黃海寧

（廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院，廣西 南寧 530021 ）

紅花痛經(jīng)顆粒為本院正在研制的中藥復(fù)方制劑，處方由紅花、赤芍、當(dāng)歸、益母草等10味中藥組成，具有活血化瘀，止痛等功效。用于瘀血阻滯，月經(jīng)疼痛等癥。為了更好的控制紅花痛經(jīng)顆粒的產(chǎn)品質(zhì)量，我們采用HPLC法對赤芍中芍藥苷進行了含量測定，取得了滿意的結(jié)果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，Agilent1100可變波長紫外檢測器，上海精密JH502B電子天平，超聲儀（上海必能信）（40W，50HZ）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（批號110736-200526，中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用）。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。紅花痛經(jīng)顆粒及陰性樣品均為本院自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗

采用反相高效液相色譜法，以Kromasil菲羅門C18柱（250mm×4.6μm，5μm）為色譜柱；以乙腈-0.1%磷酸溶液 （15∶85）為流動相，流速：1.0mL/min；檢測波長為230nm；柱溫為室溫。進樣量：10μL；理論板數(shù)按芍藥苷色譜峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑溶解并配置成濃度為40.4μg/ml的溶液，作為芍藥苷對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項下內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，稱取0.1g，精密稱定，置25mL棕色容量瓶中，加入50%乙醇至近刻度，超聲處理30分鐘，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照品溶液的制備

按處方比例分別稱取除赤芍外其他藥材適量，按制備工藝制得缺赤芍的陰性樣品，再按“2.3供試品溶液的制備”項下方法制備得陰性樣品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，分別進樣，進樣量均為10μL，分別注入液相色譜儀，依法測定。結(jié)果表明，陰性對照品溶液在相應(yīng)位置無芍藥苷色譜峰，說明陰性無干擾（見圖1、圖2、圖3）。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取芍藥苷對照品溶液（濃度為40.4μg/ml），分別進樣4、6、8、10、15、20μL，記錄色譜峰的面積。以芍藥苷進樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到芍藥苷的回歸方程為：Y=1717121.1X+20541.6，r=0.9990（n=6）。表明芍藥苷進樣量在0.1616～0.8080μg范圍呈良好線性關(guān)系。

2.6 儀器精密度試驗

精密吸取同一芍藥苷對照品溶液（濃度為40.4μg/mL ）各10μL，分別連續(xù)進樣6次，測定峰面積，經(jīng)計算得芍藥苷的平均峰面積為719175.3，RSD為0.72%，說明儀器精密度較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

按供試品溶液制備方法制備得供試品溶液后分別于0、1、2、4、6、8，12h進樣，測定峰面積，RSD為0.36%，說明供試液在本實驗室實驗條件下12h內(nèi)保持穩(wěn)定。

圖1 芍藥苷對照品溶液

圖2 紅花痛經(jīng)顆粒供試品溶液

圖3 缺赤芍陰性對照液

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批號的紅花痛經(jīng)顆粒6份，按供試品制備方法處理，依法測定，測得芍藥苷的平均含量為8.62mg/g，RSD為1.28%（n=6），表明此方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收實驗

取同一批次 （批號為091001，含量為8.62mg／g）的紅花痛經(jīng)顆粒粉末5份，每份0.05g，精密稱定，再分別精密加入芍藥苷對照品溶液（濃度為40.4μg/mL，加入量為15mL），按供試品溶液制備方法操作，按上述色譜條件進樣測定及分析，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.10 樣品的測定

取三批樣品（批號分別為091001，091002，091003），分別取其裝量差異項下內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，精密稱取0.1g，按供試品的制備方法制備供試品溶液，分別按上述色譜條件進樣測定、計算含量，見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討 論

通過參考文獻[1-3]，我們選擇乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動相，經(jīng)多次試驗進行流動相比例的選擇，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流動相比例為乙腈-0.1 %磷酸溶液（15∶85 ）時，在此色譜條件下，供試品色譜圖中的芍藥苷峰與其它雜質(zhì)峰能達到基線分離，峰形對稱度較好，色譜峰保留時間合適，故選擇最終的流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）。采用HPLC法測定制劑中芍藥苷的含量，具有分離效果好，干擾成分少，樣品處理簡便，分析快速，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，結(jié)果可靠的優(yōu)點。

[1]姜曉燕,羅琳.HPLC法測定赤芍飲片中芍藥內(nèi)酯苷及芍藥苷的含量[J].齊魯藥事,2008,27(3):147-149.

[2]劉玉紅,張惠珍.高效液相色譜法測定芍藥中芍藥苷的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2006,26(10):1308-1309.

[3]李矗,王汀.高效液相色譜法測定赤芍中赤芍總苷的含量[J].安徽醫(yī)藥,2005,9(11):820-821.