王 坤 侯玉澤 胡驍飛 王 耀 李文君 裴亞峰 鄧瑞廣

(河南科技大學食品與生物工程學院，洛陽471003)

近些年，生物標記技術不斷的發(fā)展，免疫分析技術得到了快速的發(fā)展。例如放射免疫分析技術，由于放射分析技術存在污染性和局限性，限制其進一步發(fā)展與應用，繼由放射免疫分析技術之后，又研究形成了各種非放射免疫技術，包括酶標記分析技術、熒光免疫分析技術、化學發(fā)光免疫分析技術、時間分辨熒光免疫分析(Time-resolved fluoreimmuoassay，TRFIA)技術等。但是，從靈敏度上來說只有TRFIA技術可與放射免疫分析媲美。TRFIA是20世紀80年代迅速發(fā)展起來的一種被公認為最有發(fā)展前途的一種非放射標記分析技術[1]。

1 TRFIA的技術原理和優(yōu)勢

1.1 TRFIA的技術原理 TRFIA是用具有特殊熒光的鑭系離子與螯合劑結合作為示蹤物標記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體等，在一定的反應體系(如:抗原抗體免疫反應、生物素親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等)發(fā)生反應后，用時間分辨熒光儀測定產(chǎn)物中的特異熒光強度，推測反應體系中分析物的濃度，從而達到對待測物質(zhì)進行定量分析的目的[2，3]。

1.2 TRFIA的優(yōu)勢 TRFIA技術具有酶標記分析技術和同位素標記技術的優(yōu)點:具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好，且測定范圍寬，試劑壽命長，操作簡便和非放射性等特點[4]。優(yōu)勢有以下幾點:

一般熒光物質(zhì)光譜的Stokes位移非常的小，只有幾十納米[5]，導致激發(fā)光譜和發(fā)射光譜通常有部分重疊，互相干擾嚴重。但是鑭系離子與螯合劑形成螯合物后，Stokes位移能夠達到200 nm以上，很容易分辨激發(fā)光和發(fā)射光，從而激發(fā)光干擾就可以排除了。

鑭系元素與通常的熒光物質(zhì)相比較，鑭系元素離子螯合物熒光的衰變時間要長的多，為傳統(tǒng)熒光的103～106倍。在用時間分辨熒光儀測量熒光時，可以適當?shù)难舆t一段時間，待其它物質(zhì)的熒光衰變后再測量，這時只測量Eu3+標記物的特異性熒光，即通過TRFIA技術，極大地降低了本底熒光，這是TRFIA高靈敏度和低干擾的原因之一[6]。

鑭系螯合物激發(fā)光光譜比較寬，通常在300～500 nm，可通過增加激發(fā)光能量來提高靈敏度。而它的發(fā)射光譜帶很窄，甚至不到10 nm，可采用只允許發(fā)射熒光通過的濾光片，進一步降低本底熒光，這樣可以大大的提高檢測的靈敏度。

鑭系離子與雙功能螯合劑螯合后，可形成穩(wěn)定的螯合物，穩(wěn)定性非常高，生產(chǎn)出的產(chǎn)品保質(zhì)期可以長達2年。而酶標記物常因其純度、顯色底物不穩(wěn)定等問題，使其應用受到限制。再者，Eu3+標記物體積很小(為原子標記)，標記后不會影響被標記物的空間立體結構，這既保證了被檢測物質(zhì)的穩(wěn)定性(尤其對蛋白質(zhì)影響更小)，又可實現(xiàn)多位點標記，這樣可以實現(xiàn)一個試劑盒能夠同時檢測出兩種或兩種以上的物質(zhì)，這樣不但簡便還大大降低了成本。

2 時間分辨熒光免疫分析技術(TRFIA)在真菌毒素檢測方面的應用

真菌毒素(M ycotoxins)是由產(chǎn)毒真菌(主要為曲霉屬、青霉屬及鐮孢屬)在適宜的環(huán)境條件下產(chǎn)生的具有很強毒性的二級代謝產(chǎn)物，它主要對食品、農(nóng)作物及飼料等污染很嚴重[7]。真菌毒素大約每年會污染將近25%的農(nóng)產(chǎn)品，造成了巨大的經(jīng)濟損失。當這些被污染的農(nóng)產(chǎn)品被人和動物攝入后會產(chǎn)生很多種疾病，嚴重威脅著人類與動物的生命與健康[8]。當前，最主要的真菌毒素主要有:黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏馬菌素、T-2毒素、展青霉素、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等。

