史圣華 金 星 莫日根

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

廣棗七味散出自《經(jīng)驗(yàn)方》，藥物有:廣棗、木香、沉香、肉豆蔻、丁香、白云香、野牛心;其主要功效是抑心赫依，安神定志，養(yǎng)心益氣。主治心赫依，胸悶胸痛，心悸氣短，心神不安，失眠健忘等［5］。

十三味檳榔散出自《醫(yī)法海鑒》，藥物有:檳榔、廣棗、木香、沉香、肉豆蔻、丁香、當(dāng)歸、葶藶子、干姜、蓽茇、胡椒、制草烏、紅鹽;其主要功效是調(diào)節(jié)赫依，安神止痛。主治心痛、心悸、癲狂、失眠、神經(jīng)衰弱等［6］。

沉香四味散出自著名蒙醫(yī)學(xué)家策.蘇榮扎布編著的《蒙醫(yī)臨床學(xué)》，藥物有沉香、廣棗、木香、肉豆蔻;其主要功效是鎮(zhèn)赫依，補(bǔ)心安神。主治:心慌心跳，失眠多夢(mèng)，心神不安等［7］。

上述3種復(fù)方在臨床中治療抑郁癥等情感障礙性疾病取得了很好療效［8、9］。但有關(guān)該類方藥抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究尚未見報(bào)道。本研究通過現(xiàn)代行為藥理學(xué)方法，研究了廣棗七味散、十三味檳榔散、沉香四味散三種復(fù)方的抗抑郁作用，報(bào)道如下。

1 材料

動(dòng)物:昆明種小白鼠，雄性，18g～22g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)SAXK(蒙)－2001，清潔級(jí)。

藥物與試劑:廣棗七味散、十三味檳榔散、沉香四味散均購自內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院蒙藥房，由國家蒙藥制劑中心生產(chǎn)，批號(hào):20060207。鹽酸氟西汀膠囊，上海中西制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):060201;利血平注射液，廣東邦民制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào):060410。

主要儀器:開場(chǎng)箱、游泳桶，懸尾臺(tái)，電子體溫計(jì)，電子天平，研缽等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)分組:取雄性小白鼠80只，按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為8組，即對(duì)照組，氟西汀組，廣棗七味散大劑量組(廣大)、廣棗七味散小劑量組(廣小)，十三味檳榔散大劑量組(檳大)、十三味檳榔散小劑量組(檳小)，沉香四味散大劑量組(沉大)、沉香四味散小劑量組(沉小)，每組10只。另外，利血平拮抗實(shí)驗(yàn)分組同上，同時(shí)增加正常組做比較。

給藥方法及劑量:實(shí)驗(yàn)組藥物劑量按人體用藥劑量換算成小白鼠用藥劑量［10］，廣棗七味散、十三味檳榔散、沉香四味散大劑量組給藥劑量均為1.04g/kg，小劑量組給藥劑量均為0.26g/kg(相當(dāng)于成人用量)，氟西汀組給藥劑量為0.02g/kg，均灌胃給藥，對(duì)照組、正常組給予等體積的蒸餾水，每日1次，給藥體積為0.2ml/10g小白鼠體重，連續(xù)10天。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，多組間比較用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析法，多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD法。

4 實(shí)驗(yàn)觀察項(xiàng)目及結(jié)果

4.1 小白鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn):參照文獻(xiàn)方法［11］，末次給藥1h后，操作者握住小白鼠尾部1/3處，輕輕將小白鼠置于開場(chǎng)箱中央格，并開始計(jì)時(shí)，記錄6min內(nèi)小白鼠穿越的方格數(shù)(小白鼠3個(gè)爪以上進(jìn)入一個(gè)方格就可計(jì)為一個(gè))。結(jié)果見表1。

表1 小鼠穿越方格數(shù)(±s)

表1 小鼠穿越方格數(shù)(±s)

方差齊性檢驗(yàn):P=0.061，方差齊.單因素方差分析:F=0.846，P=0.554，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

