羅倫才，季小平，張仲林，李列平，張孝國，王利平，鐘振東

(1.四川涼山州第二人民醫(yī)院，四川 西昌 615000;2.成都醫(yī)學(xué)院，成都 610083;3.四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，成都 610212)

愈瘍膠囊系根據(jù)我院協(xié)定處方研制而成的院內(nèi)制劑(院內(nèi)制劑批號川藥制字Z20080094)，由山藥、蜂蠟等藥物并采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，該制劑具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效。為給臨床用藥提供安全依據(jù)，根據(jù)國家新藥相關(guān)法規(guī)和技術(shù)規(guī)范［1～5］，我們于2010年6月至2011年8月對愈瘍膠囊進(jìn)行了毒理作用研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠 56只，體重 18g～22g;SD大鼠120只，體重90g～110g，均雌雄各半(動(dòng)物合格證號均為 SYXK(川)2008-049號)由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 藥物 愈瘍膠囊細(xì)粉，由涼山州第二人民醫(yī)院制劑室提供(批號20100504)，每1g細(xì)粉含有 1.5 g生藥。

1.1.3 儀器 KX-21N全自動(dòng)血液分析儀，由日本東亞Sysmex公司生產(chǎn);RT-1904C半自動(dòng)生化儀，由美國Rayto公司生產(chǎn);Leica-1015切片機(jī)，由德國徠卡儀器有限公司生產(chǎn);TSJ-Q型全自動(dòng)封閉式組織脫水機(jī)、BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)和HY-Ⅲ型病理組織漂烘儀，均由江蘇常州市中威醫(yī)療儀器有限公司生產(chǎn);Motic BA400顯微鏡，由天津麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性試驗(yàn) 取合格昆明種小鼠20只，雌雄各半，用改良寇氏法計(jì)算 LD和95%的可信區(qū)間并測定LD;若無法測定LD則測量最大耐受量，動(dòng)物禁食不禁水12 h后，用最高的藥物濃度(能順利通過灌胃針頭)和動(dòng)物的最大胃容納量0.4 mL/10 g，3 次/d 給藥，觀察 14 d［6］。

1.2.2 大鼠長期毒性試驗(yàn) 取90g～110 g大鼠80只，雌雄各半，在動(dòng)物房適應(yīng)5 d后，按體重和雌雄隨機(jī)分為空白對照組(給生理鹽水)和用藥高、中、低劑量組(分別為 3.6、1.8、0.45 g(kg·d))，每組30只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，每籠10只。在實(shí)驗(yàn)室飼育1周，觀察各組動(dòng)物活動(dòng)、進(jìn)食、糞便等情況均無異常后，采用臨床給藥途徑灌胃給藥。各劑量組按等容積不同濃度，每100 g體重灌胃1 mL藥液，連續(xù)13周。每周停藥1 d并稱重，按體重增減情況調(diào)整用藥劑量。實(shí)驗(yàn)期間，觀察動(dòng)物的行為活動(dòng)、外觀體征、體重、毛發(fā)、進(jìn)食及糞便等情況。末次給藥后，每組取20只大鼠，雌雄各半，禁食不禁水12 h，主動(dòng)脈取血，分別進(jìn)行紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白(HGB)、LPR(淋巴細(xì)胞百分率)和凝血酶原時(shí)間(PT)等測定;血液離心后取血清進(jìn)行尿素(UREA)、總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)等測定;對臟器進(jìn)行全面肉眼尸檢，解剖取心、肝、脾、肺、腎、胸腺、子宮、腎上腺、胃、十二指腸，其中心、肝、脾、肺、腎、胸腺、子宮稱取濕重，求出臟器系數(shù)，將上述器官用甲醛溶液固定，常規(guī)病理切片進(jìn)行組織學(xué)檢查。余下的動(dòng)物停藥2周后，按上述方法進(jìn)行檢測，觀察有無藥物所致的延遲性變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，愈瘍膠囊的最大耐受量(MTD)為42g/kg，按60 kg人計(jì)算相當(dāng)于臨床用量的933倍。在觀察期內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)動(dòng)物有明顯的中毒癥狀和死亡發(fā)生，14 d后體重均有所增長。

2.2 大鼠長期毒性實(shí)驗(yàn)

2.2.1 一般觀察試驗(yàn) 表1顯示，動(dòng)物活潑健康、皮毛光亮、行為活動(dòng)、外觀體征等未見異常，高劑量組大鼠在每次給藥后出現(xiàn)糞便溏爛的現(xiàn)象，1 h～3 h后恢復(fù)，其余各組糞便性狀未見異常。給藥13周及停藥2周各組大鼠體重均呈增長趨勢，與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;所有變化均在動(dòng)物正常范圍值內(nèi)，無明確生物學(xué)意義。