在當今世界上，食品安全和糧食安全問題已經(jīng)成為我們?nèi)粘Ｉ铌P注的焦點問題之一。對真菌毒素限制正在逐步加強，限量標準也在不斷降低，所以更需要找到一種靈敏度高，特異性強，簡便快速容易普及應用的方法來檢測真菌毒素。目前，真菌毒素的測定方法有TLC法、HPLC法[9]等，這些方法都不同程度地存在著樣品前處理過程復雜、毒性大、所需時間長等缺點。由于其他熒光物質(zhì)、色素、結構類似物對檢測產(chǎn)生干擾，必須通過液-液萃取進行凈化處理，操作煩瑣，有機試劑用量大，提取效率低，環(huán)境污染嚴重。ELISA法靈敏、且快速、低成本，但ELISA是一種定性或半定量的方法，當選擇的不同單克隆抗體，會造成結果存在一定的誤差，所以這種定量，相對不太準確。TRFIA具有排除其他熒光干擾，靈敏度高，一次可以測多個樣品的優(yōu)勢，將成為檢測真菌毒素的主要方法。

2.1 黃曲霉毒素

2.1.1 黃曲霉毒素的性質(zhì)、危害及限量標準 黃曲霉毒素(Aflatoxin，AF)由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(International Agency for Research on Cancer，IARC)劃定為Ⅰ類致癌物，主要作用于肝臟[10]。由于黃曲霉毒素的危害性比較大和分布比較廣泛，聯(lián)合國的相關組織(像WHO、FAO、UNEP等)曾多次組織調(diào)研并提出了對應的控制措施和標準。在1995年世界衛(wèi)生組織規(guī)定了食品中AFB1的含量不能超過15 μg/kg，在嬰兒食品中不能檢出[11];美國聯(lián)邦政府也出臺了相關法律，規(guī)定了食品和飼料中總的黃曲霉毒素含量不得超過15 μg/kg;歐盟國家的規(guī)定更加的嚴格，規(guī)定了日常生活食用品中的AFB1的含量不得超過2 μg/kg，總量不超過4 μg/kg，最近已將部分食品中的AFB1的含量限定在0.1 μg/kg以內(nèi)。我國對AFB1的污染和控制也非常重視[12]，在1982年頒布了糧油和發(fā)酵食品中的AFB1允許量標準。規(guī)定大米、食用油中AFB1的含量不超過10 μg/kg，其他糧食、豆類及發(fā)酵食品的含量不能超過5 μg/kg。

2.1.2 AFB1-TRFIA檢測方法的建立 黃飚等[13]采用時間分辨熒光技術建立了高靈敏的黃曲霉毒素Bl(AFB1)間接競爭免疫分析法(AFB1-TRFIA)。該方法的靈敏度為0.01 μg/kg，測量范圍為0.01～100 μg/kg，批內(nèi)和批間的變異率為4.1%和6.8%，平均回收率為97.2%，遠遠高于ELISA試劑盒檢測。計融等[14]利用間接競爭ELISA方法，研制黃曲霉毒素ELISA檢測試劑盒。該試劑盒最低檢出濃度為 0.26 μg/kg，對樣品的最低檢出量為 1.5 μg/kg。采用AFB1-TRFIA技術檢測的靈敏度和測量寬度較ELISA結果都好，其靈敏度高，測量范圍很寬，這樣既可以符合食品中AFB1較低濃度的限量標準，也能夠符合飼料中AFB1較寬范圍的限量標準，是一種簡便、快速、經(jīng)濟的并可以進行大批量樣品檢測的方法。黃飚等[15]又采用時間分辨熒光免疫分析技術，建立黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的高靈敏的TRFIA的檢測方法，并且研制出具有我國自主知識產(chǎn)權的快速、靈敏的AFB1-TRFIA、OTA-TRFIA檢測試劑盒。結果該方法檢測黃曲霉毒素B1的靈敏度為0.02 μg/L，測量范圍為0.02 ～100 μg/L，檢測赭曲霉毒素A的靈敏度為0.05 μg/L，測量范圍為0.05～50 μg/L，這種方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，可測范圍寬，一次操作同時可以得到AFB1、OTA的兩個結果，是一種簡單、經(jīng)濟、穩(wěn)定的檢測方法。

