崔一喆，夏長軍，，邢桂珍，焉秋龍，廖建維，馬迪陽，宮大慶，倪宏波

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶163319；2.哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司，黑龍江 哈爾濱150001；3.浙江海正藥業(yè)股份有限公司動(dòng)保事業(yè)部，浙江 臺(tái)州318000）

阿莫西林（Amoxicillin），是一種最常用的青霉素類廣譜β－內(nèi)酰胺類抗生素。阿莫西林對(duì)β－內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定，克拉維酸為不可逆性β－內(nèi)酰胺酶抑制劑，與阿莫西林聯(lián)合，可保護(hù)阿莫西林免遭β－內(nèi)酰胺酶水解，并使阿莫西林的抗菌作用顯著增強(qiáng)和抗菌譜拓寬。阿莫西林－克拉維酸的復(fù)方制劑已在臨床上廣泛應(yīng)用［1］。本試驗(yàn)以豬為研究對(duì)象，用高效液相色譜法測定豬血漿中AMO和CLA的含量，旨在為獸醫(yī)臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 阿莫西林－克拉維酸鉀注射用混懸劑：由海正藥業(yè)有限公司提供；其他常規(guī)試劑從市場購入；豬血漿：采新鮮健康豬血，3 000r／min離心15 min，血漿于－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要儀器 高效液相色譜儀Agilent，1200UV檢測器、柱溫箱、脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣伐、20RBAX，XDB－C18柱（5μm、150×4.6mm，Agilent公司）。TGL－16G型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 長白豬，體重約20kg。共5頭，圈養(yǎng)，自由采食飲水，飼喂不含抗菌藥物的全價(jià)日糧，試驗(yàn)前飼養(yǎng)7d。

1.4 色譜條件 檢測器為紫外檢測器；XDB－C18柱（5μm、150×4.6mm，Agilent公司），柱溫30℃；0.02mol／L磷酸二氫鉀∶甲醇＝91∶9，磷酸調(diào)pH值至3.5做流動(dòng)相；流速為1mol／min；檢測波長為222nm；進(jìn)樣量25μL。按常規(guī)方法處理血漿，同時(shí)測定回收率，精密度計(jì)算日內(nèi)變異系數(shù)。

1.5 藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

1.5.1 動(dòng)物給藥 5頭健康長白商品仔豬，飼喂7 d后，肌肉注射海正藥業(yè)有限公司AMO－CLA注射用混懸劑組。給藥前要充分將各混懸劑振搖混勻，以20mg／kg劑量（以AMO計(jì)）于耳后頸部肌肉注射。

1.5.2 血樣采集 給藥后按以下時(shí)間點(diǎn)前腔靜脈采血，0、0.2、0.33、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72、84、96h，每個(gè)采血點(diǎn)采血量約為5mL。

1.5.3 血樣處理與測定 血樣采集后，立即置于含肝素抗凝劑的塑料試管中，2 500r／min離心10 min，分離血漿，吸取上層血漿置于1.5mL離心管中，按1.4方法處理后測定AMO和CLA的含量。

1.5.4 數(shù)據(jù)處理 所得血藥濃度數(shù)據(jù)采用中國藥理學(xué)會(huì)編制的DAS藥物動(dòng)力學(xué)程序軟件在微機(jī)上處理，進(jìn)行優(yōu)化選擇和房室模型擬合，確定最適藥物動(dòng)力學(xué)模型，計(jì)算出藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，同時(shí)以血藥濃度平均值對(duì)時(shí)間作藥時(shí)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)本方法測定，AMO濃度在0.5～30mg／L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，絕對(duì)回收率為89.29%±6.73%，日內(nèi)變異系數(shù)4.43%，日間變異系數(shù)6.65%。CLA濃度在0.08～2.5mg／L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，絕對(duì)回收率為85.35%±4.59%，日內(nèi)變異系數(shù)3.26%，日間變異系數(shù)5.83%。表明本測定方法可用于AMO和CLA藥物動(dòng)力學(xué)的試驗(yàn)。

2.2 血漿中AMO和CLA含量測定結(jié)果 各組仔豬注射藥物后，各采血點(diǎn)血漿中AMO和CLA的含量測定結(jié)果見表1。圖1為AMO藥－時(shí)曲線，圖2為CLA藥－時(shí)曲線。

