歐陽(yáng)燕玲 陳玲 曾志定

UHPLC法測(cè)定食品中黃曲霉毒素的含量

歐陽(yáng)燕玲 陳玲 曾志定

目的 建立一種同時(shí)測(cè)定食品中多種黃曲霉毒素含量的方法。方法 采用UHPLC法同時(shí)測(cè)定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2，并建立回歸方程，考察方法的準(zhǔn)確度與精密度。結(jié)果 在各自的線性范圍中，黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的濃度c(μg/L)與峰面積A呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r>0.999)。食品樣品的平均回收率為83.4%～107.5%。黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)。結(jié)論 UHPLC法操作簡(jiǎn)便、線性范圍較廣、靈敏度高、準(zhǔn)確度和精密度良好，是實(shí)用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。

超高效液相色譜法；UHPLC；食品；黃曲霉毒素；理化檢驗(yàn)

黃曲霉毒素中的黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2毒性最強(qiáng)，黃曲霉毒素具有高致癌性，能引發(fā)人類(lèi)多種癌變，尤其是肝癌[1-2]。糧油食品、熱帶與亞熱帶地區(qū)食品受到黃曲霉毒素的污染較為嚴(yán)重，食品中的黃曲霉毒素污染問(wèn)題受到國(guó)內(nèi)外政府主管部門(mén)的重視。近年來(lái)，檢測(cè)食品中黃曲霉毒素的主要方法為高效液相色譜(HPLC)法與酶聯(lián)免疫(ELISA)法[3-4]。ELISA法檢驗(yàn)步驟簡(jiǎn)便，但假陽(yáng)性結(jié)果較多。HPLC法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、準(zhǔn)確率好，還可同時(shí)定量測(cè)定多種黃曲霉毒素。

1 材料與方法

1.1 儀器 1290 Infinity型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；凈化萃取柱（美國(guó)Multisep romer labs公司）；分析天平；干燥箱；離心機(jī)；混勻器。

1.2 試劑 黃曲霉毒素（Sigm a公司）；三氟乙酸（Sigm a公司）；乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；水為純化水；正己烷（分析純）；其它試劑均為分析純。

1.3 UHPLC條件 色譜柱：C 18柱(Zorbax Ex tend C 18,50mm×2.1mm id,1.8μm)（美國(guó)A gilen t公司）；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)器：G1321A型熒光檢測(cè)器，激發(fā)波長(zhǎng)：365nm，發(fā)射波長(zhǎng)：450nm；流動(dòng)相：乙腈:甲醇:水=1:3:6；流速1.0m L/m in。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法 取黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品配制質(zhì)量濃度分別為10.0、5.0、2.5、1.25、0.625μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，吹氮?dú)飧稍铮缓蠹?.1m L三氟乙酸溶液，放入混勻器快速振蕩混勻。置室溫暗處約20m in，再加0.9m L乙腈和水混合液（體積比88:12），2000 r/m in離心10 m in，保留上清液待測(cè)。

1.5 樣品處理方法 將食品樣品粉碎后，稱(chēng)取20g樣品置250m L的三角瓶?jī)?nèi)，再加80m L乙腈和水混合液（體積比88:12），置搖床上振蕩30m in混勻，抽濾得到樣品提取液。精確量取8m L樣品提取液，置凈化柱中，慢速推柱，獲得凈化后的樣品提取液。精確量取2m L凈化液加入棕色具塞小口瓶中，置60℃水浴中，吹氮?dú)飧稍?，加?00μL三氟乙酸衍生液與200μL正己烷，置混勻器上混勻，置干燥箱中40℃衍生20m in，置室溫中蒸干，再加入200μL乙腈和水混合液（體積比88:12）溶解，置混勻器上混勻，2000r/m in離心10m in，保留上清液待測(cè)[5]。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性關(guān)系結(jié)果 通過(guò)檢測(cè)黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別建立黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)表1）?？梢?jiàn)，在各自的線性范圍中，黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的濃度c (μg/L)與峰面積A呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r>0.999)。

表1 黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性關(guān)系結(jié)果

2.2 回收率和精密度 在食品樣品中分別加入1.0μg/L黃曲霉毒素B2與G2，5.0μg/L黃曲霉毒素B1與G1，加樣回收率結(jié)果表明：食品樣品的平均回收率為83.4%～107.5%。黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.21%、2.79%、3.62%、2.57%(n=5)，這表明本檢測(cè)方法的精密度良好。

3 討論

UHPLC法與傳統(tǒng)的高效液相色譜技術(shù)相比，UHPLC在分析的靈敏度、速度與分離度等多方面有顯著的提升，目前已經(jīng)逐步成為液相色譜技術(shù)發(fā)展的趨勢(shì)。本文建立的UHPLC法同時(shí)測(cè)定食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1與G2的方法，檢驗(yàn)的處理步驟簡(jiǎn)便，線性范圍較廣，靈敏度較高，準(zhǔn)確度和精密度良好，是實(shí)用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。黃曲霉毒素在光照下不穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品應(yīng)置4℃冰箱保存，檢測(cè)時(shí)應(yīng)注意避光。黃曲霉毒素具有劇毒和高致癌性，檢測(cè)人員在樣品處理和檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)避免皮膚與黃曲霉毒素直接接觸。檢驗(yàn)使用結(jié)束的器皿、操作臺(tái)與相關(guān)物品應(yīng)置次氯酸鈉溶液中進(jìn)行浸泡消毒至少30m in，消毒后大量水反復(fù)洗滌。

[1] 高秀芬，計(jì)融，李燕俊，等.高效液相色譜法測(cè)定玉米中的黃曲霉毒素[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2007,19⑵:105-108.

[2] 柳潔，何碧英.高效液相色譜法測(cè)定食品中黃曲霉毒素的方法研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2002,29⑵:891-896.

[3] 史瑩華，許梓榮，馮建蕾，等.高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物組織樣品中黃曲霉毒素的殘留量[J].分析化學(xué)，2005,33⑹:850-852.

[4] 柳潔，何碧英，孫俊紅.糧油食品中黃曲霉毒素B1測(cè)定[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2006,22⑴:122-123.

[5] 北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.食品中黃曲霉毒素的測(cè)定免疫親和層析凈化高效液相色譜法[S].GB/T 18979-2003.

book=160,ebook=134

10.3969/j.issn.1009-4393.2012.26.115

362000 福建省泉州市疾病預(yù)防控制中心理化檢驗(yàn)科 （歐陽(yáng)燕玲 陳玲 曾志定）