湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 龔向勝 王紅權(quán) 趙玉蓉＊ 王小娜 金柏濤

植物提取物作為具有增強(qiáng)免疫功能和營(yíng)養(yǎng)效應(yīng)的飼料添加劑，在生豬生產(chǎn)中應(yīng)用已取得較好效果，而在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用仍鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)研究了植物提取物對(duì)草魚非特異性免疫功能的影響，為草魚的免疫增強(qiáng)劑開發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 試驗(yàn)采用的植物提取物由粗老茶葉、甜橙皮、桔子皮、馬齒莧、野菊花、苦蕎等天然植物經(jīng)提取后的有效成分科學(xué)配制而成，主要有效成分為茶多酚、植物多糖、皂甙、類黃酮、植物精油等。由湖南省五季風(fēng)生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將平均體重（89±1.7）g的健康草魚隨機(jī)分為4個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)25尾魚。各處理分別在基礎(chǔ)日糧中添加0%、0.05%、0.10%和0.15%植物提取物，飼養(yǎng)期為68 d。

1.3 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 試驗(yàn)用日糧原料購自湖南安鄉(xiāng)正園飼料有限公司，無異味，無雜質(zhì)，外觀符合要求。根據(jù)草魚配合飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（SC/T 1024-1997）配制基礎(chǔ)日糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)草魚由湖南省大通湖天泓漁業(yè)股份有限公司千畝湖漁場(chǎng)提供，平均體重（89±1.7）g，體質(zhì)健壯，大小均勻。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 %

為適應(yīng)試驗(yàn)飼料及環(huán)境，試驗(yàn)前對(duì)試驗(yàn)草魚集中馴養(yǎng)2周，試驗(yàn)開始時(shí)魚體稱重分組，并將魚的體重調(diào)整至各組間差異不顯著（P＞0.05）。網(wǎng)箱置于水深2 m左右面積50畝的湖內(nèi)。每天的上午 8∶00 ～ 9∶00 和下午 16∶00 ～ 17∶00 進(jìn)行投喂，日投喂量為魚體重的3%，考慮草魚生長(zhǎng)因素每7 d調(diào)整投喂量。飼養(yǎng)期間水溫24～29℃。養(yǎng)殖試驗(yàn)在湖南省益陽市大通湖區(qū)天泓漁業(yè)股份有限公司養(yǎng)殖基地進(jìn)行。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法 飼養(yǎng)結(jié)束，每口網(wǎng)箱取魚3尾，麻醉尾靜脈處采血，3000 r/min，離心10 min，取血清冷凍備用。測(cè)定血清總超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）含量，采用南京建成生物工程研究中心提供的試劑盒測(cè)定，試驗(yàn)過程嚴(yán)格按照試劑使用要求進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行LSD多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 植物提取物對(duì)草魚血清總SOD的影響 由表2可知，日糧中添加植物提取物可顯著提高草魚血清總SOD活力 （P＜0.05），與對(duì)照組相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物組SOD活力分別提高31.09%、24.29%和14.55%（P＜0.05）。

表2 不同植物提取物添加水平對(duì)草魚血清生化指標(biāo)的影響

2.2 植物提取物對(duì)草魚血清LSZ的影響 由表2可知，日糧中添加一定劑量植物提取物可提高草魚血清LSZ活力 （P＜0.05），與基礎(chǔ)組相比，0.05%植物提取物組LSZ活力顯著提高16.96%，0.10%和0.15%植物提取物組LSZ活力分別降低2.83%和6.36%（P＞0.05）。

2.3 植物提取物對(duì)草魚血清CAT的影響 由表2可知，日糧中添加一定劑量植物提取物可提高草魚血清CAT活力，與基礎(chǔ)組相比，0.05%植物提取物組CAT活力顯著提高11.29%（P＜0.05），0.10%和0.15%植物提取物組CAT活力分別降低6.49%和8.59%（P＞0.05）。

2.4 植物提取物對(duì)草魚血清MDA的影響 由表2可知，日糧中添加植物提取物可顯著降低草魚血清MDA含量（P＜0.05），與基礎(chǔ)組相比，0.05%、0.10%和0.15%植物提取物組MDA含量分別顯著降低5.47%、13.41%和17.16%（P＜0.05）。

3 討論

從食性上講，植物提取物作為免疫增強(qiáng)劑，草食性魚類相對(duì)其他食性魚類飼喂的效果會(huì)更好。血清總SOD活性變化可體現(xiàn)動(dòng)物機(jī)體清除自由基能力和抗氧化的能力強(qiáng)弱，對(duì)吞噬細(xì)胞防御能力和整個(gè)機(jī)體的免疫能力也具有重要影響作用（牟海津，1999）。SOD是一種機(jī)體抗氧化酶，在防御機(jī)體衰老和生物分子損傷等方面具有極為重要的作用，其能催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除超氧陰離子自由基，減小超氧陰離子在生物體內(nèi)的積聚，并阻止其轉(zhuǎn)化為自由基，維持胞內(nèi)氧自由基處于低量狀態(tài)（Achuba，2002；Roche 和 Boge，1996；謝巧雄和朱心玲，1996）。 王紅權(quán)等 （2010）研究表明，殼聚糖對(duì)草魚血清總SOD活性有提高作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，植物提取物具有顯著提高草魚血清總SOD活性作用。最終起作用的可能是其有效成分植物多糖、茶多酚和類黃酮等。冷向軍等（2008）研究表明，杜仲葉粉或杜仲葉提取物可不同程度地提高草魚血清總SOD活性，增強(qiáng)機(jī)體非特異免疫功能?？梢姡胖偃~提取物與本試驗(yàn)中的植物提取物對(duì)草魚血清總SOD活性有一致影響效果。本試驗(yàn)結(jié)果表明，植物提取物能提高草魚血清SOD活性，說明其有效成分具有清除自由基和抗氧化、保護(hù)機(jī)體的作用。