2.2 赭曲霉毒素

2.2.1 赭曲霉毒素的性質(zhì)、危害及限量標準 赭曲霉毒素(Ochratoxin，OT)是赭曲霉屬和青霉屬的幾種真菌分泌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。主要對農(nóng)作物、動物和人有毒害作用的物質(zhì)，其中以赭曲霉毒素A(OTA)毒性和危害是最大的，對農(nóng)作物的污染最嚴重、分布也是最廣泛的[16]。OTA主要毒害人和動物的腎臟及肝臟，有致畸、免疫抑制和致癌作用，國際癌癥研究機構IARC把它認定為2B類致癌物，對農(nóng)作物、動物和人都有很大的毒害作用。因此各國對各類食品中OTA的限量標準很嚴格，如歐盟國家在谷物中不得超過5 μg/kg，在谷物制品中不得超過3 μg/kg，在干鮮果品中不得超過 10 μg/kg[17]。

2.2.2 OTA-TRFIA檢測方法的建立 黃飚等[18]采用稀土離子標記技術，應用多克隆抗體建立高靈敏的赭曲霉毒素A(OTA)時間分辨熒光免疫分析法(OTA-TRFIA)。以OTA-KLH為免疫原制備抗OTA抗體;OTA與BSA的聯(lián)結物(OTA-BSA)為固相抗原，與游離OTA共同競爭有限的兔抗OTA抗體;用Eu3+標記的羊抗兔抗體。該方法的靈敏度為0.02 μg/L，測量范圍為0.02 μg/L ～400 μg/L，批內(nèi)和批間的變異率分別為2.6%和5.2%，平均回收率為95.8%，與赭曲霉毒素B對OTA的檢測有5.6%交叉反應，而黃曲霉毒素B1及BSA則沒有交叉反應。不同時間進行的OTA-TRFIA的ED80、ED50、ED20效應點值分別為 0.2 μg/L、1.0 μg/L 和 5.3 μg/L。試驗研究表明，OTA-TRFIA是目前在OTA檢測中最靈敏和簡便的方法之一，該分析方法具有穩(wěn)定性好、可測范圍寬等優(yōu)點，具有很好的應用前景。

2.3 伏馬菌素

2.3.1 伏馬菌素的性質(zhì)、危害及限量標準 伏馬菌素(Fumonisin，F(xiàn)B)是一種霉菌毒素，是由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme Sheld)產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物。流行病學調(diào)查顯示人類食管癌與伏馬菌素污染有關，國際癌癥研究中心(IARC)把它劃分到2B組，即人類有可能致癌的物質(zhì)[19]。伏馬菌素分布廣泛且毒性較大，越來越受到人們的關注。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)公布的食用谷物中伏馬菌素的推薦最高限量為2 mg/kg[20]，歐盟公布不同飼料中伏馬菌素的推薦最高限量標準為5 mg/kg。

2.3.2 FB1-TRFIA檢測方法的建立 張玨等[21]利用稀土離子Eu3+-羊抗鼠IgG進行示蹤檢測，建立伏馬毒素B1-時間分辨熒光免疫分析(FB1-TRFIA)并進行方法學的考核。結果FB1-TRFIA檢測靈敏度為0.05 ng/ml，檢測范圍為 FB1:1.0 ～1 000 ng/ml，批內(nèi)、批間變異率均小于10%。添加回收實驗表明玉米樣品中FB1批內(nèi)平均回收率為104.3%，批間平均回收率為100.7%。FB1與FB2有輕微交叉反應，F(xiàn)B1不與赤霉毒素脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、T-2等真菌毒素發(fā)生交叉反應，方法特異性好。結論:FB1-TRFIA靈敏度高，檢測范圍寬，重復性、穩(wěn)定性好，是一種簡便、快速、經(jīng)濟、穩(wěn)定、可進行大批量樣品伏馬毒素篩查的檢測方法。

2.4 T-2毒素

2.4.1 T-2毒素的性質(zhì)、危害及限量標準 T-2毒素(T-2 toxin)是單端孢霉烯族毒素之一，可由多種真菌產(chǎn)生，主要產(chǎn)生菌是鐮孢菌屬，如擬枝孢鐮刀菌、枝孢鐮刀菌等[22]。1973年聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)在日內(nèi)瓦召開的聯(lián)席會議上，把這類毒素同黃曲霉素一樣作為自然存在的最危險的食品污染源。它分布范圍廣(尤其是玉米和小麥)、毒性強，且證明其與克山病和大骨節(jié)病有關[23]。以色列規(guī)定谷物飼料中T-2毒素不得超過100 ppb;我國《配合飼料中T-2毒素的允許量(GB 21693-2008)》規(guī)定，在豬、禽配合飼料中，T-2毒素的允許量必須≤1 mg/kg，即≤1 ppm(1 000 ppb)。

