羅序峰 周濤 劉玉玲 朱建萍 吳濤 張勝 龍曉玲 付四毛

79例重癥手足口病兒童病原學(xué)分析

羅序峰 周濤 劉玉玲 朱建萍 吳濤 張勝 龍曉玲 付四毛

目的分析重癥手足口病的病原體，為預(yù)防和控制重癥手足口病提供依據(jù)。方法采集我院PICU收治的79例重癥手足口病患兒的糞便、肛拭子、咽拭子、皰疹液等標本進行RT-PCR定性檢測腸道病毒通用引物及EV71和CA16的VP1基因的特異性引物進行RT-PCR鑒定。結(jié)果共收集標本257份，腸道病毒通用引物陽性164例，EV71陽性118例，CoA16陽性40例，其他6例。其中糞便標本79份，病毒分離陽性61份，陽性率為77.2%;肛拭子79份，病毒分離陽性53份，陽性率為67.1%;咽拭子79份，病毒分離陽性41份，陽性率為51.9%;皰疹液20份，病毒分離陽性9份，陽性率為45%。結(jié)論EV71是引起重癥手足口病的主要病原體。糞便、肛拭子、咽拭子、皰疹液的陽性率不同，以糞便陽性率最高。

手足口病;腸道病毒;EV71;COA16

手足口病(hand foot and mouth disease，HFMD)是由腸道病毒感染引起的一種傳染性疾病，引起本病的腸道病毒有20多種(型)，其中以腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)和柯薩奇病毒A16型(Coxsackievirus A16，COA16)最常見，兩種病毒感染常交替出現(xiàn)，成為手足口病的主要病原體，其中EV71感染易引起暴發(fā)流行，并且易合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染和神經(jīng)源性肺水腫而危及患兒生命。2009年4～8月廣東省中山市發(fā)生了較為嚴重的手足口病暴發(fā)流行，我院共收治手足口病4107例，其中重癥患者79例。為了解本次手足口病的流行特征，為重癥手足口病的診治提供依據(jù)，現(xiàn)分析重癥手足口病的病原學(xué)特征如下。

1 材料與方法

1.1 標本的采集與處理 采集臨床確診為重癥手足口病患者的糞便、肛拭子、咽拭子、皰疹液257份，送至中山市疾病預(yù)防控制中心進行檢測。標本處理:①糞便及肛拭子:將標本置入含10%氯仿的PBS緩沖液中，震蕩20 min，1500r離心30 min，留取上清液待檢。②咽拭子:咽拭子收集后放入裝有病毒保存液試管中，充分震蕩，1500r離心30 min，留取上清液待檢;皰疹液、腦脊液直接待檢。

1.2 病毒的鑒定 用Qiagen公司的RNA柱提試劑盒，從標本或上清液中提取病毒RNA，用PE引物、EV71引物、CA16引物進行RT-PCR檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所有標本均用RT-PCR定性，共采集標本257份，腸道病毒通用引物陽性164份，EV71 118份、CA16 40份、6份為單純腸道病毒通用引物陽性見表1。

四種檢測標本對腸道病毒通用引物，EV71，COA16檢出陽性率比較具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，然后兩兩比較，糞便和肛拭子兩者檢出陽性率無統(tǒng)計學(xué)意義，但與咽拭子和皰疹液比較具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 所有重癥手足口病病毒感染情況(表2):所有患者檢出陽性數(shù)為67(84.8%)，其中 EV71陽性數(shù)為55(69.6%)，COA16陽性數(shù)為20(25.3%)，其中8(10%)例為混合感染。

表1 腸道病毒檢出情況

表2 所有重癥手足口病感染情況一覽表(例，%)

3 討論

手足口病(Hand foot mouth disease，HFMD)是由多種腸道病毒感染引起的一種傳染病，多見于嬰幼兒。多數(shù)患者臨床癥狀較輕，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數(shù)患者可并發(fā)腦膜炎、腦炎、肺水腫等并發(fā)癥。引起手足口病的腸道病毒主要有腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A組16型(CoxA)以及埃可病毒(Echo)的某些血清型［1］，其中EV71感染引起重癥病例的比例較大。

研究者在1969年從美國加州的1例腦炎患兒糞便中首次分離得到EV71病毒株。隨后，EV71在世界各地間斷爆發(fā)流行。在1975年保加利亞EV71疫情中，有149例兒童癱瘓，共44例患兒死亡;1978年匈牙利EV71疫情中有45例死亡;1981年上海首次報道EV71感染所致手足口病。馬來西亞于1997年暴發(fā)由 EV71引起的 HFMD，有29例患者死亡［2］，1998年我國臺灣爆發(fā)EV71疫情，據(jù)不完全統(tǒng)計，有129106例感染患兒，其中405例為重癥患者，78例死亡，重癥患者的死亡率高達19.26%，死亡病例主要是 EV71感染［3，4］。2000年在新加坡也發(fā)生較大規(guī)模的HFMD［5］，

