宋金平 李小寧

癌基因的激活和抑癌基因的失活在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。P16基因是1993年發(fā)現(xiàn)的抑癌基因[1]，屬于細胞周期抑制因子，有負向調(diào)節(jié)細胞周期的作用，可與細胞周期蛋白D1(cyclind1)競爭結(jié)合細胞周期激酶4(CK4)，使細胞周期停滯于G1期。CyclinD1是細胞周期的正調(diào)節(jié)因子，也是一種原癌基因，CyclinD1蛋白過表達可以促使細胞增殖。胃癌是消化道常見的惡性腫瘤，P16和CyclinD1均與胃癌的發(fā)生關(guān)系密切[2]，而在老年人胃癌中P16和CyclinD1蛋白的表達仍不十分清楚，本實驗用免疫組織化學方法檢測胃癌組織中P16和CyclinD1蛋白的表達探討其蛋白表達與老年人胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料收集 收集2004年1月至2010年12月間住院患者手術(shù)切除胃癌標本85例，均為老年患者即年齡60～84歲，中位年齡68.6歲、進展期胃癌;患者中男66例，女19例;術(shù)前均未行放、化療。

1.2 組織芯片的構(gòu)建 在顯微鏡下定位標記的腫瘤組織，自制成10～18組織陣列(每一標本取二塊組織芯，其直徑1.6 mm)蠟塊(專利號200920350099.2)。正常組織取自手術(shù)殘端(選取距腫瘤7 cm以上的胃組織)共30例。

1.3 免疫組織化學染色 采用EnVision法[3]，以套細胞淋巴瘤和宮頸癌組織作為CyclinD1和P16的陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理，陽性率之間的比較采用χ2檢驗，兩變量之間的關(guān)系分析采用Spearman等級相關(guān)分析表示，檢驗標準以α=0.05為顯著性檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

正常胃組織和胃癌組織中P16和CyclinD1的表達，免疫組織化學染色結(jié)果判斷:P16和CyclinD1陽性呈棕黃色，均定位于細胞核。陽性細胞大于10%，則判讀為陽性。P16在胃癌組織中表達率為52.9%(45/85);30例正常組織均呈陽性表達，表達率為100%。CyclinD1在胃癌組織中表達率為和75.3%(64/85)(圖1);30例正常組織均不表達。

3 討論

P16基因定位于染色體9q21，編碼相對分子質(zhì)量為16 kDa的P16蛋白，特異性抑制細胞周期蛋白依賴性激酶4和6活性，調(diào)控細胞周期，參與了人類多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，故又稱多種腫瘤抑制基因。多項研究[4]表明胃癌組織中均有P16蛋白表達降低，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本組研究發(fā)現(xiàn)P16蛋白在30例正常胃黏膜標本中全部呈現(xiàn)陽性表達，而在胃癌組織中的陽性表達率為52.9%(45/85)，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，P16蛋白下降和失表達可能是由于受損細胞未得到修復(fù)呈失控性生長而形成了腫瘤。

細胞周期與細胞癌變不是相互獨立的事件，細胞周期的調(diào)控對腫瘤發(fā)展有很大影響。CyclinD1作為細胞增殖周期的正調(diào)節(jié)因子，在細胞周期進程中起關(guān)鍵作用。CyclinD1蛋白由CyclinD1基因(又稱CCND1基因)編碼，295個氨基酸組成，此基因位于人染色體11q13上。編碼蛋白半衰期很短，不足25 min。CyclinD1蛋白在細胞G1期進程中控制著G1期的時間，它們作為調(diào)節(jié)CyclinD1是細胞周期素家族中最重要的成員，其高表達可激活CDK4使抑癌基因表達產(chǎn)物Rb蛋白失去對細胞周期的制動功能促使細胞由G1期向S期演進。本組研究中正常胃組織中CyclinD1不表達而胃癌中高表達，表達率為75.3%(64/85)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，與文獻[5]報道相同。

總之，本組實驗結(jié)果顯示:老年人胃癌組織中P16的下降可能是胃癌中引起CyclinD1上升的原因之一;P16蛋白與CyclinD1的相互作用導(dǎo)致細胞周期紊亂可能參與了胃癌的發(fā)生，聯(lián)合檢測P16與CyclinD1蛋白有助于判斷老年人胃癌的惡性程度和生物學行為。

[1]Serrano M，Harmon Cr.Beach D.A nff-ov regulation motif in cell cycle control causing spinal inhibition of cyclinD/CDK4.Nalnre，1993，366(6456):704-707．

[2]Maddika S，Ands SR，Panigrahi S，et al．Cell survival，cell death and cell cycle pathways are interconnected:implications for cancer therapy.Drug Resist Updat，2007，10(1-2):13-29．

[3]韓靜，何丹，馮智英.廣州地區(qū)EB病毒相關(guān)胃癌的臨床病理及相關(guān)分子表達．中華病理學雜志，2010，39(12):798-803．

[4]Tahara T，Arisawa T，Shibata T，et al．Risk prediction of gastric cancer by analysis of aberrant DNA methylation in non-neoplastic gastric epithelium.Digestion，2007，75:54-61．

[5]Mukhopadhyay A，Banerjee S，Stafford IJ，et al.Curcumininduced suppression of cell proliferation correlates with down-regulation of cyclinD1 expression and CDK4-mediated retinoblastoma protein phosphorylation．Oncogene，2002，21(57):8852-8861．