜氏晶囊輪蟲休眠卵全卵膜的掃描電鏡觀察至今尚無報道。本研究中，作者對卜氏晶囊輪蟲休眠卵全卵膜進(jìn)行了掃描電鏡觀察，并對其卵膜結(jié)構(gòu)特點和潛在的功能進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 材料

于2007年在大連市兒童公園的水池里用浮游生物網(wǎng)撈取晶囊輪蟲，帶回實驗室后挑選出抱有休眠卵的晶囊輪蟲，放于冰箱 (4℃)中保存。

1.2 掃描電鏡樣品的制備

將保存一周的休眠卵取出，反復(fù)用蒸餾水沖洗，再用磷酸緩沖液沖洗3次，經(jīng)酒精梯度脫水，用丙酮置換酒精，在HITCH HCP－2臨界點干燥儀上干燥，將干燥好的休眠卵粘在標(biāo)本臺上，用解剖針將其外殼撥開，用JFC－1100離子濺射儀噴金，于掃描電鏡下觀察并拍照。

2 結(jié)果

卜氏晶囊輪蟲休眠卵呈球形，掃描電鏡下可見三層卵膜 (圖1－A)。第一層卵膜 (S1)由兩小層構(gòu)成，即第一小層 (乳狀突起層，ML)和第二小層(彈簧狀層，SL)(圖1－A):ML層外表面有大小不均的乳狀突起，直徑為3.3～5.6 μm，突起之間有的有小橋連結(jié)，有的無小橋連結(jié)，有的直接相接(圖1－B)，表面上有孔(圖1－C);SL層橫斷面觀，低倍鏡下觀察呈有規(guī)律的放射狀排列(圖1－A)，高倍鏡下觀察呈彈簧結(jié)構(gòu) (圖1－D)，由大的與胚胎垂直的縱肋組成，縱肋之間有小的橫肋相連，SL層平面觀，外表面 (與第一小層ML接觸的面)不平 (圖1－E)，有較多的孔和較大的突起，內(nèi)表面 (與S2接觸的里面)也有小的突起，比外表面光滑和孔少 (圖1－E、F)。第二層卵膜 (S2)橫斷面均勻、致密，與第一層的第二小層SL相連(圖1－A、D)。第三層卵膜 (S3)緊包在胚胎的外面，外表光滑 (圖1－A)。

圖1 卜氏晶囊輪蟲休眠卵的掃描電鏡觀察Fig.1 Scanning electron micrograph of outer shell of the resting eggs in rotifer Splanchna brightwelli

3 討論

3.1 卜氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜的結(jié)構(gòu)特點

輪蟲休眠卵卵膜由三層組成［9，12－13］，三層又分別分為層數(shù)不等的小層。從現(xiàn)有文獻(xiàn)可知，不同屬輪蟲休眠卵的同一層卵膜中的小層數(shù)量相等，但結(jié)構(gòu)不同，其中第一層卵膜結(jié)構(gòu)差異較大，第二和第三層卵膜結(jié)構(gòu)差異較小［12］;同屬輪蟲休眠卵的同一層卵膜中的小層結(jié)構(gòu)相近［9］。萼花［12］和褶皺臂尾輪蟲［9］休眠卵的第一層卵膜都分兩小層，其中第一小層外表面分別為波紋狀和褶皺狀突起［12，15］，橫斷面為多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，第二小層為同心圓的致密層，兩小層緊密相連，與第二層卵膜分離。西氏晶囊輪蟲［12］休眠卵的第一層卵膜也分兩小層，其中第一小層外表面為杯狀突起，橫切面有橫紋，第二小層為有孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，透射電鏡下觀察兩小層是分開的，且第二小層的外表面和內(nèi)表面無突起［12］。

本試驗結(jié)果表明:卜氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜也分三層，與同屬的西氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜的結(jié)構(gòu)特點相近，但第一層卵膜的第一小層呈乳狀突起，與西氏晶囊輪蟲不同，而與前節(jié)晶囊輪蟲［7］、中型晶囊輪蟲［9］相近;第二小層為彈簧結(jié)構(gòu)，內(nèi)外表面不光滑，有很多突起，其功能可能與第一層卵膜的第一小層和第二層連接有關(guān)，而西氏晶囊輪蟲休眠卵卵膜在透射電鏡下呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，第二小層沒有觀察到有很多突出的結(jié)構(gòu)。卜氏晶囊輪蟲休眠卵的第二層卵膜 (S2)電子致密，與臂尾輪蟲屬和西氏晶囊輪蟲休眠卵的第二層卵膜結(jié)構(gòu)基本一樣，但第二層卵膜與第一層卵膜的第二小層結(jié)合緊密，這與西氏晶囊輪蟲休眠卵的第二層卵膜與第一層卵膜的第二小層接觸緊密相似，但與臂尾輪蟲屬不同，這進(jìn)一步證實同屬輪蟲休眠卵卵膜結(jié)構(gòu)的相似性。卜氏晶囊輪蟲休眠第三層卵膜 (S3)外表光滑，與臂尾輪蟲屬和西氏晶囊輪蟲休眠卵此層卵膜的結(jié)構(gòu)相似。

