黃雪梅，牛國才 ，2，黃世能 ，張昭其

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，廣東 廣州 510642；2. 煙臺南山學(xué)院，山東 煙臺 265713；3. 中國林業(yè)科學(xué)研究院 熱帶林業(yè)研究所，廣東 廣州 510520)

森林蔬菜黃藤鮮筍及植株不同器官的抗氧化活性

黃雪梅1，牛國才1，2，黃世能3，張昭其1

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，廣東 廣州 510642；2. 煙臺南山學(xué)院，山東 煙臺 265713；3. 中國林業(yè)科學(xué)研究院 熱帶林業(yè)研究所，廣東 廣州 510520)

黃藤筍是棕櫚藤植物黃藤的藤莖嫩梢，是一種具有高強抗氧化活性(自由基清除能力)的優(yōu)質(zhì)森林蔬菜。本實驗采用不同溶劑(蒸餾水，25%、50%、75%和100%乙醇)提取黃藤筍和其植株不同器官(葉鞘、鮮葉、干葉、鮮葉柄、干葉柄)的抗氧化物，并采用二苯代苦味酰肼基自由基(DPPH)法、鐵還原/抗氧化能力(FRAP)法、福林-酚比色法、蘆丁比色法進一步測定了各個提取物的自由基清除能力、總還原能力、總多酚含量和總黃銅含量。結(jié)果表明，黃藤筍與其植株其它部位均具有高強的抗氧化活性，即DPPH自由基清除能力、總還原能力、總多酚含量和總黃酮含量均處于高水平，其中以熟筍為最高，其次是生筍和鮮葉，干葉最低，其余部分差別不大。5種溶劑均可獲得滿意的提取效果，但以50%～75%的乙醇提取更為有效。研究結(jié)果表明黃藤全株具有潛在的抗氧化劑開發(fā)的前景。

森林蔬菜；林下種植；黃藤鮮筍；抗氧化活性；植物器官；提取溶劑

黃藤Daemonorops margaritae屬于棕櫚科Palmae黃藤屬Daemonorops，我國僅有黃藤一種，天然分布在海南、廣東及廣西南部地區(qū)，云南西雙版納地區(qū)也有栽培，是熱帶、南亞熱帶森林中的主要伴生藤本植物[1]。黃藤生長快，萌蘗力強，藤莖鞣韌，抗拉力強，工藝性能好，是家具制造和工藝品編織的優(yōu)良材料[2]，具有很高的經(jīng)濟價值。黃藤筍是指黃藤的藤莖細嫩分生組織，是我國民間早已食用的一種森林蔬菜。最近研究表明，黃藤筍不僅含有高蛋白、低脂肪、富含纖維素和人體必需的八種氨基酸，以及多種礦質(zhì)營養(yǎng)元素和維生素C等[3]，而且具有高強的抗氧化能力，從黃藤筍得到的提取物對自由基的清除能力大于被喻為最富保健價值的蘆筍Asparagus officinalis。

自由基是指可獨立存在的，具有不成對電子的分子、原子、離子和基團，可在生物體內(nèi)或外產(chǎn)生，如果自由基在體內(nèi)的積累過多，同時機體對自由基的防御能力不足，則易引起動植物的許多病理性變化。已知數(shù)以百計的疾病如肺炎、心血管疾病、肝炎、腸炎、腦部退行性疾病、白內(nèi)障、皮炎、肌肉硬化、衰老、癌變等與自由基有著密切關(guān)系，自由基清除劑或抗氧化能力對于預(yù)防疾病發(fā)生具有很重要的生理功能[4-6]。許多酚類化合物如酚酸、黃酮、花青苷和單寧等具有顯著的抗氧化和抗癌特性，在一些植物中含量極其豐富[7-12]。一些研究表明，天然抗氧化物的日攝入量與心臟病和癌癥的減少以及預(yù)期壽命成正相關(guān)[13-14]。

本文在前期研究發(fā)現(xiàn)黃藤筍具有高強抗氧化能力的基礎(chǔ)上，進一步采用不同溶劑提取黃藤筍及其植株不同器官的抗氧化物，并測定了各提取物的自由基清除能力、總還原能力、總多酚含量和總黃酮含量，為黃藤植物的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 提取液制備