以上結(jié)果表明，以20mg／kg劑量（以 AMO計(jì)）肌肉注射混懸劑后，AMO血藥濃度約在2h即達(dá)到峰值；CLA血藥濃度約在1h即達(dá)到峰值。AMO在給藥后96h血藥濃度低于檢測限；CLA在給藥后96h血藥濃度低于檢測限。

表1 各組豬血漿中AMO和CLA濃度測定結(jié)果

2.3 AMO和CLA的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù) 根據(jù)表中血藥濃度測定結(jié)果，經(jīng)藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)處理程序DAS處理，得到模型選擇參數(shù)。依據(jù)模型確定原則，即擬合度R2越大，AIC值越小，則其模型擬合越好。通過比較可知肌肉注射AMO－CLA混懸液在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程符合權(quán)重為1／cc的一級(jí)吸收的二室模型。本文據(jù)此模型進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算，得出藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)結(jié)果見表2。

表2 各組豬AMO和CLA的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)

3 討論

3.1 關(guān)于血漿中AMO及CLA的測定方法 目前同時(shí)測定血漿中AMO和CLA含量的方法很多，其中HPLC方法是同時(shí)測定血漿中AMO和CLA含量使用最普遍的一種方法，常用流動(dòng)相為甲醇－磷酸鹽緩沖液，乙腈－磷酸鹽緩沖液，甲醇－乙腈－磷酸鹽緩沖液、磷酸鹽－三乙胺－甲醇緩沖液等［2－3］。本試驗(yàn)參照以上國內(nèi)外有關(guān)方法，經(jīng)過多次比較試驗(yàn)，并對(duì)前處理方法進(jìn)行改進(jìn)，采用磷酸二氫鉀－甲醇作流動(dòng)相，通過多次調(diào)整流動(dòng)相配比，以及流動(dòng)相pH值（pH值變化影響保留時(shí)間），最終確定流動(dòng)相為：0.02mol／L磷酸二氫鉀∶甲醇＝91∶9，磷酸調(diào)pH值為3.5。

由于 AMO和 CLA 都不穩(wěn)定［4－5］，所以測定血漿中CLA及AMO時(shí)，對(duì)照品要現(xiàn)配現(xiàn)用。本方法所測得AMO和CLA標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，AMO的檢測限為0.5～30mg／L，CLA的檢測限為0.08～2.5mg／L?；厥章试囼?yàn)表明，本檢測方法重現(xiàn)性良好，精密度試驗(yàn)表明，本方法檢測結(jié)果可靠，說明本試驗(yàn)所采用的方法可以用于血漿中CLA及AMO的測定。

3.2 關(guān)于藥物動(dòng)力學(xué) 本制劑中AMO的消除半衰期長達(dá)27.31h，CLA的消除半衰期長達(dá)22.38 h，說明本制劑有延緩藥物釋放作用。AMO曲線下面積（AUC）為316.257mg／L·h，說明 AMO在豬體內(nèi)的血管外組織分布廣泛。最大血藥濃度（Cmax）為22.472mg／L，達(dá)峰時(shí)間（Tmax）為2h，可見AMO在豬體內(nèi)分布快且持效時(shí)間長。按20 mg／kg劑量（以AMO計(jì)）肌肉注射同劑量本制劑72h后仍可維持1mg／L（以AMO計(jì)）的血漿濃度，該血漿濃度在豬體內(nèi)對(duì)普通的呼吸道病原菌如胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌等的生長能起到有效的抑制作用［6］。所以對(duì)普通的呼吸道病原菌如胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌所致呼吸道疾病的防治，可肌肉注射本制劑20mg／kg（以AMO計(jì)），每3d注射1次。

［1］王西林.阿莫西林聯(lián)合用藥的臨床進(jìn)展［J］.天津藥學(xué)，1997（3）：24.

［2］蔡金華，顧欣，劉雅妮.高效液相色譜法測定豬血漿中阿莫西林含量［J］.中國獸藥雜志，2005，39（7）：20－22.

［3］楊伶俐，徐帆，劉紅艷.高效液相色譜法測定人血漿中阿莫西林含量［J］.中國藥師，2008，11（8）：930－932.

［4］張秀英.阿莫西林混懸液的含量測定［J］.中國獸藥雜志，2000，34（6）：21－23.

［5］王齊放，李三鳴，趙喆，等.pH及不同緩沖鹽對(duì)阿莫西林化學(xué)穩(wěn)定性的影響［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，16（3）：176－178.

［6］Agerso H，F(xiàn)riis C.Bioavailability of amoxycillin in pigs［J］.Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics，1998，21：41－46.