施志農(nóng) 陳繼梅

一直以來(lái)，用酶聯(lián)法檢測(cè)乙型肝炎病毒(HBV)血清標(biāo)志物(HBV-M)是診斷HBV感染的常用方法，其中e抗原陽(yáng)性是判斷病毒復(fù)制和高傳染性的常用免疫學(xué)標(biāo)志物，對(duì)于HBeAg陽(yáng)性的乙肝患者，HBeAg陰轉(zhuǎn)并出現(xiàn)抗-HBe，提示HBV的復(fù)制停止，傳染性降低，意味著病情好轉(zhuǎn)。近年來(lái)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)檢測(cè)患者體內(nèi)病毒量的方法全面推廣，對(duì)乙肝患者診療從分子學(xué)角度提供了有力的支持，通過(guò)FQ-PCR我們認(rèn)識(shí)到少部分患者在出現(xiàn)HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換后，仍存在病毒復(fù)制，肝功能出現(xiàn)反復(fù)，病情遷延不愈?，F(xiàn)對(duì)我院門診及住院乙肝患者血清分別進(jìn)行乙型肝炎標(biāo)志物、HBVDNA、肝功能檢測(cè)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以探討乙型肝炎e抗原模式與HBVDNA及肝功能之間的關(guān)系。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年5月至2010年6月在蕪湖市第三人民醫(yī)院門診及住院乙型肝炎感染者1407例，所有病例皆同時(shí)具有肝功、血清乙型肝炎病毒學(xué)(HBVDNA)及乙型肝炎血清標(biāo)志物(HBV-M)等檢查結(jié)果，診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］，排除合并HCV、HAV等其他肝炎病毒感染者。其中男1066例，女341例，患者年齡7～76歲，平均(35.1±13.5)歲。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 血清HBVDNA載量檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR法)，儀器為美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的SLAN Real-Time PCR Detection System 7300熒光定量檢測(cè)儀，試劑購(gòu)自上?？迫A生物工程股份有限公司，以HBVDNA＞103copirs/ml為陽(yáng)性結(jié)果。

1.2.2 血清HBV-M檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)，試劑購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司的。檢測(cè)乙型肝炎患者血清 HBV標(biāo)志物(HBV-M)，即 HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc。嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，結(jié)果在MK3型酶標(biāo)儀上測(cè)定，根據(jù)HBV-M結(jié)果按HBeAg模式分為二組，即HBeAg陽(yáng)性組和HBeAg陰性組，前者包括HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽(yáng)性和 HBsAg、HBeAg陽(yáng)性病例，后者包括 HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性和 HBsAg、抗-HBc陽(yáng)性及抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性病例。

1.2.3 肝功能生化指標(biāo)檢測(cè) 儀器為日立7180全自動(dòng)生化分析儀，以評(píng)估肝功能常用炎癥指標(biāo)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，及評(píng)估肝損傷指標(biāo)膽堿脂酶(CHE)作為觀察指標(biāo)。ALT、AST、CHE均采用雙試劑速率法。試劑購(gòu)自溫州東甌津瑪生物科技有限公司。

2 結(jié)果

2.1 1407例慢性乙型肝炎感染者中不同e抗原模式中HBVDNA陽(yáng)性率、病毒載量及ALT、AST、CHE結(jié)果比較(見(jiàn)表1)。

由此表可以得出，e抗原陽(yáng)性組HBVDNA檢出率達(dá)到94.62%，與e抗原陽(yáng)性組相比存在顯著性差異(P＜0.01)，而e抗原陰性組中仍有42.80% 患者存在病毒復(fù)制，雖然病毒復(fù)制水平顯著低于e抗原陽(yáng)性組(P＜0.01)，兩組血清ALT、AST、CHE水平結(jié)果不存在顯著性差異(P＞0.05)，即慢性乙型肝炎感染者血清酶水平可能與HBeAg模式無(wú)關(guān)。

2.2 不同e抗原模式乙肝感染者中有病毒復(fù)制與無(wú)病毒復(fù)制其血清ALT、AST、CHE水平比較(見(jiàn)表2)。根據(jù)e抗原陽(yáng)性或陰性組中是否存在病毒復(fù)制再次分組，探討其與ALT、AST、CHE等血清酶水平關(guān)系。

表1 不同e抗原模式乙肝患者HBVDNA陽(yáng)性率、病毒載量及ALT、AST、CHE結(jié)果比較(±s)

表1 不同e抗原模式乙肝患者HBVDNA陽(yáng)性率、病毒載量及ALT、AST、CHE結(jié)果比較(±s)

注:*表示括號(hào)內(nèi)為陽(yáng)性率，率比較采用方差分析

表2 不同e抗原模式乙肝感染者有或無(wú)病毒復(fù)制血清ALT、AST、CHE水平比較(±s)

表2 不同e抗原模式乙肝感染者有或無(wú)病毒復(fù)制血清ALT、AST、CHE水平比較(±s)

注:HBeAg陽(yáng)性HBVDNA(-)組與HBVDNA(+)組經(jīng)t檢驗(yàn)*表示P＜0.05、＊＊表示P＜0.05，HBeAg陰性組中HBVDNA(-)組與HBVDNA(+)組經(jīng)t檢驗(yàn)★表示P＜0.01

我們的調(diào)查顯示不論e抗原陰性或陽(yáng)性，都存在有病毒復(fù)制組ALT、AST水平顯著高于無(wú)病毒復(fù)制分組，CHE水平低于無(wú)病毒復(fù)制組(P＜0.01)。病毒復(fù)制活躍時(shí)的肝臟炎癥均重于病毒復(fù)制水平較低時(shí)，提示病毒載量與肝臟炎癥及預(yù)后有一定的相關(guān)性。

