沈小鐘 ，楊 帆 ，楊燕軍 ，張現(xiàn)濤

(1.廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院，廣東 廣州 510520; 2.暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510632; 3.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

鹽酸丙酰左卡尼汀是意大利Sigma－tau公司研發(fā)的用于治療下肢動(dòng)脈病變和慢性充血性心力衰竭的藥物，1998年在意大利上市，主要成分是丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(PLC)，是一種有效的抗體自由基劑，可以保護(hù)組織免受氧化損傷，療效遠(yuǎn)高于左卡尼汀或乙酰左卡尼汀，可能是因其對骨骼和心臟肌肉具有很高的親和力[1]。本試驗(yàn)中建立了反相高效液相色譜法測定丙酰左卡尼汀鹽酸鹽有關(guān)物質(zhì)及含量，方法簡便、結(jié)果可靠，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters2695－2996型高效液相色譜儀，Empower2色譜工作站。注射用丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(Dromos，意大利Sigma－tau公司，批號為 071453/A，080959/A，081525/A);丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品[自制，批號為080728，按無水物計(jì)含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(C10H20NO4Cl)含量為99.69%];左卡尼汀對照品(沈陽東宇藥業(yè)有限公司，批號為080201，含量大于98.00%);乙酰左卡尼汀對照品(百靈威公司，批號為A0133667，含量大于98.00%);巴豆甜菜堿對照品[2](自制，批號為 BD08001，含量大于98.00%);甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純;水為純凈水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Angilent Zorbax SB－C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:0.006mol/L辛烷磺酸鈉溶液(每1000mL加三乙胺10mL，磷酸調(diào) pH 至 2.9)－甲醇(95∶5);流速:1.0mL/min，柱溫:35℃，檢測波長:210 nm。精密量取對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10% ～25%，再分別量取供試品溶液與對照溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。供試品溶液如有雜質(zhì)峰，檢測最大雜質(zhì)與總雜質(zhì)。丙酰左卡尼汀鹽酸鹽峰與雜質(zhì)峰分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液制備

取本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋成每1 mL約含40.0 mg丙酰左卡尼汀鹽酸鹽溶液，搖勻，即為供試品溶液;精密量取供試品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):按鹽酸丙酰左卡尼汀的處方配制混合輔料溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果，制劑中輔料組分在210 nm波長處不干擾樣品的測定。

檢測限及定量限試驗(yàn):取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽溶液不斷稀釋，精密量取稀釋液10μL，照上述色譜條件進(jìn)樣測定，信噪比為3∶1時(shí)即為檢測限，信噪比為10∶1時(shí)即為定量限。試驗(yàn)結(jié)果表明，丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的檢測限為0.3888μg，定量限為1.944μg。

線性關(guān)系考察:取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品約100mg，精密稱定，置5mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。精密量取母液 1，1，1，0.1mL，分別置 2，5，10，2mL 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為各濃度梯度的供試品溶液。精密量取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由供試品溶液濃度(C，以C10H20NO4Cl計(jì))對峰面積(A)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=2.1 ×105C+1.636 5 ×104(r=0.999 8)。結(jié)果表明，本品進(jìn)樣量在1.0036～20.072 g/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取線性關(guān)系考察項(xiàng)下質(zhì)量濃度為4.014 4 g/L的溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，結(jié)果的 RSD為0.26%，表明本法精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號為080723)適量，共6份，分別加流動(dòng)相溶解制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品適量，同法制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液及對照品溶液10μL注入色譜儀測定。結(jié)果的 RSD為0.47%，表明本方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一樣品(批號為080723)適量加流動(dòng)相溶解，制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，精密量取供試品溶液及對照品溶液 10 μL，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果進(jìn)樣精密度的RSD為0.31%，溶液穩(wěn)定性的 RSD為1.55%，表明本法穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn):取本品原料適量，與輔料按處方量的80%，100%，120%混合。精密稱取本品原料80%，100%，120%，分別精密加入相應(yīng)數(shù)量的輔料，每組不同比例各3份;加流動(dòng)相溶解并定量稀釋，作為供試品溶液。按含量測定項(xiàng)下的方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1?？梢?，按照處方比例，投料量在80% ～120%時(shí)，本品含量測定方法的回收率良好。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

中間精密度:由不同操作人員，于不同時(shí)間在不同儀器上照精密度試驗(yàn)項(xiàng)下方法對同一批(批號為080723)樣品進(jìn)行含量測定，結(jié)果的 RSD為0.29%，表明本法中間精密度良好。

有關(guān)物質(zhì)檢查:取本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL約含40.0 mg丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的溶液，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液10μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10% ～25%，再分別量取供試品溶液與對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍。供試品溶液如有雜質(zhì)峰，檢測總雜質(zhì)和單個(gè)最大雜質(zhì)。結(jié)果見表2、圖1和圖2。

2.4 含量測定

取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4 mg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取對照品適量，同法制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液及對照品溶液10μL進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算本品的含量，結(jié)果批號分別為071453、080959、081525的樣品含量分別為 99.01%，100.03%，100.12%。

表2 雜質(zhì)含量比對結(jié)果(百分之一對照法，%)

圖1 鹽酸丙酰左卡尼汀的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)圖

圖2 鹽酸丙酰左卡尼汀高效液相色譜圖

3 討論

鹽酸丙酰左卡尼汀作為左卡尼汀的升級產(chǎn)品，有著十分廣闊的市場前景[3]，筆者通過試驗(yàn)建立的本方法可以為其質(zhì)量研究提供參考。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，鹽酸丙酰左卡尼汀中的有關(guān)物質(zhì)主要是左卡尼汀失去一分子水的化合物巴豆甜菜堿(雜質(zhì)A)、左卡尼汀(雜質(zhì)B)和乙酰左卡尼汀鹽酸鹽(雜質(zhì)C)。其中，巴豆甜菜堿需加入校正因子F后再按照百分之一對照法進(jìn)行計(jì)算(F=A210PLC×C巴豆甜菜堿 /A210C巴豆甜菜堿 ×CPLC)，F(xiàn)值為0.013 06。左卡尼汀和乙酰左卡尼汀是臨床常用藥物，安全性較高，巴豆甜菜堿雜質(zhì)亦為左卡尼汀和乙酰左卡尼汀中的有關(guān)物質(zhì)[4]。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同批號鹽酸丙酰左卡尼汀有關(guān)物質(zhì)差異較大。其中，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B隨著時(shí)間延長含量有不斷增加的趨勢;隨著保存時(shí)間延長，丙酰左卡尼汀鹽酸鹽有向左卡尼汀、巴豆甜菜堿、鹽酸乙酰左卡尼汀轉(zhuǎn)化的可能。

[1]Ilaria D，F(xiàn)rancesco G，Barbara G，etal.Enantio－and chemo－selective HPLC separations by chiral－achiral tandem－columns approach:the combination of CHIR OBIOTIC TAGTM and SCX columns for the analysis of propionyl carnitine and related impurities[J].Journalof Chromatography A，2004，1 061(2):167 －173.

[2]范立強(qiáng)，袁琴生.大腸桿菌轉(zhuǎn)化巴豆甜菜堿合成L－卡尼汀[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29(3):99 －102.

[3]唐玉亮，常 剛.左卡尼汀的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國藥業(yè)，2010，19(17):84－86.

[4]李 璽，李 薇，佟愛東.注射用乙酰左卡尼汀含量及有關(guān)物質(zhì)的測定[J].今日藥學(xué)，2008，18(5):24－25.