李玉芹，趙欣

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都610072;2.成都市血液中心檢驗(yàn)科，四川成都610041)

離心時(shí)間對(duì)凝血常規(guī)測(cè)定結(jié)果的影響

李玉芹1，趙欣2

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都610072;2.成都市血液中心檢驗(yàn)科，四川成都610041)

目的分析不同時(shí)間離心全血所得的血漿測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)和纖維蛋白原濃度(FIB)的結(jié)果差異性，確定最適合實(shí)際工作的離心時(shí)間。方法將100例門診患者的抗凝全血(每例兩管)分為A組和B組，在相同條件下，分別離心10 min和5 min，用CA-7000型全自動(dòng)血凝儀進(jìn)行血凝常規(guī)檢測(cè)，并且應(yīng)用XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板計(jì)數(shù)。結(jié)果各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果在離心5和10 min兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);血漿血小板計(jì)數(shù)A組(離心10 min)和B組(離心5 min)的測(cè)定結(jié)果范圍分別為(1～8)×109/L和(3～10)×109/L，均達(dá)到了乏血小板血漿的標(biāo)準(zhǔn)［＜(10～20)×109/L］［1］。結(jié)論凝血常規(guī)標(biāo)本可以3000 r/min離心5 min后進(jìn)行測(cè)定。

離心時(shí)間;凝血酶原時(shí)間;活化部分凝血活酶時(shí)間;纖維蛋白原濃度;凝血酶時(shí)間

凝血常規(guī)包括凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)和纖維蛋白原濃度(FIB)，其作為凝血功能異常的篩查試驗(yàn)，在出血性疾病診斷、抗凝治療監(jiān)測(cè)、術(shù)前檢查中具有重要作用。凝血四項(xiàng)的標(biāo)本需要離心，離心時(shí)間的長(zhǎng)短決定了能否獲得乏血小板血漿，凝血標(biāo)本一般要求3000 r/min離心10 min后分離血漿［2］。但在實(shí)際工作中由于生化、免疫等標(biāo)本都是離心5 min，而凝血標(biāo)本離心時(shí)間與它們不一致，帶來(lái)很多不便。還有當(dāng)遇到急診標(biāo)本時(shí)，為了提高工作效率(特別是對(duì)于危重患者)，我們想了解縮短標(biāo)本的離心時(shí)間是否可能導(dǎo)致假性異常結(jié)果。本研究將兩組抗凝全血分別離心5和10 min，在相同條件下測(cè)定結(jié)果，然后分析兩組結(jié)果差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以確定最適合實(shí)際工作的離心時(shí)間。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)采集2010年8月13～21日在四川省人民醫(yī)院就診的100例門診患者的抗凝全血，每例患者抽血兩管，分為A、B兩組，A組離心10 min，B組離心5 min。

1.2 方法相同條件下(每天上午8～10點(diǎn)同一患者同時(shí)抽兩管抗凝全血)，用規(guī)格為21 g×1″的BDTM回血采血針采取患者的靜脈血1.8 ml(無(wú)溶血、脂血、黃疸和血凝塊，如有上述情況的標(biāo)本棄之)，于0.109 mol/L枸櫞酸鈉為抗凝劑(血液與抗凝劑之比為9︰1)的藍(lán)頭真空采血管中(每例兩管)，輕輕顛倒5～8次使之充分混勻，并在管上做好標(biāo)記。兩組血液以3000 r/min的轉(zhuǎn)速分別離心10和5 min，立刻按照操作手冊(cè)上機(jī)(SysmexCA-7000型全自動(dòng)血凝儀)進(jìn)行血凝常規(guī)(PT、APTT、FIB、TT)檢測(cè)。用Sysmex XE-2100全血細(xì)胞分析儀對(duì)兩組標(biāo)本血漿進(jìn)行血小板測(cè)定，然后用改良牛鮑計(jì)數(shù)板手工復(fù)查。SysmexCA-7000型全自動(dòng)血凝儀所用試劑及質(zhì)控品均為德國(guó)Dade Behring Marburg公司生產(chǎn)的凝血試劑;Sysmex XE-2100血液分析儀所用試劑為日本Sysmex公司生產(chǎn)的儀器配套試劑。

1.3 室內(nèi)質(zhì)控每天測(cè)定標(biāo)本前分別用與相應(yīng)儀器配套的同一批號(hào)的高中兩種值的質(zhì)控品對(duì)Sysmex CA-7000型全自動(dòng)血凝儀和Sysmex XE-2100全血細(xì)胞分析儀進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，各項(xiàng)目均處于在控狀態(tài)。各項(xiàng)目重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)定的變異系數(shù)(CV)均＜5%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 10.0專業(yè)版統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析。檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同離心時(shí)間凝血各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 不同離心時(shí)間凝血各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果的比較

2.2 不同離心時(shí)間血漿血小板計(jì)數(shù)A組和B組的測(cè)定結(jié)果范圍分別為(3～12)×109/L和(1～8)×109/L，均達(dá)到了乏血小板血漿的標(biāo)準(zhǔn)［＜(10～20)×109/L］［1］。

