張穎 王偉麗 朱明偉

河南省商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，河南商丘 476000

高效液相色譜法測(cè)定桃紅促孕合劑中芍藥苷的含量

張穎 王偉麗 朱明偉

河南省商丘市食品藥品檢驗(yàn)所，河南商丘 476000

目的建立桃紅促孕合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法色譜條件Agilent-C18色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），流速：1.0 mL/min，波長(zhǎng)：230 nm。結(jié)果芍藥苷在0.308 2～6.164 0μg的范圍內(nèi)，有良好的線性關(guān)系，r=0.999 9，平均回收率為98.79%，RSD為0.96%。結(jié)論建立了桃紅促孕合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，該方法操作易行，穩(wěn)定可靠，可用于桃紅促孕合劑中芍藥苷的含量測(cè)定及該制劑的質(zhì)量控制。

桃紅促孕合劑；芍藥苷；高效液相色譜法

桃紅促孕合劑是經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑[1]（豫藥制字Z04140004），有補(bǔ)腎化瘀、理氣和血之功效。經(jīng)過(guò)多年的應(yīng)用證明用于調(diào)節(jié)垂體卵巢功能，促成熟卵破裂排卵，治療月經(jīng)不調(diào)，無(wú)排卵性不孕癥的功效顯著。其處方由赤芍、熟地黃、赤芍、丹參、桃仁、紅花等十味藥組成，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能有效地控制藥品質(zhì)量。根據(jù)藥效和處方確定赤芍為方中主要藥味，而芍藥苷是赤芍的有效成分之一，為了進(jìn)一步提高該制劑標(biāo)準(zhǔn)，筆者采用HPLC法對(duì)處方中的芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 HPLC；Agilent-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，AUW-220D電子天平（上海方瑞儀器廠）。

1.2 試藥

桃紅促孕合劑（商丘市柘城縣人民醫(yī)院提供，批號(hào)：110409、110520、110525）。芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110736-201035）。高效液相色譜所用試劑均為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm，柱溫：35℃，流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量：10μL。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置量瓶中，加稀乙醇制成每毫升含30.82μg的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備取供試品5支，混勻，精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，振搖提取，并加稀乙醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

吸取對(duì)照品溶液（30.82μg/mL）1.0、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0μL進(jìn)樣，芍藥苷的保留時(shí)間為6.68min，以芍藥苷峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，芍藥苷的回歸曲線Y=94.803X+2.865，r=0.999 9，芍藥苷在0.308 2～6.164 0μg線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 陰性干擾試驗(yàn)

除赤芍外，其他各藥味均正常投料制成陰性缺赤芍對(duì)照品，然后制成陰性供試品溶液。同法檢測(cè)，在與芍藥苷對(duì)照品色譜峰相應(yīng)的位置上，供試品有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在此位置上沒(méi)有。見(jiàn)圖1。

2.5 精密度考察

取同一供試品溶液（批號(hào)：110520）測(cè)定6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD=0.84%。

2.6 重復(fù)性考察

精密稱?。ㄅ?hào)：110520）樣品，制備供試品溶液6份，進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果平均含量為1.032mg/mL，RSD=1.13%。

2.7 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液（批號(hào)：110520），進(jìn)樣（0、1、2、4、8、12 h），按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值。計(jì)算結(jié)果，RSD=0.77%。

2.8 加樣回收率考察

精密量取已知含量的樣品6份（批號(hào)：110520），精密加入同一濃度（0.195 4 mg/mL）對(duì)照品，照上述方法制備，按上述色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定，計(jì)算，平均回收率為98.79%，RSD為0.96%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法測(cè)定樣品中芍藥苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

本研究以超聲提取、振搖提取，回流提取為不同提取方法，同時(shí)處理30 min、1 h后，進(jìn)行檢測(cè)[3-6]，回流、超聲和振搖30min和1 h的提取效果基本相似，說(shuō)明處理30min時(shí)樣品中的芍藥苷已經(jīng)被提取完全。而回流、超聲和振搖30min芍藥苷含量分別為2.241、2.202、2.235mg/mL，提取結(jié)果相近，考慮到實(shí)際操作過(guò)程的可操作性，本實(shí)驗(yàn)采取了振搖提取的提取方法。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)

表2 樣品中芍藥苷的含量

桃紅促孕合劑是臨床實(shí)踐證明療效良好的醫(yī)院制劑，但該藥的質(zhì)量控制方法僅有薄層鑒別，考慮到赤芍是桃紅促孕合劑的主藥，本實(shí)驗(yàn)用HPLC法對(duì)該制劑中芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定，建立了該制劑的質(zhì)量控制方法。該方法能夠準(zhǔn)確并快速地控制該制劑的質(zhì)量，可用于桃紅促孕合劑中芍藥苷的含量測(cè)定。

[1]河南省醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn).豫藥制字：Z04140004[Z].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：96.

[3]凌明，馬安宇.HPLC測(cè)定胃腸合劑中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].中成藥，2008，30（9）：1311-1113.

[4]陳曉燕，李順祥.HPLC法測(cè)定阿歸養(yǎng)血糖漿中芍藥苷含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，15（3）：81-83.

[5]劉潔.反相高效液相色譜法測(cè)定白芍提取物中芍藥苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（9）：125.

[6]張建業(yè)，馮向東.HPLC法同時(shí)測(cè)定八珍益母丸中芍藥苷和甘草酸銨的含量[J].中國(guó)藥師，2011，14（7）：992.

Determ ination of Paeoniflori in Taohongcuyun M ixture by HPLC

ZHANG Ying WANGWeili ZHU Mingwei
Shangqiu Institute for Food and Drug Control,He′nan Province,Shangqiu,476000,China

ObjectiveTo establish a standard for determination of Paeoniflori in Taohongcuyun Mixture.MethodsChromatographic colum was Agilent-C18,themobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution(14∶86),the flow ratewas1.0mL/min,the detection wavelength was 230 nm.ResultsThe linear range of Paeonifloriwas 0.308 2-6.164 0μg, r=0.999 9.The average recovery of Paeonifloriwas 98.79%and RSD was 0.96%.ConclusionThemethod is simple,sensitive and accurte,and can be used to determine Paeoniflori in Taohongcuyun Mixture and quality control of Taohongcuyun Mixture.

Taohongcuyun Mixture;Paeoniflori;HPLC

R927.2

A

1673-7210（2012）10（a）-0116-02

張穎（1972-），女，本科，副主任藥師，從事藥品檢驗(yàn)及制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

2012-04-16 本文編輯：衛(wèi)軻）