武新琴，智順

（山西林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 太原030009）

辣木（Moringa oleifera Lam.）又稱鼓槌樹、馬蘿卜、不死樹、蘿卜樹等，屬辣木科，原產(chǎn)于印度。辣木葉片、果莢富含多種礦物質(zhì)、維生素，作為蔬菜和食品有增進(jìn)營養(yǎng)、食療保健功能，根據(jù)測定，辣木干葉粉所含的鈣質(zhì)是牛奶的4倍，蛋白質(zhì)是牛奶的2倍，鉀是香蕉的3倍，鐵是菠菜的3倍，維生素C是柑橘的7倍，維生素A（β胡蘿卜素）是胡蘿卜的4倍。只要3湯匙的辣木葉粉，就含有幼兒每日所需的270%維生素A、42%的蛋白質(zhì)、125%的鈣、70%的鐵及22%的維生素C。它豐富的蛋白質(zhì)、維生素及氨基酸，不但對先進(jìn)國家素食者有極大益處，而且在對抗?fàn)I養(yǎng)不良及提升免疫力方面也功效顯著［1，2］。我國廣東、廣西、臺灣、云南、福建、廈門均有栽培。

辣木種子比較昂貴，通過組織培養(yǎng)建立植株再生體系，是解決辣木種苗供應(yīng)的有效途徑［3］。本研究選擇印度傳統(tǒng)辣木嫩梢為外植體，應(yīng)用25種激素配比的培養(yǎng)基進(jìn)行初代誘導(dǎo)試驗(yàn)，建立了辣木的植株再生體系，總結(jié)了辣木組培快繁的培養(yǎng)方式，為辣木幼苗組培快繁提供了有用的數(shù)據(jù)及技術(shù)支持。此研究比其它辣木組培研究者的激素濃度及配方均有擴(kuò)大［3～6］，總結(jié)了不同激素配比對辣木再生體系的影響，并提出了不同的辣木組培方式。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

辣木組培研究試驗(yàn)于2009年8月開始在山西林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院組培實(shí)驗(yàn)室及溫室中進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

利用傳統(tǒng)辣木實(shí)生苗的嫩梢為外植體。實(shí)生苗于5月在溫室容器育苗，6月移栽至校園苗圃。8月開始采摘嫩梢試驗(yàn)。

1.3 試驗(yàn)方法

剪取辣木實(shí)生苗約6cm長的嫩梢，摘除葉片，剪成兩段，上段放在一起，下段放在一起，分別用清水清洗，用2%洗衣粉浸泡清洗約5min，再用自來水沖洗干凈后放入無菌操作臺備用；在無菌操作臺上，將外植體分批滅菌，先用70%酒精震蕩漂洗30s，酒精滅菌后的外植體用無菌水沖洗2次后，用0.1%升汞浸泡并震蕩5min，用無菌水沖洗4～5次［7，8］，用無菌濾紙吸干剪切為1cm 長帶芽莖段，接種。以MS為基本培養(yǎng)基，瓊脂0.6%，蔗糖3%，pH 6.5，培養(yǎng)基中采用激素為5個濃度的6－BA：0mg·L－1、0.02mg·L－1、0.2mg·L－1、0.5mg·L－1、1.0mg·L－1與5個濃度的 NAA：0mg·L－1、0.02mg·L－1、0.2mg·L－1、0.5mg·L－1、1.0mg·L－1，共25個處理。每個處理5瓶，每瓶接入2個莖段，每個莖段均帶一個側(cè)芽。接種時(shí)將上段與下段的芽分別接入同一處理的不同培養(yǎng)瓶內(nèi)，使每個處理的接種材料保持一致。

培養(yǎng)條件為每天光照13h，溫度為25～30℃，20天后調(diào)查莖段生長情況。計(jì)算10個莖段的芽長度平均值為芽平均長度；增殖倍數(shù)＝腋芽數(shù)／接種數(shù)［9］；每個處理中選取有代表性的莖段并量取莖段一側(cè)愈傷組織生長量為愈傷組織生長。

