賈詠存

(寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 寧夏 銀川 750021)

據(jù)統(tǒng)計，我國每年新發(fā)宮頸癌病例13.15萬，約有8萬人死于宮頸癌，在婦科惡性腫瘤中病死率居第2位。高危型人乳頭狀瘤病毒(high－risk types human papillomavirus，HR－HPV)慢性持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要因素[1]。目前，在宮頸癌的篩查中，細胞DNA倍體定量分析技術由于具有較高的檢出率而被認為是篩查的金標準。為了探討應用細胞DNA倍體定量分析聯(lián)合高危型人乳頭狀瘤病毒(HR－HPV)檢測篩查宮頸癌能否降低漏診率，提高準確率，我們對同時行宮頸液基細胞學檢查、細胞DNA倍體定量分析及HPV－DNA分型檢測的2153例患者的臨床資料進行分析總結。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源于2009年5月～2011年5月在我科同時行宮頸液基細胞學檢查、細胞DNA倍體定量分析及HPVDNA分型檢測的2153例患者，年齡20～65歲，平均(38.59±7.93)歲。

1.2 宮頸液基細胞學檢查 采用TBS分級診斷系統(tǒng)。鱗狀細胞可概括為4級:良性、不典型性鱗狀上皮細胞(ASC)、鱗狀上皮內(nèi)病變(SIL);包括低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)、鱗狀細胞癌(SCC)。腺細胞分為不典型腺細胞(AGC)、傾向腫瘤的不典型腺細胞(AGC－fn)、宮頸管原位癌、腺癌。

1.3 HPV－DNA分型檢測 采用HybriMax技術檢測21種HPV亞型。實驗步驟:樣本HPV－DNA提取，PCR擴增，核酸分子快速導流雜交，結果判讀，按芯片上HPV亞型分布的相應著色位點判斷。HPV高危型(HR－HPV)15種，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68;低危型(LR －HPV)6 種，包括 HPV6、11、42、43、44 和 CP8304。

1.4 細胞DNA倍體定量分析 所有Feulgen染色片用AcCell全自動細胞圖像分析系統(tǒng)進行掃描處理。以同張玻片上的100個正常上皮細胞為標準對照細胞，所測出的平均光密度(IOD)為2倍體的參考值，其變異系數(shù)(CV)值小于5%。根據(jù)診斷系統(tǒng)軟件所做出的細胞DNA倍體定量分析結果，有4種情況:①以正常2倍體細胞為主(DNA指數(shù)為1)，未見異倍體細胞及異倍體細胞峰，診斷正常。②當DNA指數(shù)在1～2之間時，為少數(shù)處在增值周期的細胞，這些細胞多為炎癥細胞或HPV感染細胞。③當DNA指數(shù)大于2.5時及2倍體與4倍體之間的細胞數(shù)超過被測細胞總數(shù)的10%時，診斷異常，建議活檢。④當DNA指數(shù)大于等于4.5時，為腫瘤細胞。凡是有DNA指數(shù)大于2.5細胞的玻片，都要在顯微鏡下逐一對指數(shù)大于2.5的細胞進行核實，需要跟蹤復查。

1.5 組織病理學檢查 對上述3項檢查任意1項或幾項同時有異常者行電子陰道鏡檢查下多點活檢，在正常轉化區(qū)內(nèi)3、6、9、12點行多點活檢;在異常轉化區(qū)(因致病因子的激發(fā)而形成的區(qū)域)內(nèi)病變處多點活檢，做出病理診斷。

1.6 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 10.0軟件，組間率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般情況 2153例患者中，液基細胞學檢查異常者98例(4.6%)，細胞DNA倍體定量分析異常和(或)HPV－DNA分型檢測HR－HPV陽性者197例(9.2%)，兩者相比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);其中有59例患者液基細胞學檢查異常，其細胞DNA倍體檢查也異常，占60.2%。

2.2 HPV－DNA分型檢測結果 2153例患者的HPV－DNA分型檢測中，結果為HPV－DNA陰性者1269例(58.9%)，LR－ HPV陽性者756例(35.1%)，HR －HPV陽性者128例(5.9%);其中有HR－HPV感染同時細胞DNA倍體檢查異常者121例，占94.5%，可見HR－HPV感染可能是導致細胞DNA倍體異常的一個重要因素。