人是腸道病毒唯一宿主，傳染源是患者和隱性感染者。腸道病毒主要經(jīng)糞-口和/(或)呼吸道飛沫傳播，亦可經(jīng)接觸患者皮膚、黏膜泡疹液而感染。發(fā)病前數(shù)天，感染者咽部與糞便就可檢出病毒，通常以發(fā)病后一周內(nèi)傳染性最強?；颊呒S便、皰疹液和呼吸道分泌物均含有病毒，接觸之后可造成感染。為了解中山HFMD的主要病原體，幫助臨床及時有效的地診斷和治療HFMD，提高治愈率和減少傷殘率，并找到最合適的檢測標本，我們和中山市疾控中心合作，利用PCR技術(shù)快速檢測腸道病毒屬、EV71及CoxAl6，對2009年4月至8月到本院診斷的重癥HFMD患兒的糞便，肛拭子，咽拭子和部分皰疹液標本進行腸道病毒屬、EVTI型和CoxAl6檢測，結(jié)果顯示:2009年中山重癥HFMD的主要病原是EV7l和CoxAl6，二者共占腸道病毒陽性的96.3%，并有部分混合感染的現(xiàn)象存在，與朱冰［6］等報道略有不同。

從上述結(jié)果可以看出，這次暴發(fā)中79例重癥病例中55例為EV71型，占69.6%。說明EV71感染仍是此次感染導(dǎo)致重癥手足口病的主要病原體。從不同標本的檢出率可以看出糞便檢測陽性率最高。糞便標本檢測的腸道病毒通用引物陽性率為77.2%，EV71引物陽性率為57.1%，肛拭子的陽性率和糞便的陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異，明顯高于咽拭子等其他標本。各類標本之間病毒引物陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。以上結(jié)果說明糞便陽性率最高，應(yīng)作為病原學(xué)檢測的首選標本，在留取糞便困難時可采用肛拭子代替。

［1］ Li L，He Y，Yang H，et al.Genetic characteristics 0f human enterovims 71 and coxsackievims A16 circulating from 1999 to 2004 in Shenzhen，People's Republic of China.J Clin Microbiol，2005，43:3835-3839．

［2］ AbuBakar S，Chee HY，AI-Kobaisi MF，et al.Identification 0f enterovirus 71 isolates from an outbreak 0f hand-foot and mouth disease(HFMD)with fatal cases of encephalomyelitis in Malaysie.Virus Res，1999，61(1):1-9．

［3］ Lin TY，Chug LY，Hsia SH，et al．The 1998 enterovirus 71 outbreak in Taiwan:pathogenesis and management.Clin Infect Dis，2002，34(Suppl 2):S52-57．

［4］ Yan JJ，Su U，Chen PF，et al.Complete genome analysis of enterovirus 71 outbreak in TaiWan and rapid identification 0f enterovirus 7l and coxsackievirus A16 by RT-PCR.J Med Viml，2001，65:331-339．

［5］ Ahmad k，Hand，foot，and mouth disease outbreak reported in Singapore.Lancet，2000，356:1338．

［6］ 朱冰，鐘家禹，夏慧敏等.2008年廣州地區(qū)手足El病的病原學(xué)研究.中華兒科雜志，2010，48(2):127-131．

Pathogens analysis of 79 cases severe HFMD

LUO Xu-feng，ZHOU Tao，LIU Yu-ling，et al．Department of Pediatrics Boai Hospital of Zhongshan City gongdong province，Zhognshan 528400，China

ObjectiveTo analyzethecausativeagentofseverehand-foot-mouth disease(HFMD)and provide the basisfortheprevention and controlof severe HFMD.Methods79 cases of severe HFMD children's stool，rectalswab，throat swab，herpesfluid specimens were collected for RT-PCR，qualitative detection of entero-virusuniversal primersEV71 and COA16 of the VP1 genes pecific primers by RT-PCR.Results257specimens were collected，enterovirus universal primers was positivein 164 cases，118 cases of EV71positive，CoA 16 positivein 40 cases，79 stool specimens，virus isolation，61 were positive，the positive rate was 77.2%，79 rectal swabs，53 were positive for virus isolation，the positive rate was 67.1% ，79 throat swabs，virus isolation，41were positive，the positive rate 51.9%，9 herpes fluid of 20 virus isolation-positive，the positive rate of 45%.ConclusionEV71 is the main pathogens of severeHFMD.the positive rate of stool，rectal swabs，throat swabs，and herpes fluid is inconsistent．

HFMD;Enterovirus;EV71;COA16

重癥手足口病綜合救治與機制研究(項目編號:20101A008)

528400中山市博愛醫(yī)院兒科

付四毛