2.2.2 臟器檢查 表2顯示，尸檢動(dòng)物各臟器肉眼觀察未見病變，稱取心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺，腎上腺等臟器濕重，計(jì)算出器官系數(shù)。并與空白對照組比較，給藥13周時(shí)，中劑量組的脾降低，停藥2周后高劑量組的腦升高而中劑量組的胸腺降低，且差異有顯著性(P＜0.01)，其余各給藥組器官系數(shù)與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;所有變化均在動(dòng)物正常范圍值內(nèi)，無明確生物學(xué)意義。

2.2.3 病理組織學(xué)檢查 病理切片觀察給藥13周和停藥后2周(恢復(fù)期)各給藥組的心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上腺、睪丸、附睪、子宮及卵巢等均未見典型的炎癥、增生或萎縮等病理學(xué)改變，與對照組比較均未見異常改變;所有變化均在動(dòng)物正常范圍值內(nèi)，無明確生物學(xué)意義。

2.2.4 血常規(guī)檢查 表3、4顯示，給藥 13周時(shí)及停藥2周后，愈瘍膠囊各劑量組的血常規(guī)指標(biāo)與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血生化檢查:給藥13周時(shí)低劑量組GLU降低，停藥2周后中劑量組TBIL升高，且差異有顯著性(P＜0.O5);其余各劑量組各指標(biāo)在給藥13周時(shí)及停藥2周后與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;所有變化均在動(dòng)物正常范圍值內(nèi)，無明確生物學(xué)意義。

表1 愈瘍膠囊對大鼠體重的影響(珋x±s)

表2 愈瘍膠囊對大鼠器官系數(shù)的影響(珋x±s)

3 討論

愈瘍膠囊為醫(yī)院自制制劑，是由山藥、蜂蠟等藥物組成，采用特殊炮制和制劑工藝制備而成的純中藥制劑，具有泄壅滯、逐痰積、消腫毒、排膿腐、生肌健脾等功效，臨床應(yīng)用10余年來，證明其對乳腺增生有顯著療效。藥效學(xué)試驗(yàn)也表明，愈瘍膠囊能通過調(diào)節(jié)大鼠體內(nèi)的激素分泌水平，減弱雌激素和孕激素在乳腺的生物學(xué)效應(yīng)而明顯抑制和治療大鼠的乳腺增生［7］。

愈瘍膠囊臨床采用口服給藥途徑，以最高藥物濃度(能順利通過灌胃針頭)和動(dòng)物的最大胃容納量0.4mL/10 g，3次/d給藥，連續(xù)觀察14 d未見死亡。急性毒性試驗(yàn)表明，愈瘍膠囊的24h最大耐受量為42g/kg，按人臨床日用量2.7g/60kg計(jì)算，相當(dāng)于成人臨床用量的933倍。

本試驗(yàn)以高、中、低3個(gè)劑量(按人臨床日用量2.7g/60kg計(jì)算，高中低劑量分別相當(dāng)于人用量的80、40和10倍)連續(xù)給大鼠灌胃90d，進(jìn)行長期毒性實(shí)驗(yàn)。通過觀察其進(jìn)食、體重、外觀體征和行為活動(dòng)、糞便性狀等一般狀況，血常規(guī)、肝、腎功能和心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺等臟器系數(shù)及病理學(xué)組織檢查，與對照組比較均未見異常，提示愈瘍膠囊對上述器官無病理性損害。就體重而言，給藥l3周時(shí)與空白組比較，各劑量組動(dòng)物的體重有所下降，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);停藥2周后各劑量組體重均比空白組低，中劑量組有顯著差異(P＜0.05)。就臟器系數(shù)而言，除高劑量組胸腺在停藥2周后降低且有顯著性差異，其余臟器就血常規(guī)指標(biāo)而言，與空白組比較各組在給藥13周及停藥2周后，各組各指標(biāo)變化均無差異。就血生化指標(biāo)而言，除低劑量組血糖濃度降低、低劑量組總膽紅素含量降低且有顯著性差異外(P＜0.05)，其余各組各指標(biāo)變化無差異。組織病理檢測結(jié)果顯示，各組各臟器均無異常病理變化。以上所有變化均在動(dòng)物正常范圍值內(nèi)，無明確生物學(xué)意義。綜上，在13周給藥期間未見明顯毒性反應(yīng)，亦未見延遲毒性反應(yīng)。

表3 愈瘍膠囊對大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響(珋x±s)

表4 愈瘍膠囊對大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響(珋x±s)

本實(shí)驗(yàn)在藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上對愈瘍膠囊進(jìn)行了毒理學(xué)研究，通過對上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析認(rèn)為，愈瘍膠囊在臨床規(guī)定日用劑量2.7g/60kg，臨床連續(xù)用藥療程1個(gè)月，服用是安全可靠的，為其臨床安全性用藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥品注冊管理辦法［S］.2007.

［2］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則［S］.2005.

［3］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物長期毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則［S］.2005.

［4］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范［S］.2003.

［5］ 衛(wèi)生部藥政局.中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))［S］.1994.

［6］ 陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:107-113.

［7］ 羅倫才，黃蘭雅，季小平，等.愈瘍膠囊對乳腺增生大鼠雌激素影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國藥業(yè)，2011，20(13):5-6.