李 勝 涂文升 鄧秋麗

（廣西腫瘤防治研究所藥劑科，廣西 南寧 530021）

健脾益腎顆粒由黨參、枸杞子、女貞子、白術(shù)、菟絲子、補(bǔ)骨脂（鹽灸）等中藥經(jīng)提取加工而成的顆粒劑。具有健脾益腎的功效，用于減輕腫瘤病人術(shù)后放、化療副反應(yīng)，提高機(jī)體免疫功能以及脾腎虛弱所引起的疾病。據(jù)文獻(xiàn)報道[1]：健脾益腎顆粒能有效地減輕腫瘤患者化療的毒副作用，提高患者的免疫功能；臨床研究表明健脾益腎顆粒能預(yù)防化療后白細(xì)胞減少[2]；對腫瘤患者化療中或化療后的脾腎兩虛癥具有明顯的療效[3]。對肺癌化療相關(guān)性貧血有一定治療作用[4]。健脾益腎顆?？筛纳破⒛I陽虛型慢性腎炎患者的臨床癥狀、體征及炎癥介質(zhì)鳥IL-6的水平，療效優(yōu)于腎炎四味片[5]。對慢性乙型病毒性肝炎患者的治療顯示其具有免疫細(xì)胞增生作用，肝功能恢復(fù)良好，具有較強(qiáng)護(hù)肝、抗炎作用，是臨床療效較好的護(hù)肝藥，同時具有促進(jìn)慢性乙型病毒性肝炎患者免疫功能的作用[6]。未檢索到有測定健脾益腎顆粒含量的文獻(xiàn)報道。在參考有關(guān)文獻(xiàn)[7]的基礎(chǔ)上，建立了反相高效液相色譜法測定健脾益腎顆粒中齊墩果酸含量的方法，本法準(zhǔn)確、簡便、快速，可作為健脾益腎顆粒的質(zhì)量控制指標(biāo)。

1 儀器與試劑

島津LC-10AVP高效液相色譜儀、SPD-10AVP紫外外-可見檢測器、WML-2010（色譜工作站）；甲醇（高效液相色譜淋洗劑，上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、磷酸為分析純，雙蒸水（自制）。

齊墩果酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0709-9808）；健脾益腎顆粒為北京XX制藥廠產(chǎn)品（批號：10010103、10010306、10010320）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Platisil ODS柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-水-冰醋酸（30∶63∶3），流速1.0mL/min；檢測波長210nm，柱溫40℃。結(jié)果見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對照品10.5mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（0.21mg/L）。

2.3 供試品溶液的制備

取健脾益腎顆粒適量，研磨，精密取健脾益腎顆粒粉末2.00g，置具塞三角燒瓶中，加入流動相20.0mL，搖勻，稱重，超聲提取40min，取出，放至室溫，再稱定重量，用流動相補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾紙過濾，取續(xù)濾液1.0mL，離心15min（15 000r/min），上清液即為供試品溶液。

2.4 空白試驗(yàn)

取除去女貞子以外的其他4味藥材，按樣品制備方法制成陰性溶液。精密吸取供試品溶液、陰性溶液各15.0μL，對照品溶液10.0μL，注入液相色譜儀中，繪制液相色譜圖，由色譜圖看出，在對照品色譜圖相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性溶液在此峰位無吸收，對本品中齊墩果酸的含量測定無干擾，方法專屬性良好。見圖1。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線考察

精密吸取齊墩果酸對照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μL，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程Y=4.8×105+7.5×103X，r=0.999 9，結(jié)果表明，齊墩果酸在0.525～3.675μg的線性范圍線性關(guān)系良好，測得最低檢出限為0.525μg。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果齊墩果酸峰面積RSD為1.67%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

1.標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

2. 樣品HPLC色譜圖

3.齊墩果酸線性關(guān)系圖

4. 缺柚皮苷的HPLC色譜圖

取供試品溶液室溫放置，分別于制備后0、4、8、12、24、48h 進(jìn)行測定，結(jié)果齊墩果酸峰面積RSD為1.15%。表明齊墩果酸在48 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取同一樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下操作，制成供使品溶液，進(jìn)行測定，齊墩果酸含量RSD為1.70%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密取2.0已知含量的健脾益腎顆粒粉末，加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)液，按2.3方法制成供試品溶液，進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定

分別精密取不同批號的健脾益腎顆粒粉末共9份（每一批號3份），按“2.3”項(xiàng)下制備，各取15.0μL，注入液相色譜儀，測定，即得。含量測定結(jié)果見表2。

3 討 論

健脾益腎顆粒是以中藥經(jīng)科學(xué)組方，現(xiàn)代工藝制備的顆粒型制劑。具有保肝、護(hù)肝、提高患者抵抗力及減輕惡性腫瘤患者因放、化療引起的毒副作用等[1-7]。但利用多種搜索引擎及維普數(shù)據(jù)庫均沒有發(fā)現(xiàn)該制劑的質(zhì)量控制方法。本文在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立簡便、快速、可靠的用RP-HPLC法測定該制劑中齊墩果酸的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)。

該方法取健脾益腎顆粒，研磨，精密稱取2.0g，置于具塞三角燒瓶中，加入20.0mL流動相，密塞，稱重，置于CQ-80超聲波清洗機(jī)（上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠），超聲提取40min，放至室溫，稱重，用流動相補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾紙過濾，取續(xù)濾液1.0mL，離心15min（15 000r/min），上清液即可進(jìn)樣測定，齊墩果酸的理論塔板數(shù)均在1 1000以上，分離度均＞1.5。完全達(dá)到藥典的一般藥物分析的要求。

經(jīng)上述HPLC條件及方法的測定，健脾益腎顆粒每克含齊墩果酸在40.4087～42.4021mg范圍之間，按藥典規(guī)定每克健脾益腎顆粒含齊墩果酸應(yīng)不低于38.3883mg。

筆者曾用健脾益腎顆粒，分別加入甲醇、甲醇-水超聲提取30min；還用加熱回流3h，經(jīng)測定無齊墩果酸保留峰。還用甲醇-水溶解，三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷提取液，水浴揮干，用5mL甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL的量瓶中，取1.0mL，離心10min（15000r/min），注入高效液相色譜儀中測定，分離效果也較好，但經(jīng)過對比，齊墩果酸的含量較少，即提取不完全，沒有本法的效果好。

[1]董海濤,劉浩,關(guān)念波,等.健脾益腎顆粒減輕528例腫瘤患者化療毒副作用的臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(9):12-13.

[2]彭軼霞,張亞密,潘改燕.健脾益腎顆粒預(yù)防化療后白細(xì)胞減少癥的臨床研究[J].湖北中醫(yī)雜志,2009,31(5):29-30.

[3]江玲,鄧曉玲,江洪.健脾益腎顆粒治療惡性腫瘤化療副反應(yīng)觀察[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志,2006,22(4):234-235.

[4]劉杰,侯麗,陳信義.健脾益腎顆粒治療肺癌相關(guān)性貧血的臨床研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2006:24(2):277-278.

[5]田彬,范伏元.健脾益腎顆粒劑對脾腎陽虛型慢性腎炎患者尿IL-6水平的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,28(4):50-52.

[6]崔愛玲、范天利.健脾益腎顆粒對慢性乙型病毒性肝炎患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].中國藥業(yè),2008,17(15):22-23.

[7]王林鳳,楊紅俠.HPLC法測定潮安顆粒中齊墩果酸的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2007,27(2):64-65.