將繼代培養(yǎng)形成的組培苗剪成單芽莖段轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基上，以1／2MS（大量元素減半）為基本培養(yǎng)基，瓊脂0.6%，蔗糖2%，PH 6.5，添加不同濃度NAA、6－BA及IBA形成6個處理。分別為：1／2MS＋6－BA0.5＋NAA0.2；1／2MS＋6－BA0.02＋ NAA0.2；1／2MS＋ NAA0.2；1／2MS＋NAA0.5；1／2MS＋ NAA0.2＋I(xiàn)BA0.5；1／2MS＋NAA0.0。20天后調(diào)查莖段生根情況。

利用莖段形態(tài)學(xué)上端朝上或朝下兩種不同方式接種在生根培養(yǎng)基上，觀察莖段生根情況，并通過馴化移栽，觀察成活情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素配比對辣木莖段誘導(dǎo)的影響

將初代及繼代接種20天后的芽生長高度、莖段增殖倍數(shù)及愈傷組織生長情況，調(diào)查匯總，結(jié)果見表1。由圖1可見，培養(yǎng)基中加入0.02mg·L－1NAA和0.02mg·L－16－BA 比不加6－BA 和加0.2～1.0mg·L－16－BA 的芽長度大，但加入0.2mg·L－16－BA比加入0.02mg·L－16－BA的芽長度減小，節(jié)間縮短，莖稍粗壯。加入0.5mg·L－1和1.0mg·L－16－BA，芽長度更小，節(jié)間更短。6－BA在0.02mg·L－1至1.0mg·L－1濃度范圍內(nèi)，6－BA濃度越高，側(cè)芽生長越明顯。所以隨植物生長調(diào)節(jié)劑6－BA的添加在抑制組培苗高生長的同時(shí)，卻刺激了其腋芽的萌發(fā)，與對水曲柳組培苗的影響效果相似［9］。

圖1 6－BA與NAA不同配比對芽長度的影響Fig.1 6－BA and NAA different ratio to the influence of length of bud

從圖2可以看出，培養(yǎng)基中加入6－BA0.5mg·L－1NAA和0～0.2mg·L－16－BA莖段增殖倍數(shù)均比其它組合高，其中 MS＋6－BA0.5mg·L－1＋ NAA 0.02mg·L－1莖段增殖倍數(shù)最高達(dá)8.1，腋芽數(shù)多，莖健壯，節(jié)間長短適中，為最適宜的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)基。MS＋6－BA 1.0mg·L－1＋ NAA 0.2mg·L－1雖然莖段增殖倍數(shù)達(dá)7.9，但節(jié)間很短不利于進(jìn)行單芽莖段剪切。從圖1和圖2均可看出，培養(yǎng)基中加0.02mg·L－1NAA 比不含NAA的培養(yǎng)基莖生長速度快，但隨著NAA含量增加，莖生長速度受到抑制。

圖2 6－BA與NAA不同配比對莖段增殖倍數(shù)的影響Fig.2 6－BA and NAA different ratio of the influence of proliferation

由表1可以看出，隨著培養(yǎng)基中6－BA和NAA含量增加，愈傷組織生長也增加。當(dāng)培養(yǎng)基中含6－BA 1.0mg·L－1，NAA 0.5mg·L－1時(shí)愈傷組織生長最旺盛。

表1 不同培養(yǎng)基上芽生長結(jié)果Table 1 The differentiation result of the different culture medium

2.2 不同激素配比對辣木莖段生根的影響

由表2可見，在1／2MS＋0.2mg·L－1NAA培養(yǎng)基上生根率最高達(dá)79%，加入0.5mg·L－1NAA時(shí)生根率降為75%，在0.2mg·L－1NAA基礎(chǔ)上再加0.5mg·L－1IBA 時(shí)生根率降為72%，加入生長素比對照生根率明顯提高，但隨著生長素濃度的升高生根率反而下降。在1／2MS＋NAA 0.2mg·L－1的基礎(chǔ)上再加0.02mg·L－16－BA，生根率明顯降低，在1／2MS＋ NAA 0.2mg·L－1的基礎(chǔ)上再加0.5mg·L－16－BA生根率為0，可見加6－BA不利于生根。