LSZ是破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的酶，其活性大小可以在一定程度上反映魚體抵抗細(xì)菌侵襲的能力。LSZ是存在于魚類的吞噬細(xì)胞、血清中的一種水解酶，對(duì)各種微生物病原體均具有重要的防御作用（王玲等，2008）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飼料中添加一定劑量的植物提取物能夠提高草魚血清LSZ活性，這是植物提取物中有效成分作用的結(jié)果。而日糧中添加植物提取物的劑量有一定范圍，超過一定界值時(shí)就表現(xiàn)出LSZ的活性開始下降。本試驗(yàn)選擇的三個(gè)梯度劑量中，0.05%添加量為最佳。

CAT是清除魚機(jī)體氧自由基的重要抗氧化物酶。在正常的魚體內(nèi)，其內(nèi)環(huán)境中自由基的產(chǎn)生與消除處于動(dòng)態(tài)平衡中。當(dāng)CAT活性降低時(shí)，魚體內(nèi)自由基過多可破壞體內(nèi)一些重要的生化過程，導(dǎo)致正常生理功能失調(diào)、體內(nèi)免疫水平下降，潛在的病原被激活，使魚體發(fā)?。ɡ顙鹊?，2008；周進(jìn)等，2003）。本試驗(yàn)中，添加一定劑量的植物提取物對(duì)草魚血清CAT活性有提高作用。

血清MDA是動(dòng)物脂質(zhì)過氧化物的主要分解產(chǎn)物。MDA含量升高實(shí)際上是氧自由基產(chǎn)生過多，使體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物增加。脂質(zhì)過氧化物進(jìn)一步分解，可產(chǎn)生大量的醛類、醇類和烴類，其中MDA是具有很強(qiáng)生物毒性的物質(zhì)，會(huì)對(duì)機(jī)體造成傷害（劉波等，2008）。目前，有關(guān)植物提取物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物血清MDA量影響的報(bào)道較少。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加三種不同劑量植物提取物均可使MDA含量顯著降低，分別較對(duì)照組降低5.47%、13.41%、17.16%，可見三個(gè)劑量中隨劑量的增加，下降幅度增大。說明在飼糧中添加植物提取物，可增強(qiáng)草魚血清的抗氧化能力，減少體內(nèi)氧自由基，降低MDA含量。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，植物提取物具有調(diào)節(jié)和提高草魚的非特異性免疫能力的作用，其最適添加水平為0.05%。

[1]陳曉明，倪峰.植物黃酮類化合物對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，20（2）：69 ～ 70.

[2]富麗靜，宋文華，于翔，等.五種植物免疫增強(qiáng)劑對(duì)草魚非特異免疫力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2010，23（4）：14 ～ 17.

[3]付書婕，王乃平，黃仁彬.植物多糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19（1）：99 ～ 101.

[4]冷向軍，孟曉林，李家樂，等.杜仲葉對(duì)草魚生長(zhǎng)、血清非特異性免疫指標(biāo)和肉質(zhì)影響的初步研究[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2008，32（3）：434 ～ 444.

[5]李嬋，徐奇友，許紅，等.幾種飼料添加劑對(duì)虹鱒（Oncrhychus mykiss Walbaum）免疫活性和抗氧化能力的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，35（3）：456 ～ 461.

[6]劉波，周群蘭，何義進(jìn)，等.植物提取物對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)、免疫與抗氧化相關(guān)因子及抗病力的影響[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，17（2）：193 ～ 198.

[7]李振，陳現(xiàn)偉.茶多酚的免疫調(diào)節(jié)作用及應(yīng)用[J].中國(guó)獸藥雜志，2004，4：33～35.

[8]李莉，朱慶紅.多糖類免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究概況[J].河南水產(chǎn)，2008，2：6 ～ 8.

[9]牟海津，江曉路，劉樹青，等.免疫多糖對(duì)櫛孔扇貝酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影響[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，29（3）：463～468.

[10]王紅權(quán)，趙玉蓉，余建波.殼聚糖對(duì)草魚非特異性免疫功能的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，36（2）：215 ～ 217.

[11]王玲，胡俊杰，郭延生，等.中藥免疫增強(qiáng)劑的研究進(jìn)展及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].中國(guó)飼料添加劑，2008，3：36 ～ 39.

[12]謝巧雄，朱心玲.亞硒酸鈉對(duì)四氯化碳損傷草魚肝原代細(xì)胞與肝組織的保護(hù)作用[J].水生生物學(xué)報(bào)，1996，20（3）：229 ～ 235.

[13]鐘呈波.茶多酚對(duì)動(dòng)物免疫功能的影響[J].四川畜牧獸醫(yī)，2009，5：22～25.

[14]周進(jìn)，黃倢，宋曉玲，等.免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].海洋水產(chǎn)研究，2003，24（4）：70 ～ 79.

[15]Achuba F I.Superoxide dismutase and lipid peroxidation levels in fish from the ethiope river in Southern Nigeira Bull[J].Environ Contam Toxicol，2002，69：892 ～ 899.

[16]Roche H，Boge G.Fish blood parameters as a potential tool for identifeation of stress caused by environmental factors and chemical intoxicat[J].Mairne Environmental Research，1996，41（1）：27 ～ 43.