趙 玲 ，劉 艷 ，宋國華 ，劉 燕 ，吳玉梅 ，徐 凱

（1.四川省洪雅縣畜牧獸醫(yī)局，四川 洪雅 620340；2.四川省內(nèi)江市畜牧局，四川 內(nèi)江 641000）

雅安某養(yǎng)殖規(guī)模為3000只左右的雞場，雞群感染了某疾病，發(fā)病率為50%，死亡率為30%左右。2012年6月12日，此雞場送檢10只5周齡病雞，其臨床表現(xiàn)為冠髯及頭部水腫，皮膚上可見大量的壞死結(jié)痂。筆者對其心、肝、脾、肺、腎、皮膚作了病理學(xué)診斷，同時也對此病例進(jìn)行了雞瘟和禽流感的血清學(xué)鑒別診斷，具體報告如下：

1 材料與方法

1.1 病料來源 雅安某雞場送檢的10只5周齡病雞，分別采取該10只病雞的心、肝、脾、肺、腎、皮膚等組織樣本。

1.2 儀器設(shè)備及病毒、血清、試劑等 HE染色試劑、石蠟，切片機(jī)、烘箱、熱水箱、顯微攝影系統(tǒng)；雞瘟病毒、禽流感病毒、酶標(biāo)SPA、待檢病雞血清，0.01 mol/L PBS封閉液，2mol/L H2SO4，pH 9.6的碳酸鹽緩沖液，3%H2O2，檸檬酸鹽緩沖液，OPD、酶標(biāo)板、酶聯(lián)檢測儀、微量加樣器等。

1.3 方法

1.3.1 病理學(xué)診斷

1.3.1.1 病料固定。用福爾馬林（10%）固定12~24h，將組織修成1 cm×1 cm×0.5 cm的切塊，繼續(xù)固定6~12 h。

1.3.1.2 水洗及脫水。水洗（流水沖洗1h左右），依次用75%酒精浸泡6~12 h，85%酒精浸泡6~12 h，95%酒精浸泡12 h，無水乙醇Ⅰ浸泡1~2 h，無水乙醇Ⅱ浸泡1~2 h。放入甲苯液透明，甲苯液Ⅰ1~2 h，甲苯液Ⅱ1~2 h。

1.3.1.3 包埋。將標(biāo)本放入甲苯石蠟，在溫度為60℃的溫箱內(nèi)保持30min，再將標(biāo)本轉(zhuǎn)入純石蠟于60℃烘箱中保持1~2h，然后迅速將溶蠟倒入模子內(nèi)并將材料放入底部。

1.3.1.4 切片。將蠟塊底部熔化后迅速粘在木塊上（2.5cm×2cm×1.2cm），修整多余的蠟，使蠟塊呈梯形，然后在切片機(jī)上切片（進(jìn)入距為5nm）。

1.3.1.5 表片。切下蠟片放入35℃左右的溫水中讓其自然伸展，再將涂上蛋白膠的載玻片放入水中，同時撈起切片材料，最后放入37℃烘箱內(nèi)干燥。

1.3.1.6 染色。將切片依次在下述溶液中浸泡：二甲苯Ⅰ2~5min，二甲苯Ⅱ2~5min，無水乙醇Ⅰ1min，無水乙醇Ⅱ1 min，95%酒精 1 min，85%酒精 1 min，75%酒精1 min，自來水洗2 min，蘇木紫浸10 min，自來水洗1 min，1%鹽酸酒精分化30s，水洗約5次，0.5%氨水促藍(lán)1 min，水洗1 min，1%伊紅溶液染色2~5 min，水洗1 min，75%酒精數(shù)秒，85%酒精數(shù)秒，95%酒精1 min，無水乙醇Ⅰ5min，無水乙醇Ⅱ5~10min，二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5~10min。最后在每張載玻片上滴一小滴樹脂膠，蓋上蓋玻片，放入烘箱烘干。

1.3.2 血清學(xué)診斷 病雞的臨床表現(xiàn)為冠髯及頭部水腫，皮膚上可見大量的壞死結(jié)痂。懷疑為雞瘟或禽流感，因此作了血清學(xué)鑒別診斷，主要進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。

步驟如下：用碳酸鹽緩沖液稀釋雞瘟和禽流感病毒病原，加樣置濕盒包被；用PBS沖洗酶標(biāo)板，以微量加樣器在每孔內(nèi)加PBS封閉液，置濕盒封閉，再用PBS沖洗酶標(biāo)板；以微量加樣器在每孔內(nèi)加PBS，在酶標(biāo)板的第1孔加待檢血清，混勻，依次倍比稀釋，置濕盒內(nèi)作用2h；用PBS沖洗酶標(biāo)板，再用PBS稀釋酶標(biāo)SPA后將稀釋液加入每孔中，置溫盒內(nèi)作用2 h；用PBS沖洗酶標(biāo)板，將檸檬酸鹽緩沖液與OPD、H2O2混勻，向每孔中加入此混合液，置濕盒內(nèi)避光顯色10 min；最后用濃硫酸終止反應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)診斷結(jié)果 通過對10例病雞的心、肝、脾、肺、腎、皮膚作病理切片，然后染色鏡檢，觀察到心、肝、脾、肺、腎均無明顯的病理變化，但皮膚病變很典型，其中60%~70%送檢病雞表現(xiàn)為皮膚棘狀層內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性包涵體，皮下有炎癥細(xì)胞浸潤，充血、出血等變化。詳見圖 1、2、3、4。