表2 不同培養(yǎng)基對生根的影響Table 2 Effect of the root in the different culture medium

2.3 不同接種方式對莖段生根及移栽成活的影響

將辣木帶芽莖段以形態(tài)學(xué)上端朝上與朝下（倒插）兩種方式接種在1／2MS＋NAA 0.2mg·L－1＋蔗糖2.0%培養(yǎng)基上，均可以在形態(tài)學(xué)下端生根，生根率相近，形態(tài)學(xué)上端朝上比朝下接種根系生長較快。但由于辣木根系較脆，形態(tài)學(xué)上端朝上在清洗移栽時(shí)，根系容易受損［5］，形態(tài)學(xué)上端朝下，根系不沾瓊脂，容易清洗，移栽成活率可提高10%。

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，以辣木嫩莖為外植體，采用無菌微型扦插法［10］誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)，在 MS＋6－BA0.02～0.5mg·L－1＋NAA0.02mg·L－1＋蔗糖3%的培養(yǎng)基上辣木組培苗生長良好，增殖倍數(shù)達(dá)5.6～8.1。其中 MS＋6－BA 0.5mg·L－1＋NAA 0.02mg·L－1增殖倍數(shù)最高達(dá)8.1，為芽誘導(dǎo)及增殖的最佳培養(yǎng)基。雖然MS＋6－BA 1.0mg·L－1＋NAA 0.2mg·L－1增殖倍數(shù)也可達(dá)7.9，但莖節(jié)過短，不利于單芽剪切。培養(yǎng)基中加6－BA不利于生根，加很少量也會使生根率降低。在1／2 MS＋NAA0.2mg·L－1的培養(yǎng)基上生根率達(dá)到最高。隨生長素濃度增加生根率降低，與其他學(xué)者的試驗(yàn)結(jié)果相似［4～6］，利用低濃度 NAA、IBA 均可促進(jìn)生根，但高濃度生長素不利于生根?？傊?，辣木莖和根的生長均喜歡較低濃度的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。

辣木根系很脆，移栽清洗培養(yǎng)基時(shí)，根系容易斷裂，不利于移栽，在誘導(dǎo)生根階段，采用形態(tài)學(xué)上端朝下接種，仍在形態(tài)學(xué)下端生根，根部沒有培養(yǎng)基使清洗變得容易，有利于移栽成活。

［1］陸斌，陳芳，張勁峰.印度的辣木生產(chǎn)和研究［J］.世界農(nóng)業(yè)，2005（10）：32－35.

［2］劉昌芬，龍繼明，楊焱，等.多功能植物辣木栽培技術(shù)研究初報(bào)［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（6）：590－593.

［3］王洪峰，韋強(qiáng).利用辣木莖段建立植株再生體系的研究［J］.浙江林業(yè)科技，2008，28（5）：40－43.

［4］馬崇堅(jiān)，王玉珍，任安祥，等.辣木的組織培養(yǎng)與快速繁殖［J］.植物生理學(xué)通訊，2007，43（4）：748.

［5］羅云霞，陸斌，陳芳，等.辣木組織培養(yǎng)試驗(yàn)［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（6）：36－38.

［6］向素瓊，梁國魯，郭啟高，等.辣木組織培養(yǎng)與四倍體植株誘導(dǎo)［J］.熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2007，15（2）：141－146.

［7］王荃，胡寶忠.杜鵑花組織培養(yǎng)技術(shù)研究［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，34（4）：459－464.

［8］張潔.辣木（Moringa oleifera Lam.）組培育苗及四倍體新種質(zhì)誘導(dǎo)技術(shù)的研究［D］.重慶：西南大學(xué)，2007.

［9］鄧正正，王力華，王慶禮.植物生長調(diào)節(jié)劑對水曲柳組培苗生長及內(nèi)源激素的影響［J］.東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，37（12）：10－13.

［10］曹春英.植物組織培養(yǎng)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006：29.