羅 鐳，唐登峰，祝 明

（浙江省食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 杭州310004）

冠心丹參膠囊是中醫(yī)臨床上常用于活血化瘀、理氣止痛的方藥，由丹參、三七和降香油三味藥材組成，收載于中國(guó)藥典2010年版一部，用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶刺痛、心悸氣短；冠心病心絞痛見上述證候者［1］。2010版藥典制定了丹參中丹參酮IIA 的含量測(cè)定控制指標(biāo)，而對(duì)方中三七藥材無(wú)含量測(cè)定控制指標(biāo)。三七丹參均為該方的主要藥味，并且近年來(lái)隨著三七價(jià)格的不斷上漲，冠心丹參膠囊生產(chǎn)過(guò)程中在三七投料方面存在減少投藥量和三七藥材以次充好的現(xiàn)象，故有必要對(duì)冠心丹參膠囊中三七的3個(gè)總皂苷的含量制定含量測(cè)定控制指標(biāo)［2－3］。本文建立了RP－HPLC法同時(shí)測(cè)定冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 系 列 高 效 液 相 色 譜 儀（G1322A 脫 氣 機(jī)，G1311A 四元泵，G1313A 自動(dòng)進(jìn)樣儀，G1316A 柱溫箱，Chemstation色譜工作站）。

1.2 試藥

三七皂苷R1對(duì)照品（批號(hào)：110745－200517）、人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)：110703－200424）和人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)：110704－200420），對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，為含量測(cè)定用。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。冠心丹參膠囊樣品3 批，批號(hào)：090603、090607、090609，由國(guó)藥控股深圳中藥有限公司提供，批號(hào)090603的樣品作為方法學(xué)考察的樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 試液制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液

分別取三七皂苷R1對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品和人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 分別含三七皂苷R1 0.0655mg、人參皂苷Rg1 0.198mg和人參皂苷Rb1 0.1802mg的混合對(duì)照品溶液，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液

取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，稱定重量，放置過(guò)夜，置水浴中加熱回流2h，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱Kromasil－C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈（A）－水（B），梯度洗脫（0～12min 19% A；12～35min 19%A→25%A；35～60min 25%A→40%A）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：23℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；進(jìn)樣量：10μL。在此色譜條件下，樣品中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R1與其他雜質(zhì)峰可達(dá)到較好分離，缺味無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

圖1 缺味、對(duì)照品及樣品的色譜

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液（三七皂苷R1 0.065 5mg／mL，人 參 皂 苷 Rg1 0.1980mg／mL、人 參 皂 苷 Rb1 0.180 2mg／mL的混合溶液）1、3、5、10μL；（三七皂苷R1 0.109 2mg／mL，人參皂苷Rg1 0.330 0mg／mL、人參皂苷Rb1 0.300 3mg／mL的混合溶液）10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的峰面積，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，線性方程分別為：三七皂苷R1：Y＝278.81X＋2.656 7，r＝0.999 8；人 參 皂 苷Rg1：Y ＝281.83X ＋8.666 1，r＝0.999 8；人 參 皂 苷Rb1：Y ＝218.09X＋4.641 3，r＝0.999 9。結(jié)果表明：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1 進(jìn) 樣量分別在0.065 5～1.092μg／mL、0.198 0～3.299 7μg／mL、0.180 2～3.003 2μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液（三七皂苷R1 0.0655mg／mL，人參皂苷Rg1 0.1980mg／mL、人參皂苷Rb1 0.1802mg／mL 的混合溶液），按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1峰面積的RSD分別為1.1%，0.9%，1.1%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批供試品（批號(hào)：090603）制備6份供試品溶液，按“2.1～2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量的平均值（n＝6）分別為3.44，19.87，17.39mg／g，RSD分別為0.1%，0.2%，0.2%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，室溫下放置，分別于0，1.5，4，7，13，23h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1色譜峰面積的RSD 分別為0.5%、0.8% 、0.2%，表明供試品溶液在23h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：090603，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量分別為3.44、19.87、17.39mg·g－1）6份，每份取約0.12g精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入0.4094mg·mL－1三七皂苷R1 1mL，1.2828mg·mL－1三七皂苷Rg1 3mL ，1.1262mg·mL－1三七皂苷Rb1 2mL，按“2.1～2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算回收率。三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1 的平均回收率（n＝6）分別為98.8%、100.3%、100.4%；RSD 分 別 為0.9% 、3.1% 、0.5%。

2.4 樣品測(cè)定

取各批次冠心丹參膠囊樣品0.5g，精密測(cè)定，按“2.1～2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表1。

表1 冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量測(cè)定結(jié)果 （mg／粒）

3 討論

3.1 提取條件的選擇

分別考察了加熱回流、超聲提取法對(duì)3種成分的提取效率，結(jié)果表明回流提取法提取效率更高；提取溶劑考察了甲醇、70%甲醇、乙醇、70%乙醇，結(jié)果表明70%甲醇對(duì)3種成分提取效率較高；同時(shí)對(duì)70%甲醇用量25、50、100倍量進(jìn)行考察，結(jié)果表明50倍量即可提取完全；對(duì)回流提取1h、2h、3h進(jìn)行考察，結(jié)果表明回流提取2h即可提取完全。

3.2 柱溫的考察

三七中人參皂苷Rg1與其附近的人參皂苷Re色譜峰分離比較困難，通過(guò)降低柱溫，可使分離度達(dá)到1.5以上，故在分離人參皂苷Rg1和人參皂苷Re時(shí)，可適當(dāng)降低柱溫，選擇23℃為宜。

4 結(jié)論

本法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果正確，重復(fù)性好，可用于冠心丹參膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量測(cè)定。

［1］ 中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.2010：433.

［2］ WAN XIAOQING，XIA BOHOU.Determination of saponnins in different processed products of Panax Notoginseng［J］.CJTCMP，2011，26（4）：841－843.

［3］ QIU MINGMING.HPLC－ELSD determination of notoginsenoside Rl，ginsenoside Rgl and ginsenoside Rb1in Sanqi Xueshangning Capsules［J］.Chin J Pharm Anal，2010，30（4）：629－631.