任紅心 韓雷 趙寧民 秦玉花 呂品 柴東燕 馮靜

[摘要] 目的 調(diào)查分析地高辛血藥濃度測定的方法，為開展血藥濃度監(jiān)測提供依據(jù)。 方法 通過Cnki、PubMed數(shù)據(jù)庫中檢索近年來地高辛相關文獻并整理分析。 結果 地高辛的血藥濃度監(jiān)測方法很多，主要有放射免疫測定法，酶免疫測定法，熒光免疫測定法，化學發(fā)光免疫測定法，干化學測定法等。 結論 新監(jiān)測方法的應用使地高辛的檢測技術日益成熟、規(guī)范。

[關鍵詞] 地高辛；血藥濃度監(jiān)測；合理用藥

[中圖分類號] R917???[文獻標識碼] A???[文章編號] 2095-0616（2012）21-48-03

New progress of blood drug concentration monitoring method for digoxin

REN?Hongxin1??HAN?Lei2??ZHAO?Ningmin2??QIN?Yuhua2??LV?Pin2??CHAI?Dongyan2??FENG?Jing2

1.The Drug Control Institute of Zhoukou City， Zhoukou 466000，China；2.Henan Provincial People's Hospital，Zhengzhou 450002，China

[Abstract] Objective To investigate and analysis the methods of digoxin plasma concentration determination for the development of blood concentration monitoring. Methods Retrievaled the related articles of digoxin by Cnki， PubMed，Web of Science database to retrieve and analyze. Results Digoxin blood concentration monitoring in many ways， mainly determined by radioimmunoassay， enzyme immunoassay， fluorescence immunoassay， chemiluminescence immunoassay， dry chemical assay， et al. Conclusion The application of new monitoring methods digoxin detection techniques become more sophisticated and norms.

[Key words] Digoxin；TDM；Rational drug

地高辛（digoxin）是臨床治療充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）的常用藥物，療效較佳。但因其毒副作用大，安全范圍窄，藥動學、藥效學個體差異大，且有治療劑量與中毒劑量在一定程度上相互重疊的藥動學特性，易發(fā)生中毒反應。因此，地高辛是臨床上需要做血藥濃度監(jiān)測的主要藥物之一。在臨床治療過程中及時監(jiān)測地高辛的血藥濃度是調(diào)整給藥方案，維持有效血藥濃度，預防藥物中毒的主要方法。對地高辛血藥濃度監(jiān)測方法進行研究有很強的現(xiàn)實意義。

1?免疫測定法（IA）

1.1?放射免疫測定法（RIA）

RIA法測定體內(nèi)地高辛血藥濃度基本原理：將標記了抗原的放射性核素與受檢標本中的抗原同時競爭抗體，檢測標記到的抗原抗體復合物的放射性強度，推斷并確定地高辛的濃度。其檢測限可達0.01 μg/L，平均回收率為101.3%，日內(nèi)RSD=3.0%，日間RSD=6.5%[1]。RIA法優(yōu)點：檢測方法相對簡單，結果準確可靠，敏感性強、精密度好，準確度佳、具有特異性，檢測成本較低等。RIA的缺點：檢測時間較長，標記物的半衰期過短，易受代謝產(chǎn)物的干擾，存在不同程度的放射性污染，試劑盒有效期短且批間RSD偏大等[2]。

1.2?酶免疫測定法（EIA）

EIA法是一種非放射性免疫分析技術，其在放射免疫分析理論的基礎上，用酶標記抗原或抗體作為示蹤物，酶標記物穩(wěn)定，靈敏度與RIA法接近，靈敏度高，操作簡便快捷，EIA法在一定程度上克服了RIA放射性危害和標記物半衰期短的缺點[3]，具有較強的特異性，有效期長等特點。

1.2.1?酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）?ELISA法靈敏度可高達0.04 ng/mL，是一種非均相免疫分析法的檢測技術，有很高的檢測的準確性和可靠性，實驗條件的環(huán)境要求較高，樣品不需做預處理且需求量較少，僅需5.0 μL，有效避免地高辛樣活性物質(zhì)的干擾。缺點主要是人為因素干擾檢測結果，酶穩(wěn)定性在孵育時間較長的情況下降低，長時間容易受到溫度和pH的影響，影響檢測結果精確性[4]。

1.2.2?克隆酶免疫測定法（CEDIA）?克隆酶免疫測定法原理：β-半乳糖苷酶通過DNA技術被裂解成2個無活性片段，酶受體和酶供體；兩個活性片段重組后形成具有催化活性的酶。β-半乳糖苷酶的水解底物氯酚紅-β-D-吡喃半乳糖苷顯紫紅色，而地高辛的血藥濃度與該酶生成量成正比?？寺∶该庖邷y定法與放射免疫測定法具有良好的相關性，具有較好的可靠性[5]；批內(nèi)和批間變異系數(shù)均低于5%，具有較好的精密度[6]；檢測速度快，且易于自動化操作、無放射性污染。

1.3?熒光免疫測定法（FIA）

熒光免疫分析技術是發(fā)展比較早的一種標記免疫技術，以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位，主要應用于微量、超微量位置分析測定。

1.3.1?熒光偏振免疫測定法（FPIA）?熒光免疫測定法是一種以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位的技術，常用于微量和超微量物質(zhì)的分析測定，作用原理：以蛋白競爭結合原理為基礎，利用被測物質(zhì)中被測對象所具有的偏振光特性進行測量，其不需分離游離及結合的熒光標記物，測定周期短，無放射性污染。本法樣品預處理操作簡單，測定過程耗時較少，靈敏（最小檢出量為0.01 ng/mL），誤差范圍約2.57%～4.00%[7]，雅培TDX儀的最低檢測限約為0.26 ng/mL[8]，但FPIA測定結果易受本底熒光的干擾，所用儀器較復雜，地高辛濃度增加的假象時有發(fā)生[9]。