3.2 卜氏晶囊輪蟲休眠卵彈簧狀卵膜功能的推測

褶皺臂尾輪蟲新產(chǎn)休眠卵沒有氣室，被產(chǎn)出后立即沉入水底，而隔年休眠卵有氣室，氣室的氣體推測是輪蟲休眠卵休眠期間的代謝產(chǎn)物［3］，但新產(chǎn)和隔年的晶囊輪蟲休眠卵都沉于水底，而且未見氣室。王家楫［2］曾報道，前節(jié)晶囊輪蟲休眠卵第一層卵膜第一小層上的突起為氣室，但李永函等［5］在實踐中發(fā)現(xiàn)，此突起不是氣室，能擠出水來。從本試驗的結(jié)果推測，卜氏晶囊輪蟲休眠卵第一層卵膜的第二小層彈簧狀結(jié)構(gòu)裝置，很可能是卜氏晶囊輪蟲休眠卵休眠期間存放休眠卵產(chǎn)出氣體的地方。

［1］劉青，周一兵，金送笛，等.鹽度對卜氏晶囊輪蟲存活、發(fā)育、生殖和內(nèi)稟增長率的影響［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2002，17(1):37－41.

［2］王家楫.中國淡水輪蟲志［M］.北京:科學(xué)出版社，1961:17－19.

［3］Oltra R，Miracle M R.Spatial－temporal variation of rotifer populations in the meromictic lake Estany de Cullera(Valencia)［J］.Limnetica，2000，19:39－52.

［4］Michael R，Indian J.Diurnal variations in physico－chemical factors and zooplankton in the surface layers of three freshwater fish ponds［J］.Indian Journal of Fisheries，1966，13(1－2):48－82.

［5］李永函，張東升，趙志壯，等.池塘習(xí)見輪蟲休眠卵的形態(tài)和鑒定［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，1999，6(1):1－11.

［6］金送笛，劉青，周一兵，等.幾個生態(tài)因子對卜氏晶囊輪蟲休眠卵萌發(fā)的影響［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2001，16(3):168－174.

［7］Gibert J J，Wurdak E S.Species－specific morphology of resting eggs in the rotifer Asplanchna［J］.Transactions of the American Microscopical Society，1978，97(3):330－339.

［8］林里，田潔，黃祥飛.武漢東湖若干種輪蟲休眠卵的形態(tài)觀察［J］.水生生物學(xué)報，1997，21(3):234－240.

［9］翟寶香，李永函.用電鏡對兩種輪蟲休眠卵膜的初步研究［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，1987，2(1):19－28.

［10］張東升，姜靜穎.褶皺臂尾輪蟲不同時期休眠卵的超微結(jié)構(gòu)［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，1999，6(3):21－24.

［11］Pourriot R，Benest D，Clement P，et al.Morphologie compareed’ceuls de duree brachionides(Rotiferes)［J］.Bull Soe Zool Fr，1984，109(3):231－238.

［12］閆冬春，董雙林，黃健.壺狀臂尾輪蟲及其休眠卵的形態(tài)學(xué)研究［J］.海洋科學(xué)，2007，31(3):13－17.

［13］Wurdak E S，Gilbert J J，Jagels R.Fine structure of the resting eggs of the rotifers Branchionus calyciflorus and Asplanchna sieboldi［J］.Transactions of the American Microscopical Society，1978，97(1):49－72.

［14］Wurdak E，Gilbert J J，Jagels R.Resting egg ultrastructure and formation of the shell in Asplanchna sieboldi and Brachionus calyciflorus［J］.Arch Hydrobiol Beih Ergebn Limnol，1977，8:298 －302.

［15］姜靜穎.冷凍前后褶皺臂尾輪蟲休眠卵的超微結(jié)構(gòu)變化［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2002，17(4):279－285.

［16］張東升，宋良國，姜靜穎.輪蟲休眠卵用不同濃度鹽溶液處理后卵殼的掃描電鏡觀察［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2001，16(2):106－111.