黎海瀾 綜述，焦 偉 審校

（廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院輸血科，南寧 530021）

近年來(lái)對(duì)新生兒溶血?。℉DN）的研究越來(lái)越受關(guān)注，HDN的早期診斷與防治已成為臨床研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)就ABOHDN實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用等進(jìn)行綜述。

1 ABO-HDN的發(fā)病機(jī)制及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的臨床意義

新生兒溶血病是由于母嬰血型不合而引起的同族免疫性溶血，臨床表現(xiàn)為不同程度的黃疸、貧血、肝脾腫大，嚴(yán)重者可有核黃疸，甚至死亡［1］。ABO-HDN是ABO血型抗體引起的，在O型母親所生的A型或B型嬰兒中有較高的發(fā)生率，由于自然界廣泛存在類A和類B物質(zhì)，故ABO-HDN第1胎即可發(fā)病，但通常病情較輕，隨著妊娠次數(shù)增加，發(fā)病率會(huì)相應(yīng)增高，病情相對(duì)嚴(yán)重［2］。一般由抗-A引起的 HDN要比抗-B常見［3］。在A型、B型等母親所生B、A、AB型嬰兒僅少數(shù)發(fā)生溶血病。Wang等［4］曾報(bào)道1位A型母親的血清中具有高滴度的IgG B抗體，其效價(jià)大于1∶1 024，導(dǎo)致B型新生兒發(fā)生溶血；Deng等［5］報(bào)道了1例更罕見的ABO-HDN，1位O型母親所生具有cisAB血型的嬰兒發(fā)生ABO新生兒溶血，在新生兒血清中同時(shí)檢測(cè)出IgG抗-A和抗-B兩種抗體，該嬰兒具有高水平的膽紅素血癥以及嚴(yán)重的貧血。因此ABO-HDN不局限于O型母親所生血型不合嬰兒，A型／B型母親所生血型不合嬰兒也可發(fā)生，其研究顯得越來(lái)越重要。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，孕婦與胎兒發(fā)生ABO血型不合的概率為20%～25%，而其中發(fā)生溶血病的概率為10%左右。西安地區(qū)3 876例新生兒溶血病產(chǎn)后檢測(cè)資料的分析結(jié)果顯示，由A、AB血型不合引起的HDN占被檢樣本的0.08%，由B、AB血型不合引起的HDN占被檢樣本的0.1%，而由O、A血型不合引起的HDN占被檢樣本的20.12%，由 O、B血型不合引起的 HDN占被檢樣本19.74%，后兩種血型不合共占39.86%［6］。因此對(duì)ABO-HDN進(jìn)行早期、準(zhǔn)確診斷有重要臨床意義。

2 ABO-HDN實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

血型血清學(xué)診斷是確診HDN的主要依據(jù)。其基本程序?yàn)榈谝徊窖丸b定，第二步進(jìn)行三項(xiàng)試驗(yàn)，第三步從三項(xiàng)檢查結(jié)果對(duì)ABO-HDN進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

2.1 新生兒及父母血型鑒定方法 這是檢查HDN的第一步，以便考慮以后進(jìn)一步檢查的程序。血型鑒定的方法很多，常用試管法，被認(rèn)為是最可信賴的方法。隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，單克隆凝膠血型卡已廣泛應(yīng)用于臨床，全自動(dòng)血庫(kù)系統(tǒng)血型鑒定也逐步在臨床推廣應(yīng)用［7］。

2.2 檢測(cè)導(dǎo)致新生兒紅細(xì)胞破壞的IgG抗-A（B）的方法

2.2.1 臨床上對(duì)HDN的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依靠HDN血型血清學(xué)檢查，最有力的證據(jù)是證實(shí)新生兒紅細(xì)胞被來(lái)自母親的IgG抗體致敏。常用的檢測(cè)方法包括紅細(xì)胞致敏抗體放散試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗(yàn)，被稱為HDN“三項(xiàng)試驗(yàn)”。