2.4.2 T-2-TRFIA檢測方法的建立 楊潤琳等[24]以時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)方法建立快速靈敏的T-2毒素的全自動檢測方法。采用T-2-BSA包被96孔板作為固相抗原，與游離的T-2競爭有限的抗T-2單克隆抗體，以Eu3+標記的羊抗鼠抗體示蹤，采用間接競爭免疫分析方法在解離增強熒光免疫分析體系中建立T-2-TRFIA。同時對這一方法的穩(wěn)定性、靈敏度、回收率和特異性進行考核。此方法靈敏度為0.2 μg/L，測量范圍0.2 ～500 μg/L，批內(nèi)變異為7.5%，批間變異為12.7%，平均回收率為89.6%。與赭曲霉毒素A、黃曲霉毒素B1、牛血清白蛋白無交叉反應。10條不同時間進行的間接競爭T-2-TRFIA的效應點均值ED80、ED50、ED20分別為 2.66、6.97、29.11 μg/L。本試驗建立的間接T-2-TRFIA方法所需時間短，分析系統(tǒng)高度自動化，操作簡便，人為誤差低，穩(wěn)定性高，可測范圍廣，靈敏度高，適合于快速、簡便、大批量的樣品篩查。

2.5 玉米赤霉烯酮

2.5.1 玉米赤霉烯酮的性質(zhì)、危害及限量標準 玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)又叫F-2毒素，是由串珠鐮刀菌、粉紅鐮刀菌及三線鐮刀菌等鐮刀菌株產(chǎn)生的一種雌激素真菌毒素。研究表明，豬對玉米ZEN最為敏感。高劑量的ZEN還能引起人的雌激素水平升高，并產(chǎn)生相應的生殖紊亂癥狀[25]。因此，各國政府相繼出臺制定出了ZEN在動物飼料和糧食中的最高限量[26]。澳大利亞規(guī)定谷物中的ZEN的含量不能超過50 ppb;意大利規(guī)定在谷物和谷類產(chǎn)品中ZEN的含量不能超過100 ppb;法國規(guī)定植物油和谷類當中ZEN的含量必須低于200 ppb;歐盟規(guī)定仔豬日糧中ZEN的最高限量為100 ppb;我國《飼料衛(wèi)生標準飼料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允許量(GB 13078.2-2006)》規(guī)定配合飼料和玉米中ZEN的最高限量為500 ppb。

2.5.2 ZEN-TRFIA檢測方法的建立 馬智鴻等[27]采用基于生物素(Biotin)-鏈霉親和素(Strepavidin)的時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)技術建立了快速靈敏的玉米赤霉烯酮(ZEN)檢測方法。以Strepavidin包被板條，加入生物素化的ZEN-BSA，結合在板條上的ZEN-BSA與標準/樣本中的游離ZEN共同競爭限量的抗ZEN單克隆抗體，用稀土離子Eu3+標記的羊抗鼠IgG進行示蹤，建立了間接競爭的ZEN-TRFIA。該方法的檢測靈敏度為0.2 ng/ml，測量范圍是0.2～200.0 ng/ml，批內(nèi)和批間變異率分別為5.7%和8.3%，平均回收率達到了91.1%。與玉米赤霉醇的平均交叉反應為12.3%，與黃曲霉素B1、赭曲霉素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇均無交叉反應，說明該方法的特異性非常好。試驗中用到的試劑在4℃放6個月后各項檢測參數(shù)幾乎沒有變化，說明該方法穩(wěn)定性很好。ZEN-TRFIA具有測量準確、檢測靈敏度高、檢測范圍寬、操作簡便、標記物穩(wěn)定等優(yōu)點，適合于ZEN大量篩查的應用。

2.6 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇

2.6.1 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的性質(zhì)、危害及限量標準 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)是一種單菌孢霉烯族化合物，DON主要污染玉米、大麥、小麥等谷類作物及制品，對人畜有很強的毒性[28]，1993年國際癌癥研究中心(IARC)將DON列為第三類致癌物。因此，各國都對谷物及飼料中DON的含量制定了嚴格的限量標準，例如，美國FDA規(guī)定小麥及其制品中DON的含量不得超過1.0 mg/kg，飼料中 DON 不得超過 4.0 mg/kg[29]。我國國家標準GB2761-2005規(guī)定在食用小麥及玉米中DON的限量為1 000 μg/kg，GB20833-2007規(guī)定豬飼料中DON的允許量為1 000 μg/kg;聯(lián)合國糧農(nóng)組織規(guī)定食用糧食中DON的含量必須＜1000 μg/kg。

