李迪，吳宏娟，許貴軍

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

在《藥性論》、《中藥大辭典》、《中華藥海》等書中均有肉豆蔻的記載，具有收澀、溫里、行氣等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，肉豆蔻具有抗菌、麻醉、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜催眠等作用。目前，肉豆蔻主要炮制方法有蒸制、炒制、土制、制霜等。本實(shí)驗(yàn)對不同炮制方法的肉豆蔻中的肉豆蔻醚的含量進(jìn)行了考察。

1 儀器與試藥

P230高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司);R400E－HPLC流動(dòng)相過濾裝置(上海領(lǐng)德儀器有限公司);HH－4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州普天儀器制造有限公司);SK3300HP功率可調(diào)臺(tái)式超聲儀(上海壘固儀器有限公司);R502B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(西安太康生物科技集團(tuán));Direct－Pure EDI 10 UV純水系統(tǒng)(上海瑞楓生物科技有限公司);UV－1600紫外/可見分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司);JA5003B電子精密天平儀(河南兄弟儀器設(shè)備有限公司);C18色譜柱(廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司);肉豆蔻醚(自制);乙腈(天津康科德有限公司);甲醇(天津賽孚世紀(jì)科技發(fā)展有限公司);磷酸(天津康科德有限公司);乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);冰醋酸(天津科密歐有限公司);三乙胺(天津博迪化工股份有限公司);肉豆蔻(產(chǎn)于廣東)。

2 測定方法

2.1 色譜條件

實(shí)驗(yàn)用甲醇－水－磷酸(70∶30∶0.01)為流動(dòng)相;檢測波長為282nm;流速為1.0ml/min;實(shí)驗(yàn)室溫度為25℃，柱溫箱溫度為30℃。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取肉豆蔻醚標(biāo)準(zhǔn)品5mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲溶解，冷卻至室溫，加甲醇定容，精密量取1ml，至于100ml容量瓶內(nèi)，用甲醇定容，即得。

2.3 提取方法

肉豆蔻粉碎，過20目，稱取3份，分別加入乙醇、50%甲醇、甲醇超聲提取，結(jié)果以甲醇提取含量最高，所以實(shí)驗(yàn)采用甲醇提取。精密稱取3份肉豆蔻粗粉，加甲醇超聲波振蕩，分別提取15、20、30min，結(jié)果以30min含量最高，所以采用提取時(shí)間為30min［1］。

2.4 供試品溶液的制備

精密稱取肉豆蔻粗粉約 1.0g，精密加入甲醇800mL，超聲處理 30min，過濾，加甲醇至 1 000ml，搖勻，即得。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取肉豆蔻醚標(biāo)準(zhǔn)品5mg，加甲醇適量，超聲溶解，放至室溫，加甲醇定容至100ml，精密量取1ml，至于100ml容量瓶內(nèi)，甲醇定容。按照上述實(shí)驗(yàn)條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，記錄峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.6 對照品的線性考察

分別配制 0.4、1.6、2.0、4.0、6.0μg/mL 肉豆蔻醚標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，肉豆蔻醚在0.4～6.0μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 回收率試驗(yàn)

分別配制6份肉豆蔻樣品溶液，進(jìn)行含量測定，再分別加入一定量的肉豆蔻醚對照品，按上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.05%，RSD為 0.67%。

2.8 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

按上述實(shí)驗(yàn)方法配制肉豆蔻樣品溶液及對照品溶液，每隔2h測定1次，共測定5次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，供試品和對照品10h內(nèi)穩(wěn)定。

3 炮制品的制備

3.1 面裹炒制

分別稱取肉豆蔻 1kg，滑石粉 0.5kg，面粉 0.5kg。將面粉中加入0.025kg水，和成濕面團(tuán)，制成濕面皮。將藥材用濕面皮逐個(gè)包裹，取滑石粉置鍋內(nèi)加熱，將包好的肉豆蔻倒入，拌炒至外面的面呈焦黃色取出，除去面皮，乘熱切片。

