許永萍

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種漿細(xì)胞惡性增值疾病，在老年人群中較為常見(jiàn)，其特征是骨髓中克隆性漿細(xì)胞異常增生并大量分泌單克隆免疫球蛋白或其片斷(M蛋白)，常伴有溶骨病變、貧血、感染、腎功能損害等臨床表現(xiàn)?；熀透杉?xì)胞移植是目前治療多發(fā)性骨髓瘤的主要方法，這兩種方法均有較好療效，但是因?yàn)闅埩舨≡畹拇嬖?，多?shù)MM患者會(huì)復(fù)發(fā)，最終進(jìn)展至難治階段［1］。過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療因?yàn)榭梢郧宄颊叩臍埩舨≡钋夷褪苄院?，目前已?jīng)被人們用于復(fù)發(fā)難治性MM的治療［2－3］。2009年2月～2012年2月，我們利用DC－CIK細(xì)胞過(guò)繼回輸治療21例復(fù)發(fā)難治性MM，取得了不錯(cuò)的療效，現(xiàn)報(bào)告如下:

資料與方法

1.一般資料:2009年2月～2012年2月，我科共收治21例確診為復(fù)發(fā)難治性MM的患者。其中，男13例，女8例;年齡:47～85歲，平均年齡為(68.2±8.5)歲;臨床分型:IgG 型7例、IgA型5例、IgD型3例、輕鏈型1例、雙克隆型4例、不分泌型2例;Durie Salmon分期:Ⅱ期5例，Ⅲ期16例。上述患者既往均接受過(guò)標(biāo)準(zhǔn)TD(沙利度胺+地塞米松)、DVD(脂質(zhì)體阿霉素+長(zhǎng)春新堿+地塞米松)、PAD(硼替佐米+阿霉素+地塞米松)等化療方案的治療，最后進(jìn)展成復(fù)發(fā)難治性MM。

2.抗原制備:收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U266瘤細(xì)胞，裝入凍存管中，液氮－37℃水浴反復(fù)凍融3次，然后600×g離心10分鐘，取上清液經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，即為U266瘤細(xì)胞裂解物，此裂解物含有U266瘤細(xì)胞的全抗原。

3.DC－CIK細(xì)胞制備:利用血細(xì)胞分離機(jī)采集患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，分離、洗滌、計(jì)數(shù)后，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育2h，貼壁細(xì)胞用于培養(yǎng)DC，懸浮細(xì)胞用于培養(yǎng)CIK。①DC細(xì)胞培養(yǎng):于上述貼壁細(xì)胞中，加入1000U/ml的rhGM－CSF和500U/m l的rhIL－4，刺激細(xì)胞向DC細(xì)胞分化;根據(jù)生長(zhǎng)情況每2～3d進(jìn)行半量換液;在培養(yǎng)第5d，加入U(xiǎn)266瘤細(xì)胞抗原裂解物50μg/ml，刺激抗原特異性DC細(xì)胞產(chǎn)生;在培養(yǎng)第6d，加入1000 U/m l的TNFα，刺激DC細(xì)胞成熟;第7d收獲DC細(xì)胞。②CIK細(xì)胞培養(yǎng):于懸浮細(xì)胞中，加入1000U/ml的IFN－γ培養(yǎng)，24h后加入50ng/ml的CD3單克隆抗體和500U/m l的rhIL－2，10 U/mL的IL－1根據(jù)生長(zhǎng)情況每2～3d換液一次，同時(shí)補(bǔ)加100 U/ml的rhlL－2;在培養(yǎng)第7d，收獲CIK細(xì)胞。③DC－CIK共培養(yǎng):收集第7d的DC細(xì)胞及CIK細(xì)胞按1:5比例共培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)5～7d;在培養(yǎng)結(jié)束前，取樣進(jìn)行細(xì)胞活性、細(xì)菌和內(nèi)毒素檢查，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，于第12～14d收集DC－CIK細(xì)胞。