取黃藤生筍（去葉鞘后鮮嫩可食用部分）、熟筍（生筍在沸水中煮3 min后取出后晾干表面的水）、葉鞘、鮮葉、干葉、鮮葉柄、干葉柄樣品若干，液氮粉碎，稱取5.00 g，加入20 mL不同提取溶劑（分別為蒸餾水，25%、50%、75%和100%乙醇）用攪樣機攪碎，再加20 mL相應(yīng)的提取溶劑，超聲萃取30 min，各重復(fù)3次。樣品放置過夜后離心15 min（4℃ 8 000 r/min），抽濾，濾渣加入10 mL提取溶劑后再次過濾，合并2次濾液（2次共加入50 mL溶劑，即料液比為1∶10）。置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

同時，測定不同樣品的含水率，以期對不同樣品實驗結(jié)果的評價具有相同的基礎(chǔ)，結(jié)果如表1。

表1 黃藤鮮筍及植株其他器官樣品的含水率Table 1 Water contents (WC, %) of shoot and other organsof D. margaritae

1.2 DPPH自由基半清除率劑量EC50的測定

參照文獻[15]的方法并修改。取待測提取液0.5 mL，加2.5 mL 6.5 ×10-5mol/L 二苯代苦味酰肼基自由基(DPPH)無水乙醇溶液，于30 ℃水浴25 min后置于光徑1 cm比色皿中，測定其在517 nm處的光密度值(OD值，記為A)，計算提取物對DPPH的清除率（radical scavenging rate，RS）。RS=100%×[A0-(Ai-Aj)]/A0，式中A0為2.5 mL 6.5×10-5mol/L DPPH溶液+0.5 mL樣品提取溶劑的吸光度，為空白對照；Ai為2.5 mL 6.5×10-5mol/L DPPH溶液+0.5 mL樣品浸提液（樣品提取溶劑與DPPH溶液的溶劑相同）的吸光度；Aj為2.5 mL 6.5×10-5mol/L DPPH溶液溶劑+0.5 mL樣品浸提液的吸光度。

EC50即是清除反應(yīng)體系50%DPPH自由基的所需的提取物濃度(系統(tǒng)中每毫升溶液所含植物樣品的濃度)。由于當RS值大于50%時，清除率與提取物濃度不成線性關(guān)系，本實驗測定EC50以更準確地評估抗氧化劑對DPPH 的清除能力。樣品提取液的EC50越小說明其抗氧化能力越強，反之越弱。

將提取液稀釋5個合適的濃度，測定DPPH自由基清除率RS。以提取物的不同濃度為橫坐標，以RS（或OD值）為縱坐標作圖，根據(jù)清除率線性回歸曲線計算EC50，單位換算為DPPH反應(yīng)系統(tǒng)中樣品的濃度即單位體積溶液含樣品鮮重（mg/mL）。每樣品重復(fù)測定3次。

1.3 總還原能力的測定(FRAP 法)

[16]的方法并修改。將不同樣品的提取液稀釋50～80倍，取稀釋液0.2 mL加1.8 mL Fe3+－三吡啶三吖嗪(Tripyridyl-triazine，TPTZ)工作液(pH 3.6，0.3 mol/L的醋酸鹽緩沖 液，10 mmol/L TPTZ，20 mmol/L FeCl3按10∶1∶1的體積比例混合)，37 ℃反應(yīng)10 min，以0.2 mL純水加1.8 mL TPTZ工作液為空白對照，于593 nm測定其吸光度。吸光度代入FeSO4標準曲線，求生成FeSO4的量(μmol/g)。每樣品重復(fù)測定3次。

1.4 總多酚含量的測定

參考文獻[17]的方法并修改。取不同樣品的提取液的稀釋液0.3 mL加到5 mL試管中，依次加入1.5 mL 0.2 mol/L福林-酚試液、1.2 mL 7.5%Na2CO3溶液。45 ℃水浴反應(yīng)15 min，在760 nm下測定其吸光度。吸光度代入沒食子酸標準曲線，求得試樣中總多酚含量。結(jié)果表示為每100 g 鮮樣中含有相當于沒食子酸的量(mg/100g)。每樣品重復(fù)測定3次。

1.5 總黃酮含量的測定

參考文獻[18]的方法并修改。取不同樣品的提取液的稀釋液一定量入10 mL容量瓶中，加入30%乙醇溶液至5 mL，各加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，振搖后放置5 min，加入0.3 mL 10%硝酸鋁溶液搖勻后放置6 min，加2 mL 1.0 mol/L氫氧化鈉溶液，用30%乙醇定容至刻度。10 min后在510 nm處測定吸光值，以試劑為空白對照。根據(jù)蘆丁標準曲線求得試樣中總黃酮含量，結(jié)果表示為μg/100 g。每樣品重復(fù)測定3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃藤鮮筍與植株其它器官DPPH 自由基半清除率EC50的比較