組別 劑量(g/kg) 鼠數(shù)(只) 6min穿越方格數(shù)(個(gè))0.26 10 201.1 ±17.09 10 204.5 ±51.22氟西汀組 0.02 10 200.8 ±27.60廣大組 1.04 10 230.0 ±10.77廣小組 0.26 10 217.1 ±21.99檳大組 1.04 10 208.1 ±40.08檳小組 0.26 10 213.2 ±44.71沉大組 1.04 10 212.4 ±31.72沉小組對(duì)照組_

4.2 小白鼠懸尾實(shí)驗(yàn):參照文獻(xiàn)方法［12］，末次給藥1h后，將小白鼠尾端2cm處固定于懸尾箱內(nèi)的水平桿上，使其呈倒掛狀態(tài)，頭離懸尾箱底面約30cm，四周以箱壁隔離動(dòng)物視線，記錄6min內(nèi)小白鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(不動(dòng)是指動(dòng)物除呼吸外，所有肢體均不動(dòng))。結(jié)果見表2。

表2 小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間±s)

表2 小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間±s)

方差齊性檢驗(yàn):P=0.317，方差齊.單因素方差分析:F=2.712，P=0.015，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

組別 劑量(g/kg) 鼠數(shù)(只)6min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間(秒)P值10 118.3 ±28.29氟西汀組 0.02 10 80.6 ±24.99 0.010廣大組 1.04 10 86.2 ±32.56 0.027廣小組 0.26 10 64.4 ±30.22 0.000檳大組 1.04 10 86.6 ±33.52 0.029檳小組 0.26 10 76.4 ±25.58 0.004沉大組 1.04 10 79.0 ±46.47 0.007沉小組對(duì)照組 －0.26 10 67.2 ±28.01 0.001

4.3 小白鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn):參照文獻(xiàn)方法［13］，末次給藥1h后，分別將小白鼠放入游泳桶內(nèi)，每桶1只。觀察6min內(nèi)小白鼠累計(jì)不動(dòng)的時(shí)間(不動(dòng)時(shí)間是指，動(dòng)物在水中停止掙扎，呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面上的持續(xù)時(shí)間)。結(jié)果見表3。

表3 小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間±s)

表3 小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間±s)

方差齊性檢驗(yàn):P=0.640，方差齊.單因素方差分析:F=2.976，P=0.008，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

組別 劑量(g/kg) 鼠數(shù)(只)6min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間(秒)P值對(duì)照組 －10 101.1 ±33.03氟西汀組 0.02 10 69.4 ±25.80 0.049廣大組 1.04 10 60.0 ±35.42 0.011廣小組 0.26 10 38.5 ±30.12 0.000檳大組 1.04 10 59.3 ±41.48 0.010檳小組 0.26 10 50.8 ±44.32 0.002沉大組 1.04 10 43.3 ±23.84 0.000沉小組0.26 10 58.1 ±42.90 0.008

4.4 利血平拮抗實(shí)驗(yàn) :參照文獻(xiàn)方法［14］，末次給藥1h后，將對(duì)照組和藥物組小白鼠腹腔注射利血平注射液(0.002g/kg)，將正常組小鼠腹腔注射等體積的生理鹽水。分別進(jìn)行以下觀察。

4.4.1 小白鼠眼瞼下垂的觀測(cè):給小鼠腹腔注射利血平注射液或生理鹽水1h后，依據(jù)表4觀察并評(píng)價(jià)2分鐘內(nèi)小鼠眼瞼下垂程度，結(jié)果見表5。

表4 小鼠眼瞼下垂程度評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

表5 小鼠眼瞼下垂情況±s)

表5 小鼠眼瞼下垂情況±s)

方差齊性檢驗(yàn):P=0.079，方差齊.單因素方差分析:F=5.768，P=0.00，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