1.3.2?時間分辨熒光免疫測定法（TRFIA）?TRFIA是一種操作簡便，不受樣品自然熒光干擾的新型非放射性免疫標記技術，采用的示蹤物取代傳統(tǒng)的熒光標記發(fā)光物質(zhì)，運用新的熒光特性的鑭系元素及其螯合物，測定反應產(chǎn)物在反應體系發(fā)生后的熒光強度，用體系中分析物的濃度根據(jù)產(chǎn)物熒光強度和相對熒光強度的比值來判斷，從而達到定量分析[10]。同RIA法相比，本法靈敏度大大的提高；交叉反應率低于FPIA法[11]，無放射性污染，示蹤穩(wěn)定可多標記，標準范圍寬等優(yōu)點。

1.4?化學發(fā)光免疫測定法（CLIA）

CLIA法檢測原理：當被化學發(fā)光劑、催化發(fā)光酶或產(chǎn)物等標記的抗體或抗原與相應的抗原或抗體結合后，發(fā)光底物受上述標記物的影響與產(chǎn)物發(fā)生氧化還原反應，激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)射可見光，用分光光度計測量反應發(fā)射的可見光。最低檢測限可達0.1 ng/mL，線性范圍為0～4.0 ng/mL，日內(nèi)RSD<4%，日間RSD<6.5%[12]。如有臨床癥狀難以鑒別或懷疑藥物過量中毒，可快速檢測。儀器設備及配套試劑目前較常用的是美國ACS：180 PLUS化學發(fā)光儀。本儀器靈敏度較高，但機器較貴、檢測費用較高，在臨床有一定的限制[13]。

1.5?干化學測定法（Dry chemical assay）

Dry chemical assay以異種酶排斥免疫為原理，結合了干化學分析技術和自動生化分析儀測定地高辛血藥濃度[14]。操作程序很大程度的簡化使得操作更簡便，大大縮短了檢測時間，地高辛濃度在0.5～4.0 μg/mL的有良好的線性關系（R =0.998 9），平均回收率為99.0%，日內(nèi)平均RSD=4.5%，日平均相對標準偏差=4.8%。本法測試成本小，操作簡便[15]。然而，有研究表明，本法平均測量值高于FPIA法[16]。

1.6?乳膠免疫抑制法（Emul Immuunodepression）

本法標本用量小，對環(huán)境無污染，檢測速度快，但檢測結果穩(wěn)定性上尚存在一些問題，目前應用較少[17]。

2?液相-質(zhì)譜聯(lián)用分析法（HPLC-MS-MS）

檢測質(zhì)量與放射免疫測定法相比，特異性較強，能夠克服RIA法測定地高辛濃度時因EDLS產(chǎn)生的干擾，但本法所需儀器價格昂貴、操作繁瑣、靈敏度較差、檢測耗時較長，大大阻礙了其臨床推廣[18]。

3?毛細管電泳分離法（CE）

毛細管電泳兼有電泳和色譜技術的雙重優(yōu)點，對發(fā)生溶血、高脂血癥、黃疸的血漿樣本的分析有一定優(yōu)勢[19]，但很少用于地高辛檢測。

4?人工神經(jīng)網(wǎng)絡法（ANN）

人工神經(jīng)網(wǎng)絡法（ANN）是基于模仿生物大腦的結構和功能，從而構成的一種電腦信息處理系統(tǒng)。利用收集的臨床資料，如地高辛使用者的年齡、性別、體重、血藥濃度、劑量等作為神經(jīng)元。神經(jīng)元之間既有聯(lián)系又相互獨立，既有局部的存儲和計算能力，又通過連接構成統(tǒng)一的系統(tǒng)。ANN以具有局部計算能力的神經(jīng)元為基礎，實現(xiàn)信息的大規(guī)模并行處理，以預測地高辛的血藥濃度[20]。使用MATLAB軟件中的BP神經(jīng)網(wǎng)絡工具箱編程，對數(shù)據(jù)進行篩選和智能分析，建立相應的數(shù)學模型，較好地處理各個因素的復雜關系，具有很好的非線性處理能力。本法在繁雜的群體藥效/藥動學方面發(fā)揮著普通計算機無法比擬的優(yōu)勢，為血藥濃度預測提供了一條有效的思路，在臨床藥學領域擁有誘人的應用前景。

5?分子印跡技術

應用分子印跡的技術制備對地高辛有特異吸附性能的印跡聚合物顆粒，再將顆粒與瓊脂糖混合，并固定與玻碳電極上，制備成地高辛分子印跡聚合膜傳感器。傳感器可以特異性的結合膜分子地高辛，且其電化學信號與模板濃度有關，再用它來檢測血漿中地高辛的含量。本法制作簡單，成本低，特異性高，檢測快速，穩(wěn)定性好最低檢測下限可達1.28 nmol/L，線性檢測范圍為1.28～128 nmol/L，檢測時間可短至5 min，可靠性佳[21]。

此外，逆轉錄PCR技術、抗地高辛抗體片段技術[22]等也日趨成熟，今后可能會用于地高辛血藥濃度的檢測。各種地高辛檢測方法均以其各自獨特的優(yōu)勢在臨床廣泛應用，地高辛的檢測技術將日益成熟、規(guī)范。

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（收稿日期：2012-06-20）