李 進(jìn)，張德臣

(山東靜遠(yuǎn)化學(xué)有限公司，濟(jì)南 250100)

地昔尼爾最早是由瑞士Ciba-Geigy公司(現(xiàn)為諾華公司)在1994年第八屆國際農(nóng)藥化學(xué)會(huì)議披露的新型氰基嘧啶類殺蟲劑，商品名為丙蟲啶。該產(chǎn)品通過干擾昆蟲表皮形成來達(dá)到殺蟲的目的。地昔尼爾的抗害蟲原理，在歐洲專利GB2449746A中有詳細(xì)闡述。地昔尼爾的起效方式主要是通過噴灑在動(dòng)物的體表起作用。雖然該藥市場占有率很高，但采用HPLC法對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制的方法尚無報(bào)道。本研究采用HPLC法對(duì)其有關(guān)物質(zhì)及含量進(jìn)行了測定[1]。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀，包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP紫外檢測器及LC-solutions色譜工作站;FA2204B電子天平(萬分之一);地昔尼爾原料(山東靜遠(yuǎn)化學(xué)有限公司，批號(hào):091001、091002、091003);地昔尼爾對(duì)照品(百靈威科技有限公司);色譜甲醇(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司);雙蒸過濾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 phenomenex luna C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇 -水(30 ∶70)，流速1.0 mL/min，檢測波長269 nm;進(jìn)樣量20 μL，柱溫25 ℃。

2.2 檢測限及定量限試驗(yàn) 取地昔尼爾對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL約含0.05 mg的溶液，取上述溶液，用流動(dòng)相作為溶劑，并采用逐級(jí)稀釋的方法，連續(xù)進(jìn)樣，最終信噪比(S/N)約為3的濃度為0.1 μg/mL，信噪比(S/N)約為10的濃度為0.3 μg/mL。因此，本品的檢測限約為2 ng，定量限約為6 ng。

2.3 專屬性試驗(yàn) 取地昔尼爾原料適量，分別進(jìn)行酸、堿、氧化、高溫、光照破壞試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明:本品在酸性及堿性條件下穩(wěn)定性較差，高溫、光照及氧化條件下穩(wěn)定性較好，各降解的雜質(zhì)均能與主峰很好的分離;取流動(dòng)相進(jìn)樣分析，色譜圖如圖1所示，由圖1可知溶劑不干擾本品有關(guān)物質(zhì)測定，該方法專屬性良好。

圖1 空白溶劑HPLC圖譜

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取地昔尼爾原料適量加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL約含0.1 mg的溶液，作為供試液。取該供試液20 μL進(jìn)樣分析，色譜圖如圖2所示，由圖2可知，本品的理論塔板數(shù)為7534，主峰與最鄰近雜質(zhì)峰的分離度為8.838，因此，該方法系統(tǒng)適用性良好。

圖2 系統(tǒng)適用性HPLC圖譜

2.5 線性試驗(yàn)與范圍 取地昔尼爾對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含0.05 mg的溶液，分別取該溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為各濃度供試液。取各供試液進(jìn)樣分析，試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。用峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，線性回歸圖及線性回歸方程如圖3所示。該方法測定本品含量，濃度在1.01～20.16 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取線性試驗(yàn)項(xiàng)下中間濃度的供試液，進(jìn)樣分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法測定本品含量，重復(fù)性良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取地昔尼爾原料適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取1.0 mL加流動(dòng)相稀釋至10 mL，作為供試液。將該供試液在室溫下放置8 h，分別在0、1、2、4、6、8 h 時(shí)取樣20 μL注入液相色譜儀分析，試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，本品含量測定供試液，在室溫下8 h之內(nèi)，性質(zhì)基本穩(wěn)定。

2.8 中間精密度 取地昔尼爾原料適量，換不同的試驗(yàn)人員對(duì)其進(jìn)行含量測定，試驗(yàn)結(jié)果如表4所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法測定本品含量，中間精密度良好。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表4 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 回收率 精密稱取地昔尼爾原料約20、25、30 mg各三份，加甲醇溶解并稀釋至50 mL，作為供試品貯備液。取地昔尼爾對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照貯備液。精密移取各供試品貯備液1.0 mL至100 mL量瓶中，分別加入對(duì)照貯備液0.8、1.0、1.2 mL 各三份，作為80%、100%、120%組供試液;另取地昔尼爾對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取1.0 mL加流動(dòng)相稀釋至10 mL，作為對(duì)照品溶液。取各供試液及對(duì)照品溶液20 μL進(jìn)樣分析，試驗(yàn)結(jié)果如表5所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法測定本品含量，回收率良好。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 耐用性 分別換用不同品牌的色譜柱對(duì)本品進(jìn)行測定，除保留時(shí)間略有不同外，測定結(jié)果沒有顯著差異，該方法耐用性良好。

2.11 有關(guān)物質(zhì)測定 取地昔尼爾原料三批樣品，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含1.0 mg的溶液，取該溶液1.0 mL，加流動(dòng)相稀釋至10 mL，作為供試液;取該供試液20 μL進(jìn)樣分析，按面積歸一法計(jì)算本品的有關(guān)物質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果如表6所示。

表6 有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

2.12 含量測定 取地昔尼爾原料三批樣品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含0.1 mg的溶液，取該溶液1.0 mL，加流動(dòng)相稀釋至10 mL，作為供試品溶液;取各供試品溶液20 μL注入液相色譜儀分析，記錄色譜圖如圖4所示。另取對(duì)照品同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算本品含量，試驗(yàn)結(jié)果如表7所示。

表7 含量測定結(jié)果

圖4 含量測定HPLC圖譜

3 討論與小結(jié)

3.1 波長的選擇 地昔尼爾原料在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，掃描結(jié)果顯示本品的最大吸收波長為269 nm，因此選擇該波長作為本品含量測定的檢查波長。對(duì)于有關(guān)物質(zhì)的測定，采用二極管陣列進(jìn)行全波長測定后，最終確定選用269 nm作為有關(guān)物質(zhì)的測定波長。

3.2 流動(dòng)相的選擇 地昔尼爾原料的測定，通過調(diào)整甲醇與水的比例，比較利弊，選擇了甲醇 ∶水(30∶70)，在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)調(diào)整該比例不會(huì)對(duì)測定結(jié)果產(chǎn)生顯著的影響[1]。不同比例的流動(dòng)相測定結(jié)果如表8所示。

表8 不同比例流動(dòng)相對(duì)樣品含量的測定結(jié)果

3.3 等度、梯度對(duì)分離的影響 通過采用梯度分離后，本品的雜質(zhì)數(shù)量及分離度與等度洗脫比較，沒有顯著的差異，因此，選擇更為穩(wěn)定的等度洗脫進(jìn)行檢測。

3.4 柱溫對(duì)分離的影響 柱溫在25～30℃范圍內(nèi)，測定結(jié)果不會(huì)有顯著的變化。不同溫度的測定結(jié)果如表9所示。

表9 柱溫對(duì)樣品含量測定的影響

3.5 小結(jié) 綜上所述，該方法適用于地昔尼爾的有關(guān)物質(zhì)及含量測定，各方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果均符合規(guī)定。該方法的建立，以期為地昔尼爾的質(zhì)量控制及標(biāo)準(zhǔn)建立提供依據(jù)。

[1]孫毓慶，胡育筑.液相色譜溶劑系統(tǒng)的選擇與優(yōu)化[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2007:4.