2.2.2 新生兒溶血病紅細(xì)胞致敏抗體放散技術(shù) 在HDN“三項(xiàng)試驗(yàn)”中，患兒紅細(xì)胞致敏抗體放散試驗(yàn)敏感度最高，是判定新生兒溶血病最為重要的依據(jù)。熱放散法是ABO-HDN診斷最常用、最經(jīng)典的試驗(yàn)，它是通過熱釋放的方法將致敏在紅細(xì)胞表面的抗體放散到鹽水（或AB型血清）中，再用已知的抗原檢測(cè)鹽水中的相應(yīng)抗體。然而，因其為物理方法，熱放散試驗(yàn)效果受諸多因素的影響，搖動(dòng)的頻率與力度、放散時(shí)間和溫度等均難以控制［8］。多年來(lái)人們對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法進(jìn)行不斷地探索，以尋找更為敏感、簡(jiǎn)捷的放散方法，如2004年孫愛農(nóng)等［9］研究發(fā)現(xiàn)改良氯仿放散法適合檢測(cè)由IgG抗-A或抗-B導(dǎo)致的ABO-HDN，且敏感性并不比傳統(tǒng)熱放散試驗(yàn)低；2000年周曉華等［10］報(bào)道微波放散法可以作為紅細(xì)胞抗體放散的一種方法。但由于客觀原因，均未能在臨床上推廣應(yīng)用。近年來(lái)酸放散試驗(yàn)逐漸應(yīng)用于HDN的實(shí)驗(yàn)室診斷［11］，且越來(lái)越受到人們的重視，已被英國(guó)血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)列為紅細(xì)胞血液免疫學(xué)檢測(cè)常規(guī)方法。

2.2.3 患兒紅細(xì)胞釋放抗體及血清游離抗體檢測(cè)方法 新生兒溶血病的嚴(yán)重程度主要與抗體種類、效價(jià)高低以及紅細(xì)胞被致敏程度有關(guān)。游離實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)新生兒血清中是否存在與其紅細(xì)胞不配合的ABO以外抗體和（或）IgG抗-A（B），可提示病情嚴(yán)重程度［12］。使用酶試驗(yàn)檢測(cè)引發(fā)HDN的抗體，被認(rèn)為工序繁瑣，對(duì)技術(shù)人員操作要求高，難度大，耗時(shí)久，且在操作過程中易出現(xiàn)假陰性結(jié)果［13］。也有研究者利用不完全抗體快速反應(yīng)試劑（主要含凝聚胺、聚乙二醇、枸櫞酸鈉）進(jìn)行HDN的實(shí)驗(yàn)室檢查診斷［14］。有人將凝聚胺技術(shù)應(yīng)用于HDN抗體檢測(cè)，認(rèn)為凝聚胺法的敏感性能達(dá)到要求，且快速簡(jiǎn)便［15］。近幾年微柱凝膠技術(shù)（MGCT）被引進(jìn)HDN血型血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，對(duì)臨床標(biāo)本檢測(cè)的敏感性大大提高［16－20］。

2.2.4 患兒紅細(xì)胞直接抗球蛋白試驗(yàn) 直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性在新生兒溶血病診斷中有著非常重要的作用，陽(yáng)性結(jié)果提示患兒體內(nèi)紅細(xì)胞可能被抗體致敏。因此直接抗球蛋白試驗(yàn)敏感性的提高有益于HDN初次確診率的提高。ABO型溶血病因紅細(xì)胞上抗體結(jié)合少，故直接法常顯陰性，須作改良直接法、抗體釋放試驗(yàn)及游離抗體試驗(yàn)［21］。

2.3 檢測(cè)母體針對(duì)新生兒的免疫性抗體 母親標(biāo)本做與患兒血型抗原相對(duì)應(yīng)IgG抗-A（B）效價(jià)的測(cè)定。新生兒 ABOHDN的發(fā)病率隨其母親體內(nèi)IgG抗體效價(jià)的升高而升高，且與母親體內(nèi)IgG1呈正相關(guān)［22］。有研究表明，HDN的發(fā)病率隨母體內(nèi)抗-A（B）水平的升高而遞增，但仍有一些高抗體水平的個(gè)體并無(wú)HDN，而一些低抗體水平的個(gè)體發(fā)生了中度至重度的HDN［22－24］。這可能與抗體的IgG亞型有關(guān)，有學(xué)者認(rèn)為主要是IgG1抗體引起嚴(yán)重的HDN，而另一些學(xué)者研究顯示：嚴(yán)重的HDN的發(fā)生與IgG1和IgG3存在相關(guān)性［25－27］。盡管如此，有關(guān)IgG亞型的定量檢測(cè)目前仍處于試驗(yàn)階段，要應(yīng)用于臨床尚待進(jìn)一步的研究。雖然有關(guān)IgG抗體滴度與HDN嚴(yán)重程度之間的相關(guān)程度尚未確定，但目前仍作為臨床對(duì)新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)之一。

3 結(jié)束語(yǔ)

HDN是由于母－胎間血型不合而引起的免疫性溶血性疾病，是兒科最常見的急性溶血性疾病之一，一直備受婦幼醫(yī)療學(xué)界的重視，盡管產(chǎn)前、產(chǎn)后、都有有效的治療手段，但準(zhǔn)確、及時(shí)的實(shí)驗(yàn)室檢查檢測(cè)，做到早發(fā)現(xiàn)、早防治仍將是值得探討和研究的熱點(diǎn)。

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