組別 劑量(g/kg) 鼠數(shù)(只)2min眼瞼下垂積分 P值正常組 －10 0.00 ±0 0.000對(duì)照組 － 10 2.80±1.32氟西汀組 0.02 10 0.40 ±0.97 0.000廣大組 1.04 10 0.50 ±1.08 0.000廣小組 0.26 10 0.60 ±1.08 0.000檳大組 1.04 10 0.60 ±1.08 0.000檳小組 0.26 10 0.60 ±1.35 0.000沉大組 1.04 10 0.40 ±0.97 0.000沉小組0.26 10 0.60 ±1.08 0.000

4.4.2 測(cè)小白鼠的肛溫:給小白鼠腹腔注射利血平注射液或生理鹽水4h后，將電子體溫計(jì)探頭插入其肛門內(nèi)1.5至2cm處測(cè)量小鼠肛溫。結(jié)果見表6。

表6 小鼠肛溫(±s)

表6 小鼠肛溫(±s)

方差齊性檢驗(yàn):P=0.435，方差齊.單因素方差分析:F=4.363，P=0.000，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 劑量(g/kg) 鼠數(shù)(只) 肛溫(℃) P值正常組 －10 35.63 ±0.63 0.000對(duì)照組 － 10 30.29±1.90 0.000氟西汀組 0.02 10 33.74 ±2.07 0.000廣大組 1.04 10 33.77 ±2.63 0.000廣小組 0.26 10 33.82 ±2.21 0.000檳大組 1.04 10 34.12 ±2.21 0.000檳小組 0.26 10 33.95 ±2.47 0.000沉大組 1.04 10 34.00 ±2.00 0.000沉小組0.26 10 33.93 ±2.36 0.000

5 討論

小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳模型屬于抑郁癥的應(yīng)激模型，兩個(gè)模型都提供了一個(gè)無可回避的壓迫環(huán)境，實(shí)驗(yàn)中小鼠所體現(xiàn)出來的不動(dòng)狀態(tài)，反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲”(behavioral dspair and variant)或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗”(failure to adapt to stress)狀態(tài)。這種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，操作簡單、快捷，被廣泛用于抗抑郁藥物的初篩。因興奮性藥物也可減少實(shí)驗(yàn)中小鼠的不動(dòng)時(shí)間，形成假陽性，所以為了排除受試藥物可能具有的中樞興奮作用，實(shí)驗(yàn)中又同時(shí)觀察了受試藥物對(duì)小白鼠自主活動(dòng)的影響

利血平是一種囊胞再攝取抑制劑，它會(huì)使神經(jīng)末梢突觸間囊泡再攝取單胺遞質(zhì)的能力喪失，使遞質(zhì)留在囊胞外，易被單胺氧化酶降解，從而使單胺遞質(zhì)的儲(chǔ)存減少，造成大腦和周邊的去甲腎上腺素(NE)、5－羥色胺(5－HT)、多巴胺(DA)等神經(jīng)遞質(zhì)耗竭，從而引起動(dòng)物僵住不動(dòng)、眼瞼下垂及體溫下降等，影響單胺類遞質(zhì)的抗抑郁藥物可以改善這些癥狀。因此該模型也被用于抗抑郁藥物的篩選。

本研究通過抑郁癥的動(dòng)物模型，對(duì)廣棗七味散、十三味檳榔散、沉香四味散進(jìn)行了抗抑郁的初步篩選性實(shí)驗(yàn)研究，從藥效學(xué)角度對(duì)該類方藥進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)，并對(duì)其抗抑郁作用的環(huán)節(jié)進(jìn)行了探討;也為臨床用于治療情感障礙性疾病提供了有力支持。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:廣棗七味散、十三味檳榔散、沉香四味散均有抗抑郁作用，三種方藥之間的抗抑郁作用無明顯區(qū)別，其作用機(jī)制可能與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化有關(guān)系。由于天然藥物成分復(fù)雜，且有多靶點(diǎn)、多部位、多環(huán)節(jié)的作用特性，故應(yīng)進(jìn)一步對(duì)這類方藥中具有抗抑郁作用的活性部位、活性成分及其它抗抑郁機(jī)理進(jìn)行深入的探討。

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