3 討論

在血栓和止血檢驗(yàn)的全過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果受到受血者狀態(tài)、標(biāo)本采集后放置時(shí)間與處理、抗凝劑與試劑、儀器設(shè)備等多方面因素的影響［3］。鑒于此，我們?cè)O(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)是將100例門診患者的靜脈全血分兩組，在相同條件下分別離心10和5 min，立即用CA-7000型全自動(dòng)血凝儀測(cè)定結(jié)果，最大限度地保證了對(duì)比實(shí)驗(yàn)單變量的原則。

在實(shí)際工作中，因免疫、生化、凝血標(biāo)本都使用共同離心機(jī)離心，而免疫、生化標(biāo)本離心時(shí)間為5 min，若凝血標(biāo)本離心10 min，常常是先與免疫、生化標(biāo)一起離心5 min后，又再離心5 min。有些檢驗(yàn)人員，在離心5 min后也就未再離心，使得凝血標(biāo)本的離心時(shí)間不一致，因此我們想通過(guò)實(shí)驗(yàn)，觀察凝血標(biāo)本離心10 min和離心5 min之間各項(xiàng)結(jié)果是否會(huì)受影響。從表1可以看出，各項(xiàng)凝血指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

雖然各項(xiàng)凝血檢驗(yàn)結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但APTT的P值最小(P=0.052)，說(shuō)明離心時(shí)間的縮短對(duì)內(nèi)源性凝血途徑的檢測(cè)影響最大。究其原因，我們分析認(rèn)為，血小板在體內(nèi)凝血過(guò)程中發(fā)揮重要作用。活化血小板提供的血小板第三因子(PF3)是體內(nèi)凝血過(guò)程重要組成部分。PF3參與內(nèi)源性凝血途徑中復(fù)合物FⅨ-FⅧa-Ca-PF3的合成，不僅對(duì)因子Ⅹ(FⅩ)有活化作用，而且血小板對(duì)FⅧ具有濃縮作用并能促進(jìn)FⅨ活化［4］。體外檢測(cè)APTT時(shí)就是以腦磷脂代替血小板提供催化表面的。在共同途徑中，PF3提供催化表面，促進(jìn)凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶?；罨蜃?FⅩa)在血小板膜上結(jié)合可加速凝血反應(yīng)，其催化凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶的能力，比未結(jié)合活化因子Ⅹ促凝快300000倍［5］。研究表明，血小板的磷脂與蛋白成分共同促進(jìn)了凝血酶原酶與凝血酶的形成，使整個(gè)凝血過(guò)程加速2×108倍［6］。這樣算下來(lái)，血小板可使內(nèi)源性凝血途徑提速將近1000倍。如果離心時(shí)間不夠，血小板沒有完全沉降，相應(yīng)凝血的磷脂催化表面增加，從而使APTT檢測(cè)時(shí)間縮短。因此必須保證3000 r/min及5 min的離心速度和時(shí)間，這樣既能提高檢驗(yàn)速度，又能確保獲得乏血小板血漿，以避免影響APTT的結(jié)果，從而使免疫、生化、凝血標(biāo)本離心時(shí)間保持一致.

［1］陳宏礎(chǔ)，王鴻利等，全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:202.

［2］叢玉隆.關(guān)于衛(wèi)生部出凝血時(shí)間操作規(guī)程《通知》的理解［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2001，24(3):158.

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The influence of centrifugal time to results of indexes of coagulation

LI Yu-qin1，ZHAO Xin2(1. Department of Clinical Laboratory，Sichuan Provincial People's Hospital，Chengdu 610072，China;2.Clinical Laboratory Department of Chengdu blood center，Chengdu 610041，China)

ObjectiveTo ascertain the optimum centrifugal time for our work by analysing the differences between the blood plasma specimen's results which include plasma prothrombin time(PT)，activated partial thrombo-plasting time(APTT)，thrombin time(TT)and fibrinogen concentration(FIB)which are centrifuged in different time.Methods100 outpatients vein entire blood samples(two per example)are divided into A group and B group，which is respectively centrifuged 10 minutes and 5 minutes in the same situation.The PT，APTT，TT and FIB results were tested by CA-7000 full-automatic blood coagulation analyzer.The platelet of the blood plasma were measured by Sysmex XE-2100 full-automatic blood cell analyzer.Resultsin centrifugal 10 minutes and 5 minutes has no significant difference(P＞0.05).The range of the results of the platelet in the plasma for A group and the B group is(1～8)×109/L and(3～10)×109/L respectively，both of them are up the standard of the poor platelet plasma［＜(10～20)×109/L］.ConclusionCoagulation specimen can be measured by centrifuged with 3000 r/min speed，5 minutes.

Centrifugal time;Plasma prothrombin time;Activated partial thromboplasting time;Thrombin time;Fibrinogen concentration

R446.111

A

1672-6170(2012)05-0092-02

2012-02-17;

2012-07-18)