3 討論

本研究系統(tǒng)的收集了在我院門診和住院就診的乙型肝炎感染者1407例，通過(guò)分析，發(fā)現(xiàn)在乙型肝炎感染者中，e抗原陽(yáng)性模式感染者502例，占35.68%，e抗原陰性模式感染者905例，占64.32%，e抗原陰性模式感染者明顯多于e抗原陽(yáng)性模式感染者。e抗原陽(yáng)性模式組血清HBVDNA檢出率及病毒載量水平都顯著高于e抗原陰性模式組，間接證實(shí)了血清HBeAg是病毒體內(nèi)復(fù)制的指標(biāo)，與HBVDNA載量指標(biāo)有良好的一致性［2、3］。另一方面，我們資料顯示，有27例e抗原陽(yáng)性患者血清中檢測(cè)不到HBVDNA載量，e抗原陰性組中仍有42.80%的患者存在病毒復(fù)制，雖然其病毒復(fù)制水平較陽(yáng)性者顯著降低 (P＜0.01)，因此，單純通過(guò) e抗原來(lái)推測(cè)HBV復(fù)制狀況的不確定性非常大，尤其在e抗原轉(zhuǎn)陰的情況下。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)，單純以e抗原模式分組討論其肝功能的關(guān)系，我們可以得出，二組之間ALT、AST、CHE等血清酶水平之間并不存在顯著性差異(P＞0.05)見(jiàn)表1。而這兩組病毒載量存在顯著性差異，即可認(rèn)為血清ALT、AST、CHE水平與體內(nèi)病毒復(fù)制無(wú)關(guān)，這與一些文獻(xiàn)報(bào)道相符［4、5］，但仍有一些報(bào)道持相反意見(jiàn)［6、7］，我們按e抗原不同模式中是否存在病毒復(fù)制再一次分類，結(jié)果顯示，e抗原陽(yáng)性模式組中有病毒復(fù)制的患者其血清ALT、AST水來(lái)顯著高于無(wú)病毒復(fù)制組，CHE水平顯著低于無(wú)病毒復(fù)制組(P＜0.01)見(jiàn)表2，e抗原陰性模式組也存在相同情況，有病毒復(fù)制組其ALT、AST水平高于無(wú)病毒復(fù)制組、CHE水平低于無(wú)病毒復(fù)制組。由此，我們得出與上面相反的結(jié)論，即血清ALT、AST、CHE水平與病毒載量相關(guān)［6、7］。我們認(rèn)為雖然機(jī)體對(duì)HBV的免疫應(yīng)答是造成肝組織損害的主要機(jī)制，但可能有HBV的直接參與，發(fā)生機(jī)制與免疫耐受被打破，病毒復(fù)制激發(fā)病變活動(dòng)有關(guān)［8］。

因此，對(duì)于乙型肝炎感染者，我們認(rèn)為e抗原雖能在一定程度上反應(yīng)HBV復(fù)制狀況，但由于HBV致病機(jī)理相當(dāng)復(fù)雜，由HBV病毒引起，機(jī)體的免疫反應(yīng)的共同作用的結(jié)果，單一e抗原指標(biāo)并不能很好的反應(yīng)HBV的復(fù)制狀況。e抗原主要反應(yīng)機(jī)體的免疫狀態(tài)，而HBVDNA直接檢測(cè)血中的病毒含量，能直接反映HBV的感染程度和病毒的復(fù)制情況，尤其是對(duì)于e抗原陰轉(zhuǎn)的感染者要加強(qiáng)HBVDNA的檢測(cè)，全面綜合分析e抗原、HBVDNA水平及肝功能指標(biāo)，才能協(xié)助評(píng)估病情的變化、嚴(yán)重程度，指導(dǎo)臨床對(duì)患者的診療。

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)．中華肝臟病雜志，2011，19(1):13-24．

［2］陳繼梅，施志農(nóng)，田蕓.熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA與血清標(biāo)志物關(guān)系探討．蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，34(2):158-159．

［3］吳麗萍，張建軍，杜瑞清.血清HBVDNA定量在不同類型慢性乙型肝炎中的檢測(cè)價(jià)仁值．汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，22(1):34-36．

［4］歐曉娟，王曉明，賈繼東，等.慢性乙型肝炎肝穿病理與血清HBVDNA及肝功能的關(guān)系．首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27(4):435-437．

［5］吳莉莉，董玲，沈錫中.慢性乙型肝炎血清HBeAg表達(dá)和HBV DNA水平與肝臟病理變化的相關(guān)性研究．中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2005，12(6):1029-1030．

［6］李紅梅，劉映霞，劉書(shū)香，等.e抗原陰性慢性乙型肝炎患者體內(nèi)病毒復(fù)制與病情的臨床關(guān)系．南華大學(xué)學(xué)報(bào)·醫(yī)學(xué)版，2006，34(4):592-593．

［7］Yuen MF，Nq IO，F(xiàn)an ST，et al.Significance of HBV DNA levels in liver histology of HBeAg and anti-HBe positive patients with chronic hepatitis B.Am J Gastroenterol，2004，99:2032-2037．

［8］吳麗萍，綿建軍，杜瑞清，等.HBeAg陰性慢性乙型肝炎的臨床病理特征．山東醫(yī)藥，2008，48(41):102-103．