李 鑫，韓 力，曹艷茹，劉 江，姜 怡，黃學石

(1.中國醫(yī)科大學 代謝病分子機制與藥物研究所，遼寧 沈陽 110001；2.云南大學 云南省微生物研究所 微生物藥物國家工程研究中心，云南 昆明 650091)

作者從梅花鹿糞便中分離得到一株鏈霉菌，并對其化學成分進行了鑒定。

1 實驗

1.1 菌株

菌株于2009年從昆明野生動物園健康成年梅花鹿的糞便中分離得到，由云南大學云南省微生物研究所姜怡博士鑒定為鏈霉菌(Streptomycessp.)，微生物樣品保存于云南大學云南省微生物研究所，菌株編號YIM 100471。

1.2 材料、試劑與儀器

薄層色譜硅膠GF254、薄層色譜硅膠H、柱色譜硅膠(100～200目，200～300目)，青島海洋化工廠；Sephadex LH-20，Pharmacia公司；其它試劑均為國藥集團化學試劑有限公司的分析純試劑。

Varian Mercury-VX 300 MHz型核磁共振儀；Finnigan LCQ型質(zhì)譜儀，Thermo。

1.3 提取與分離

菌株分離純化后，用改良61號培養(yǎng)基(蛋白胨2 g、葡萄糖20 g、可溶性淀粉5 g、酵母膏2 g、NaCl 4 g、K2HPO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCO32 g、H2O 1 L，pH值7.8)發(fā)酵培養(yǎng)70 L，濾出菌絲體。發(fā)酵液用XAD-16大孔樹脂柱處理，依次用水、20%乙醇、95%乙醇洗脫。收集95%乙醇洗脫部分，合并洗脫液，濃縮蒸干得到粗提物22 g。粗提物經(jīng)硅膠柱色譜分離、二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脫，得到10個餾分(Fr.1 ～ Fr.10)。Fr.3經(jīng)反復硅膠柱色譜分離、石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脫，得化合物Ⅴ(6 mg)和Ⅵ(25 mg)；Fr.7經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、硅膠柱色譜分離得到化合物Ⅰ(10 mg)、Ⅱ(6 mg)和Ⅳ(11 mg)；Fr.8經(jīng)硅膠柱色譜分離得到化合物Ⅲ(23 mg)。

1.4 結(jié)構(gòu)鑒定

分別對分離得到的化合物Ⅰ～Ⅵ進行1HNMR、13CNMR、MS鑒定。

2 結(jié)果與討論

從菌株發(fā)酵液的95%乙醇提取物中分離得到了6個已知化合物，其波譜數(shù)據(jù)分析如下：

化合物Ⅰ：白色固體，ESI-MS，m/z:296[M+H]+，確定化合物Ⅰ的分子質(zhì)量為295。1HNMR(300 MHz,DMSO-d6),δ:8.37(1H,s,H-8),8.21(1H,s,H-2),5.90(1H,d,J=6.0 Hz,H-1′),5.46(1H,d,J=5.7 Hz,OH),5.38(1H,brt,J=5.7 Hz,OH),5.20(1H,d,J=3.6 Hz,OH),4.67(1H,brq,J=5.1 Hz),4.14(1H,m),3.96(1H,brq,J=3.6 Hz),3.67(1H,dt,J=11.7 Hz,4.0 Hz,H-5′),3.55(1H,ddd,J=11.7 Hz,6.6 Hz,3.7 Hz,H-5′),3.35(6H,s,Me)。13CNMR(75 MHz,DMSO-d6),δ:151.8(C-2),150.0(C-4),119.9(C-5),154.4(C-6),138.7(C-8),87.9(C-1′),73.6(C-2′),70.6(C-3′),85.8(C-4′),61.6(C-5′),38.1(6-NCH3,寬峰)。上述數(shù)據(jù)與文獻[1]報道的6-N,N-二甲基腺苷的波譜數(shù)據(jù)基本一致。故確定化合物Ⅰ為6-N,N-二甲基腺苷，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