2.6.2 DON-TRFIA檢測方法的建立 周彬等[30]利用抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)多克隆抗體，采用納米均相時間分辨熒光免疫法測定技術建立間接競爭DON-TRFIA定量檢測方法。方法:DON-BSA包被發(fā)光微粒，生物素化羊抗兔抗體與包被有鏈霉素的感光微粒共同構成檢測試劑，優(yōu)化檢測各種條件并對檢測性能進行評價。結果:該方法的靈敏度為0.007 ng/ml，檢測范圍為 0.007 ～100 ng/ml，批內(nèi)批間變異系數(shù)均＜5%。不同樣品添加回收實驗:玉米、小麥、啤酒回收率分別為 84% ～110%、67% ～100%、74% ～100%。結論:納米均相時間分辨熒光免疫法測定DON是目前DON檢測中最靈敏的方法之一，該分析方法穩(wěn)定性好，可測范圍寬，具有很好的應用前景。

3 結語

綜上所述，真菌毒素是一類毒性很強的小分子物質(zhì)，性質(zhì)非常穩(wěn)定，不會因為在加熱的情況下被破壞，并且對農(nóng)作物、飼料和食品污染很嚴重，這些都與我們?nèi)粘Ｉ詈蜕】涤蟹浅４蟮年P聯(lián)，也對畜禽的生長和肉類產(chǎn)品有重大的影響。對人畜的危害性主要表現(xiàn)在導致各種急性、慢性中毒現(xiàn)象的發(fā)生，而且還存在致癌、致畸、致突變的危險。隨著人們生活水平的日益提高，解決真菌毒素可能造成的污染不僅關系到食品安全和人們的健康，而且還關系到畜禽肉類產(chǎn)品的健康發(fā)展。真菌毒素對人類生活的污染往往不易被人們所注意，因此更需要找到一種靈敏度高，特異性強，簡便快速容易普及應用的方法來檢測真菌毒素。TRFIA技術是近些年新興起的一種快速免疫檢測技術，它集合了酶標記技術、放射標記技術和同位素標記技術的優(yōu)點，具有靈敏度高、特異性很強、穩(wěn)定性好，且測定范圍更寬，試劑盒壽命長，操作簡單和非放射性等特點，非常適用于真菌毒素的超微量分析，是一項很有前途的、值得推廣使用的技術，其應用范圍不斷發(fā)展已經(jīng)成為食品安全檢測方面的重要手段。

1 Tan M，Song B，Wang G et al.A new terbium(Ⅲ)chelate as an efficient singlet oxygen fluorescence probe[J].Free Radical Biology and Medicine，2006;40(9):1644-1653.

2 Niu C G，Liu J，Qin P Z et al.A novel bifunctional europium chelate applied in quantitative determination of human immunoglobin G using time-resolved fluoroimmunoassay[J]. Analytical Biochemistry，2011;409(2):244-248.

3 Harma H，Soukka T，Lovgren T.Europium nanoparticles and timeresolved fluorescence for ultrasensitive detection of prostate-specific antigen[J].Clinical Chemistry，2001;47(3):561-568.

4 Zhang Z，Liu J F，Yao Y et al.A competitive dual-label time-resolved fluoroimmunoassay for the simultaneous determination of chloramphenicol and ractopamine in swine tissue[J].Chinese Science Bulletin，2011;56(15):1543-1547.

5 Hagan A K，Zuchner T.Lanthanide-based time-resolved luminescence immunoassays[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry，2011;400(9):2847-2864.

6 金 晶，賴衛(wèi)華，涂祖新et al.時間分辨熒光免疫分析技術的研究進展及在食品安全領域中的應用[J].食品科學，2006;27(12):886-889.

7 黃天培，何佩茹，潘潔茹et al.食品常見真菌毒素的危害及其防止措施[J].生物安全學報，2011;20(2):108-112.

8 Schatzmayr G，Zehner F，T?ubel M et al.Microbiologicals for deactivating mycotoxins[J].Molecular Nutrition ＆ Food Research，2006;50(6):543-551.