2.2 血清學(xué)鑒別診斷結(jié)果 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，觀察到在雞瘟和禽流感病毒稀釋液中加入酶標(biāo)抗體并無顏色反應(yīng)，得出試驗(yàn)結(jié)果為陰性，所以可以排除病雞患雞瘟和禽流感的可能。

圖1 感染雞皮膚棘狀層細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的包涵體（10×20 HE染色）

圖2 感染雞皮膚棘狀層細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的包涵體（10×40 HE染色）

圖3 病雞皮膚破潰處大面積充血、出血（10×20 HE染色）

圖4 病雞皮下嚴(yán)重淤血及組織增生（10×20 HE染色）

3 分析與討論

3.1 初診結(jié)論 以上所示的病理學(xué)圖片都是雞痘的特征性病變。病雞眼瞼、喙角、翼下等多處出現(xiàn)暗褐色結(jié)痂，可能是由于最初細(xì)小的痘疹隨著體積增大，形成如豌豆大的灰色或灰黃色結(jié)節(jié)，而痘疹表面凹凸不平，結(jié)節(jié)堅(jiān)硬而干燥，有時結(jié)節(jié)的數(shù)目很多，就互相聯(lián)接而融合，從而產(chǎn)生大的痂塊，與雞痘的臨床表現(xiàn)吻合。通過作雞瘟和禽流感的血清學(xué)鑒別診斷，結(jié)果顯示陰性，也排除了感染雞瘟和禽流感的可能性。因此，該病例確診為雞痘。

3.2 雞痘的誘發(fā)因素 皮膚型雞痘一般流行于秋季和冬初。該發(fā)病雞場實(shí)行溫室養(yǎng)雞，在冬末也出現(xiàn)了較大的流行，主要由于冬季潮濕多雨，育雛期內(nèi)的發(fā)病率明顯增高，因而雛雞、產(chǎn)蛋雞感染嚴(yán)重，死亡率高達(dá)30%。雞痘病毒對外界的抵抗力較強(qiáng)，在干燥的痂皮中可存活數(shù)年，主要通過皮膚或黏膜的傷口感染，也可通過昆蟲叮咬傳播感染，病雞脫落的碎散痘痂也可傳播此病，因此可感染大批幼雞并引起較高的死亡率。病雞皮膚出現(xiàn)皮下大面積充血、出血，炎癥細(xì)胞浸潤，皮膚大面積損傷、壞死，體表潰爛，從而繼發(fā)感染其他疾病，這也是引起高死亡率的原因之一。

3.3 雞痘的防治

3.3.1 治療 對雞痘的治療，通常采取對癥療法，以減輕病禽的癥狀和防止繼發(fā)細(xì)菌性疾病。皮膚上的痘痂可用消毒劑如1%高錳酸鉀溶液沖洗后，用鑷子小心剝離痘痂，然后在皮膚傷口處涂上碘酊、龍膽紫或石炭酸凡士林。口腔、咽喉黏膜上的病灶，可用鑷子將假膜輕輕剝離，用高錳酸鉀溶液沖洗，再用碘甘油涂擦口腔。對于癥狀嚴(yán)重的病禽，為防止并發(fā)感染，可在飼料或飲水中添加抗生素。有報道顯示，可用中藥防治雞痘，配方如下：蒲公英30g，金銀花20 g，連翹15 g，薄荷少許為引，煎湯400mL，口服或洗滌（20mL/只），每天2次，連用3d。

3.3.2 預(yù)防 對本病的預(yù)防應(yīng)著重做好平時的衛(wèi)生防疫工作，搞好禽場及周圍環(huán)境的清潔衛(wèi)生，定期消毒，減少或盡量避免蚊蟲叮咬幼禽。不同年齡、不同品種的家禽應(yīng)分群飼養(yǎng)，欄舍的布局應(yīng)合理，并通風(fēng)良好，飼養(yǎng)密度不宜過大，飼喂全價飼料，避免各種原因引起啄癖或機(jī)械性外傷。防治本病最有效的方法是接種禽痘疫苗。疫苗的接種方法可采用翼膜刺種法和毛囊涂搽法兩種。翼膜刺種法是用消毒的鋼筆尖或注射針頭蘸取疫苗，刺種在翅膀內(nèi)側(cè)無血管處皮下；毛囊涂搽法是在雛雞的腿部外側(cè)拔去幾根羽毛，用消毒的毛筆或小毛刷蘸取經(jīng)1∶10稀釋的疫苗涂搽在毛囊內(nèi)。

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