3.2 小麥面炒制

分別稱取肉豆蔻1kg，小麥面0.5kg。將小麥面粉倒入鍋內(nèi)，用文火炒熱，將肉豆蔻倒入，炒成微黃色時(shí)，出鍋，篩去面粉，攤開，晾涼。

3.3 赤石烘烤 分別稱取肉豆蔻1kg，赤石脂1kg。藥材直接埋于赤石脂細(xì)粉烘烤1h，去除赤石脂，將肉豆蔻切片。

3.4 蒸制

分別稱取肉豆蔻1kg，麩皮0.5kg。將肉豆蔻在水中浸泡1h，撈出，置籠內(nèi)，一層麩皮，一層肉豆蔻，層層相間，蒸制2h，去除麩皮，將肉豆蔻切厚片，干燥。

3.5 土制

分別稱取肉豆蔻1kg，細(xì)黃土1kg，將細(xì)黃土置鍋內(nèi)炒制發(fā)泡，倒入肉豆蔻，不斷翻炒，炒至油質(zhì)滲出，篩凈黃土，備用［2－6］。

4 結(jié)果

測定5種炮制品和生品的含量，按炮制前藥材量計(jì)算，蒸制品、面裹炒制品、小麥面炒制品、赤石烘烤品、土制品中肉豆蔻醚的含量分別為0.211%，0.210%，0.205%，0.203%，0.201%。未經(jīng)炮制的肉豆蔻藥材中肉豆蔻醚的含量為0.215%。

5 討論

實(shí)驗(yàn)對流動(dòng)相進(jìn)行了考察，分別采用了甲醇－水－ 磷酸(70∶30∶0.01)、甲醇 － 水 － 冰醋酸(70∶30∶0.01)、水 －乙腈 －三乙胺(40∶60∶0.01)，結(jié)果以甲醇－水 － 磷酸(70∶30∶0.01)為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好。肉豆蔻醚為肉豆蔻主要成分之一，其具有一定毒性，服用過量對胃腸道有抑制作用，甚至可致中毒，產(chǎn)生昏迷及驚厥。在中藥大辭典中記載過肉豆蔻中毒致死的報(bào)道［7］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各種炮制方法對肉豆蔻醚的含量影響不大。在炮制過程中肉豆蔻醚不易除去的主要原因是肉豆蔻醚沸點(diǎn)較高(276℃ ～277℃)［8－9］。所以應(yīng)增加對肉豆蔻炮制的研究，降低其毒副作用。

［1］李國毅，陳仰榮.《中國藥典》中藥炮制品檢驗(yàn)問題的探討［J］.中國中藥雜志，2000，25(6):379.

［2］龔千鋒.中藥炮制學(xué)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:215－225.

［3］馮秀錕.中藥炮制技術(shù)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007:89－95.

［4］周燕華，譚建寧.不同炮制條件對肉豆蔻揮發(fā)油、脂肪油及肉豆蔻醚含量的影響［J］.中國中藥雜志，1998，23(4):217.

［5］崔學(xué)義，季宇彬.肉豆蔻炮制工藝研究［J］.中國中藥雜志，1992，17(10):599.

［6］天津市藥品檢驗(yàn)所中藥組.關(guān)于肉豆蔻炮制方面有關(guān)問題的探討［J］.中草藥通訊，1979，10(1):16.

［7］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977:894.

［8］李鐵林，周杰，江文君，等.炮制對肉豆蔻揮發(fā)油成分及肉豆蔻醚含量影響的研究［J］.中國中藥雜志，1990，15(8):23.

［9］李鐵林，周杰，徐植靈，等.炮制對肉豆蔻揮發(fā)油含量的影響及肉豆蔻揮發(fā)油化學(xué)成分的研究［J］.中國中藥雜志，1990，15(7):21.