表2為分別采用蒸餾水及不同濃度的乙醇溶液提取黃藤植物不同部位樣品的測定結(jié)果。在水提取液中，熟筍的DPPH自由基半清除率EC50最?。?1 mg/mL）即抗氧化能力最大，其次分別為生筍、鮮葉和鮮葉柄（67～150 mg/mL），葉鞘和干葉柄抗氧化能力較差，干葉的抗氧化能力最?。? 338 mg/mL）。在乙醇提取液中，抗氧化能力位于前四位的仍然分別是熟筍、生筍、鮮葉和鮮葉柄，干葉、葉鞘和干葉柄的抗氧化能力普遍較差。從平均水平上看，在乙醇提取液中，后三者的EC50是前四者的8.2倍，而在純水提取下更高達9.7倍。這從另一個側(cè)面也說明，醇提的效果要好于水提。從節(jié)約成本的角度考慮，乙醇溶劑的濃度不宜超過50%。

表2 黃藤鮮筍及植株其它器官在5種不同提取液中的EC50Table 2 EC50 of fresh shoots and other organs of D.margaritae extracted with five different solvents (mg /mL; solvents/DW)

2.2 黃藤鮮筍與其植株其它器官總還原能力的比較

從表3看出，熟筍、生筍和鮮葉的總還原能力較強，最高可達1 765 μmol/g，干葉最?。?6 μmol/g），其它中等。這一結(jié)果與EC50的測定結(jié)果一致，即抗氧化能力越強，總還原能力也越強。乙醇提取所得到的不同器官的總還原力變化趨勢相同，且均高于水提取的測定結(jié)果，這進一步說明了醇提的效果要好于水提。

表3 黃藤鮮筍及植株其它器官在5種不同提取液中總還原能力的比較Table 3 Comparison of total reducing abilities of fresh shoots and other organs of D. margaritae extracted with five different solvents (μmol /g ; FeSO4 /DW)

2.3 黃藤鮮筍與其植株其它器官總多酚和總黃酮含量的比較

測定結(jié)果如表4和表5?？傮w而言，黃藤各器官提取物的總多酚和總黃酮含量均處于較高水平，其中熟筍的總多酚和總黃酮含量最高，分別為9 070～11 928 mg/100 g和11 048～14 889 mg/100 g，其次是生筍和鮮葉，葉鞘、干葉、鮮葉柄和干葉柄的均較低。

表4 黃藤鮮筍及其植株其它器官總多酚含量Table 4 Total phenolic contents of fresh shoots and other plant organs of D. margaritae extracted with five different solvents (mg /100g ;solvents / DW)

從提取溶劑上看，黃藤植株各器官的總多酚和總黃酮含量有隨乙醇濃度的增加而增加的趨勢，但在100%乙醇溶液下略有下降，與DPPH自由基半清除率和總還原能力的測定結(jié)果基本一致，說明但過高的乙醇濃度在一定程度上抑制了提取物的抗氧化活性。

表5 黃藤鮮筍及其植株其它器官總黃酮含量Table 5 Total flavone contents of fresh shoots and other plant organs of D. margaritae extracted with five different solvents (mg /100g; solvents/ DW)

3 討 論

(1)黃藤全株各器官均具有高強或較強的抗氧化能力，表現(xiàn)在具有很低或較低的DPPH自由基半清除率EC50，很高或較高的總還原能力、總多酚含量和總黃酮含量，其中熟筍的抗氧化活性最強，其次是生筍和鮮葉，其余部位抗氧化性也較強。蒸餾水和不同濃度的乙醇提取都獲得較滿意的效果，但以50%～75%的乙醇提取效果最佳。

(2)與通常的筍類蔬菜有所不同，黃藤筍是藤莖頂部的細嫩分生組織，由幾層木質(zhì)堅硬帶剌的葉鞘包裹著的一段白色的嫩莖和未展開的嫩葉組成，可食部分重量僅為去葉藤莖重量的8%左右[19]。作為筍用林經(jīng)營的黃藤，莖長50～60 cm（地面至最頂端葉柄基部的高度）即可采收，不受季節(jié)影響，但需剪去葉片和剝?nèi)プ钔鈱拥娜~鞘、削掉外層葉鞘上的刺才得到初產(chǎn)品（即去葉藤莖），取可食部分時還要小心剝?nèi)コ醍a(chǎn)品外部的帶剌葉鞘，所以黃藤筍的經(jīng)濟產(chǎn)量低而且采伐難度大。本研究證實黃藤植株各器官抗氧化活性成分均可獲得高強的抗氧化活性，具有作為抗氧化劑開發(fā)的全植株利用潛力。