4.治療方法:靜脈隔日回輸DC－CIK細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)每次不低于1×109，4次為一療程，每個(gè)療程細(xì)胞總數(shù)不低于1×1010，每例至少完成2個(gè)療程，最多者完成6個(gè)療程，平均完成(3.1±1.2)個(gè)療程，每個(gè)療程間隔1月。

5.療效和不良反應(yīng)評(píng)價(jià):治療完成后，參照歐洲血液和骨髓移植協(xié)作組(EBMT)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、微小緩解(MR)、疾病進(jìn)展(PD)。觀察并記錄治療期間的不良反應(yīng)。

結(jié) 果

1.療效:21 例患者中，CR 1 例(4.8%)，PR 5 例(23.8%)，MR 9 例(42.9%)，PD 6 例(28.6%)，總體有效率(CR+PR+MR)為 71.4%。

2.不良反應(yīng):治療期間，發(fā)生的不良反應(yīng)主要有寒戰(zhàn)、低熱和皮疹，經(jīng)對(duì)癥處理后均得以緩解，該結(jié)果表明DC－CIK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療有很好的耐受性。

討 論

樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是目前發(fā)現(xiàn)功能最強(qiáng)的專職抗原提呈細(xì)胞，DC本身不具備殺瘤活性，但是通過(guò)致敏和提呈抗原，可激發(fā)機(jī)體T細(xì)胞免疫應(yīng)答功能。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)是一群異質(zhì)性細(xì)胞，兼具T細(xì)胞特異性殺傷和NK細(xì)胞非MHC限制性殺傷活性，是目前公認(rèn)殺瘤作用最強(qiáng)的免疫細(xì)胞。致敏后的DC和CIK共培養(yǎng)，可進(jìn)一步提高殺瘤活性，這是因?yàn)楣餐囵B(yǎng)后，CIK的增殖倍數(shù)和殺瘤活性均顯著增加［4］，此外，DC －CIK 高分泌 IL－2，IFN －7和 IL－12，促進(jìn)Th1應(yīng)答，進(jìn)一步激活CTL、巨噬細(xì)胞、NK等，級(jí)聯(lián)放大抗瘤效應(yīng)，清除殘存腫瘤細(xì)胞［5］。

鑒于DC－CIK細(xì)胞的這些特點(diǎn)，人們已經(jīng)單獨(dú)或聯(lián)合化療用它治療復(fù)發(fā)難治性MM。孫薏等人利用自體DC聯(lián)合CIK細(xì)胞過(guò)繼治療26例復(fù)發(fā)難治性骨髓瘤，總體有效率為73.1%，與我們的結(jié)果相似［3］。

綜上所述，自體DC－CIK細(xì)胞過(guò)繼治療復(fù)發(fā)難治性MM療效明顯，耐受性好，值得臨床推廣。

1 杜立華，南一全.低劑量沙利度胺加地塞米松治療難治性多發(fā)性骨髓瘤的臨床療效觀察［J］.中國(guó)醫(yī)療前沿(上半月)，2010，5(11):49.

2 孫薏，匡紅，張小玉，等.DC－CIK過(guò)繼免疫聯(lián)合沙利度胺治療復(fù)發(fā)難治性多發(fā)性骨髓瘤的回顧性研究［J］.免疫學(xué)雜志，2012，28(4):324－328.

3 孫薏，張聰，陳健，等.自體樹(shù)突細(xì)胞聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞過(guò)繼治療復(fù)發(fā)難治性骨髓瘤26例［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2011，36(11):1245－1246.

4 Mohty M，Olive D，Gaugler B.Leukemic dendritic cells:potential for therapy and insights towards immune escape by leukemic blasts［J］.Leukemia，2002，16(11):2197 －2204.

5 Su X，Zhang L，Jin L ，eta1.Cocuhuring dendritic cellswith zoledronate acid efficiently enhance the anti－tumor effects of cytokine induced killer cells［J］.JClin Immunol，2010，30(5):766 －774.