9 胡 娜，徐 玲.真菌毒素檢測方法研究進展[J].食品科學，2007;28(8):563-564.

10 Hathout A S，Mohamed S R，El-Nekeety A A et al.Ability of Lactobacillus casei and Lactobacillus reuteri to protect against oxidative stress in rats fed aflatoxins-contaminated diet[J].Toxicon，2011;58(2):179-186.

11 Wu Q，Jezkova A，Yuan Z et al.Biological degradation of aflatoxins[J].Drug Metabolism Reviews，2009;41(1):1-7.

12 段淑芬，胡文廣，戴良香.花生黃曲霉毒素國家標準與綠色貿(mào)易壁壘[J].中國農(nóng)學通報，2006;22(6):95-98.

13 黃 飚，陶文沂，張蓮芬et al.黃曲霉毒素B1的高靈敏時間分辨熒光免疫分析[J].核技術，2006;29(4):295-300.

14 計 融，柳 楨，江 濤et al.總黃曲霉毒素ELISA定量檢測試劑盒研制[J].中國公共衛(wèi)生，2007;23(03):331-333.

15 黃 飚，張 玨，馬智鴻et al.用雙標記時間分辨熒光免疫法同時檢測黃曲霉毒素 B1和赭曲霉毒素 A[J].衛(wèi)生研究，2009;38(004):385-388.

16 李發(fā)生，徐 霞，郭 樂 et al.赭曲霉素 A的毒性研究進展[J].山東畜牧獸醫(yī)，2009;30(005):58-60.

17 Duarte S C，Pena A，Lino C M.A review on ochratoxin A occurrence and effects of processing of cereal and cereal derived food products[J].Food microbiology，2010;27(2):187-198.

18 黃 飚，時 瑾，朱 嵐et al.赭曲霉毒素A時間分辨熒光免疫分析法的建立及其考核[J].標記免疫分析與臨床，2008;15(3):174-177.

19 De Girolamo A，Pascale M，Visconti A.Comparison of methods and optimisation of the analysis of fumonisins B1 and B2 in masa flour，an alkaline cooked corn product[J].Food Additives and Contaminants，2011;28(5):667-675.

20 王金昌，王小紅，楊一兵et al.伏馬菌素的毒害及脫毒防控技術的研究進展[J].江西科學，2009;27(001):76-80.

21 張 玨，朱 嵐，陳 蘊et al.伏馬毒素B1時間分辨熒光免疫分析超微量檢測方法的建立[J].環(huán)境與健康雜志，2009;26(012):1112-1115.

22 Jaradat Z W，ViIa B，Marquardt R R.Adverse effects of T-2 toxin on chicken lymphocytes blastogenesis and its protection with Vitamin E[J].Toxicology，2006;225(2-3):90-96.

23 劉 寧，鮑文生，李德安et al.大骨節(jié)病和克山病老病區(qū)糧食中T-2毒素和黃綠青霉素污染狀況調(diào)查[J].中國地方病學雜志，2004;23(3):237-239.

24 楊潤琳，計 融，江 濤et al.T-2毒素的高靈敏時間分辨熒光免疫分析[J].食品與機械，2010;26(001):74-76.

25 姜淑貞，楊維仁，楊在賓.玉米赤霉烯酮的代謝，毒性及其預防措施[J].動物營養(yǎng)學報，2011;23(002):196-202.

26 龐凌云，祝美云，李 瑜.玉米赤霉烯酮檢測方法研究進展[J].糧食與油脂，2009;21(007):39-41.

27 馬智鴻，黃 飚，屠 薔et al.應用生物素-鏈霉親和素的時間分辨熒光免疫分析檢測玉米赤霉烯酮[J].江蘇農(nóng)業(yè)學報，2009;25(004):905-909.

28 Schollenberger M，Muller H M，Rufle M et al.Survey of Fusarium toxins in foodstuffs of plant origin marketed in Germany[J].International journal of food microbiology，2005;97(3):317-326.

29 蘇福榮，王松雪，孫 輝et al.國內(nèi)外糧食中真菌毒素限量標準制定的現(xiàn)狀與分析[J].糧油食品科技，2008;15(6):57-59.

30 周 彬，高 雷，金 堅et al.納米均相時間分辨熒光免疫法檢測脫氧雪腐鐮刀菌烯醇方法的建立[J].食品工業(yè)科技，2010;31(8):338-342.