(3)前期測定黃藤生筍抗氧化活性時發(fā)現(xiàn)，黃藤筍具有高強的抗氧化能力，其提取物稀釋3 200倍后DPPH自由基的清除率才趨于零，抗氧化能力遠遠大于被喻為最富保健價值的蘆筍（待發(fā)表）。本研究結(jié)果進一步表明，黃藤全植株均具有高強或較強的抗氧化能力，其中熟筍的抗氧化活性最強。之所以測定熟筍樣品是因為生筍在制樣和提取過程中容易產(chǎn)生褐變，對測定結(jié)果產(chǎn)生一定的干擾，而熟筍樣品則穩(wěn)定不易變色。測定結(jié)果顯示熟筍的總黃酮和總多酚含量最高，可能還預(yù)示著煮熟的鮮筍更有利于固定此類抗氧化活性物質(zhì)。

(4)黃酮類物質(zhì)是一類多酚類物質(zhì)，對許多植物的研究表明，總多酚和總黃酮含量與抗氧化性成正相關(guān)系[20]，并且許多多酚化全物已經(jīng)顯示出多種對健康有利的生物活性特征，如抗氧化，抗癌變，抗病毒，抗炎以及抑制血小板凝固等[20-21]?？梢?，黃藤全株特別是藤筍和鮮葉，含有對人體健康有益的大量多酚類物質(zhì)，尤其是鮮葉，生物產(chǎn)量高，采伐相對容易，可作為開發(fā)抗氧化劑首選原料。

(5)棕櫚科黃藤屬植物是血褐的主要來源之一，黃藤的果實粉末被證明有個別成分與血褐相同，然而迄今為止，科研人員還不清楚血竭的活性成分，不能確定哪種成分具有真正的藥用功效[22]。黃藤筍等器官的高強抗氧化性是否與血褐的某些成分有關(guān)，有待進一步研究。

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Antioxidant activities of fresh shoots and other organs of Daemonorops margaritae Beccari

HUANG Xue-mei1, NIU Guo-cai1,2, HUANG Shi-neng3, ZHANG Zhao-qi1

(1. College of Horticulture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, Guangdong, China; 2. Nanshan College of Yantai, Yantai 265713, Shandong, China; 3. Research Institute of Tropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Guangzhou 510520,Guangdong, China)

∶ The shoots of Daemonorops margaritae Beccari refer to the edible part (palm heart) of this rattan plant species. As proved in early studies, it is a good quality forest vegetable with a very strong antioxidant capacity or free radical scavenging capacity (RSC). The polyphenoils of fresh shoots and other organs (such as leaf sheath, fresh leaf, dried lead, fresh petiole and dried petiole) of D. margaritae were extracted with five different solvents (distilled water and 25%, 50%, 75% and 100% ethanol). And the free radical scavenging ability, total reducing capacity, total polyphenols content and total flavonoid content of extracts of fresh shoots and other organs were analyzed by using 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) essay, Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP), Forint-phenol colorimetry and Rutin spectrophotometer’s method, respectively. The results show that all parts of the plant exhibited strong antioxidant activities with high free radical scavenging capacity, total reducing ability, and total phenolic and flavone contents. In general, among the four tested indexes, the boiled fresh shoot recorded the highest values, followed by the fresh shoot and fresh leaf, while the dried leaf showed the lowest; Five different solvents produced satisfactory extraction results, while 50% and 75% ethanol were more effective. The results indicate that the shoots and other organs of D. margaritae plant can be a promising and valuable material for the exploitation of antioxidants.

∶ forest vegetables; forest planting; Daemonorops margaritae Beccari fresh shoots; antioxidant activity; plant organ;extraction solvent

S727.39；S718.43

A

1673-923X(2013)11-0014-05

2013-05-16

國家“十一五”科技支撐計劃項目(2006BAD19B0903)

黃雪梅（1969-），女，廣東遂溪人，副研究員，博士，主要從事果蔬采后生理與病理研究

黃世能（1964-），男，廣西德保人，研究員，博士，主要從事經(jīng)濟林培育與開發(fā)利用研究；E-mail：hsn@ritf.ac.cn

[本文編校：吳 毅]