2.3 細胞DNA倍體定量分析聯(lián)合HR－HPV檢測與液基細胞學檢查的病理診斷結果比較 對236例液基細胞學異常者、或檢出DNA異倍體和(或)有HR－HPV感染的病例行電子陰道鏡下宮頸活檢，病理學檢查結果見表1。

表1 細胞DNA倍體分析、HPV－DNA分型檢測與液基細胞學檢查的病理診斷結果比較(例，%)

以宮頸活檢病理學診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)和宮頸癌，檢出DNA異倍體和(或)有HR－HPV感染者共197例，其中有164例病理診斷異常，占83.2%;液基細胞學異常者共98例，其中有41例病理診斷異常，占41.8%，兩者比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05)。

3 討論

正常人體的體細胞具有較恒定的DNA含量，為二倍體。當細胞受到致癌因素的影響后，染色體上的基因發(fā)生突變，導致DNA含量的改變，從而出現(xiàn)異倍體細胞。細胞DNA倍體定量分析技術通過對細胞核內(nèi)DNA的含量進行測定，掌握正常細胞周期變化特征，以此及早地發(fā)現(xiàn)惡性增殖的腫瘤細胞。用細胞DNA倍體定量分析系統(tǒng)進行宮頸癌及癌前病變的診斷在國外已有大量報道[2，3]。本研究中，檢出率從液基細胞學檢查的41.8%提高到83.2%。而傳統(tǒng)的宮頸癌檢查技術，如液基細胞學檢查，只有在細胞形態(tài)發(fā)生改變時才能檢測出宮頸癌，會有漏診的情況。此外，采用細胞DNA倍體定量分析技術的優(yōu)越性還體現(xiàn)在，一般婦科醫(yī)師認為宮頸光滑者無需檢查宮頸癌，只有出現(xiàn)重度宮頸糜爛才會引起重視。但是，宮頸癌前病變的發(fā)生與宮頸糜爛的程度是不成比例的。

HR－HPV的持續(xù)性感染能夠干擾有絲分裂，導致染色體數(shù)量和結構的異常，即異倍體的產(chǎn)生，而異倍體又是宮頸癌前病變中一項顯著的標志[4]。本研究結果顯示，HR－HPV感染患者中有94.5%的細胞DNA倍體檢查異常，說明兩者在宮頸癌前病變的進展過程中存在著內(nèi)在聯(lián)系。如這些患者的HRHPV感染不能得到有效地阻斷，則加大了進展為宮頸浸潤癌的風險。

總之，細胞DNA倍體定量分析系統(tǒng)采用顯微分光光度原理與圖像處理分析技術相結合，能快速對大量細胞核的結構和DNA含量進行分析，如結合HPV－DNA分型檢測，能對癌前病變的性質和發(fā)展趨勢做出評估，有助于癌變的早期診斷。特別是對于細胞學診斷為ASCUS或LSIL的患者，僅檢測HR－HPV可能會引起檢測結果的不穩(wěn)定性及治療方案的不確定性[5];如果聯(lián)合細胞DNA倍體定量分析，將為病變的生物學行為提供更多的信息，提高診斷的準確性，降低漏診率。

[1]Wright TC Jr，Massad LS，Dunton CJ，et al.2006 Consensus guidelines for the management of women with abnormal cervical cancer screening tests[J].Am J Obstet Gynecol，2007，197(4):346

[2]Lorenzato M，Caudroy S，Nou JM，et al.Contribution of DNA ploidy image cytometry to the management of ASC cervical lesions[J].Cancer，2008，114(4):263

[3]Canda MT，Demir N，Sezer O，et al.Clinical results of the liquid based cervical cytology tool，Liquiprep，in comparison with conventional smears for detection of squamous cell abnorm alities[J].Asian Pac J Cancer P rev，2009，10(3):399

[4]Peter M elsheimer，Svetlana V inokurova，N icolas W en tzen sen，et al.DNA aneup loidy and integration of human papillom avirus type 16 E6/E7 oncogenes in intraepithelial neoplasia and invasive squamous cell carcinoma of the cervix uteri[J].Clinical Cancer Research，2004，10:3059

[5]焦紅麗，冶亞平，張佳立，等.DNA倍體分析聯(lián)合HR－HPV檢測在宮頸癌篩查中的作用[J].中國婦幼保健，2010，25(24):3399