化合物Ⅱ：白色固體，ESI-MS，m/z:298[M+H]+，320[M+Na]+，確定化合物Ⅱ的分子質(zhì)量為297。1HNMR(300 MHz,DMSO-d6),δ:8.36(1H,s,H-8),8.15(1H,s,H-2),7.30(2H,brs,NH2),5.88(1H,d,J=6.0 Hz,H-1′),5.50(1H,d,J=6.0 Hz,OH),5.32(1H,d,J=4.2 Hz,OH),4.75(1H,brq,J=5.4 Hz),4.14(1H,m),4.03(1H,m),2.88(1H,dd,J=13.9 Hz,5.9 Hz,H-5′),2.78(1H,dd,J=13.9 Hz,7.0 Hz,H-5′),2.05(3H,s,SMe)。13CNMR(75 MHz,DMSO-d6),δ:152.8(C-2),149.6(C-4),119.8(C-5),156.2(C-6),139.9(C-8),87.4(C-1′),72.7(C-2′),72.7(C-3′),83.8(C-4′),36.1(C-5′),15.6(5′-SMe)。上述數(shù)據(jù)與文獻[2]報道的5′-甲硫基腺苷的波譜數(shù)據(jù)基本一致。故確定化合物Ⅱ為5′-甲硫基腺苷，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

化合物Ⅲ：白色粉末，紫外254 nm下觀察有暗斑點，與1%(體積分數(shù))香草醛硫酸試劑反應顯暗藍色?；衔铫笈c胸腺嘧啶脫氧核苷對照品[3]共薄層，在3種展開系統(tǒng)下，Rf值及斑點顯色均一致。故確定化合物Ⅲ為胸腺嘧啶脫氧核苷，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

化合物Ⅳ：白色粉末，ESI-MS，m/z：261[M+H]+，確定化合物Ⅳ的分子質(zhì)量為260。1HNMR(300 MHz,DMSO-d6),δ：8.15(1H，d，J=4.2 Hz，NH)，7.12～7.30(5H，m，H-2′，H-6′)，5.00(1H，brs，OH),4.11(1H，m，H-6)，3.97(1H，brq，J=5.1 Hz,H-3),3.45(1H，dd，J=12.1 Hz，3.3 Hz，H-1″),3.18(1H，m，H-2″)，3.14(1H，m，H-1″)，3.02(1H，dd，J=13.5 Hz，6.6 Hz，H-7′)，2.91(1H，dd，J=13.5 Hz，5.1 Hz，H-7′)，2.11(1H，m，H-3″)，1.84(1H，m，H-3″)。13CNMR(75 MHz,DMSO-d6),δ：168.3(C-2)，55.5(C-3)，165.2(C-5)，57.9(C-6)，136.3(C-1′)，129.8(C-2′,C-6′)，128.4(C-3′，C-5′)，126.9(C-4′)，39.2(C-7′)，52.9(C-1″)，66.7(C-2″)，36.9(C-3″)。上述數(shù)據(jù)與文獻[4]報道的環(huán)-(苯丙氨酸-羥脯氨酸)-二肽的波譜數(shù)據(jù)基本一致。故確定化合物Ⅳ為環(huán)-(苯丙氨酸-羥脯氨酸)-二肽，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

化合物Ⅴ：淡黃色粉末，紫外254 nm下觀察有暗斑點，與1%(體積分數(shù))香草醛硫酸試劑反應顯深紫色?；衔铫跖c吲哚-3-甲酸對照品[5]共薄層，在3種展開系統(tǒng)下，Rf值及斑點顯色均一致。故確定化合物Ⅴ為吲哚-3-甲酸，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

化合物Ⅵ：白色粉末，紫外254 nm下觀察有暗斑點，與1%(體積分數(shù))香草醛硫酸試劑反應顯鮮紅色?；衔铫雠c對羥基苯乙醇[6]對照品共薄層，在3種展開系統(tǒng)下，Rf值及斑點顯色均一致。故確定化合物Ⅵ為對羥基苯乙醇，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 化合物Ⅰ～Ⅵ的結(jié)構(gòu)式

3 結(jié)論

從鏈霉菌發(fā)酵液的95%乙醇提取物中分離得到6個已知化合物，分別鑒定為6-N，N-二甲基腺苷(Ⅰ)、5′-甲硫基腺苷(Ⅱ)、胸腺嘧啶脫氧核苷(Ⅲ)、環(huán)-(苯丙氨酸-羥脯氨酸)-二肽(Ⅳ)、吲哚-3-甲酸(Ⅴ)、對羥基苯乙醇(Ⅵ);6個化合物均為首次從該菌株中分離得到。

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