■許友卿 鄭一民 李偉峰 黃金華，2 丁兆坤

(1.廣西大學(xué)水產(chǎn)科學(xué)研究所，廣西南寧 530004；2.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530007)

軍曹魚(Rachycentron canadum)是優(yōu)良海水養(yǎng)殖魚種，也是中國海水養(yǎng)殖和營養(yǎng)飼料研究的主要良種之一。軍曹魚是肉食性魚類，廣泛分布在熱帶和亞熱帶海域，在23～29℃水中生長迅速，一年即可長至5～6 kg上市。由于軍曹魚生長快，個體大，肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)價值高，是目前最熱門的研究對象和未來最被看好的潛力魚種之一。因此，軍曹魚研究和繁養(yǎng)發(fā)展迅速。然而，魚病是軍曹魚養(yǎng)殖的最大威脅之一。在高密度網(wǎng)箱養(yǎng)殖中，軍曹魚魚病頻發(fā)。三類潛在的病原體——細菌、病毒和寄生蟲已經(jīng)導(dǎo)致軍曹魚病毒淋巴炎病、寄生孢蟲黏病和細菌性疾病。其他病原體如Trichodina spp.,Neobenedenia spp.和Amylodinium spp.也能感染軍曹魚。因此，在軍曹魚養(yǎng)殖中，如何預(yù)防軍曹魚患病，患病后又如何根據(jù)其主要癥狀和病理變化分析病因，正確診斷和積極治療至關(guān)重要。

我們在2010年軍曹魚養(yǎng)殖中，除了注意魚苗、水質(zhì)的管理外，通過分階段投喂優(yōu)質(zhì)飼料藥餌，中西醫(yī)結(jié)合治療魚病綜合癥，控制和治愈了由病毒、細菌、寄生蟲和其他病原體感染的軍曹魚稚魚綜合癥，不但效果好，成本低，而且不復(fù)發(fā)。

1 材料與方法

1.1 軍曹魚及其飼養(yǎng)

2010年4月28日凌晨，我們雇用專用魚苗運輸車，從廣東省湛江市流沙鎮(zhèn)軍曹魚魚苗場運2 000尾48日齡、體重3～5 g/尾的健康軍曹魚稚魚，至廣西防城港廣西水產(chǎn)研究所海水養(yǎng)殖中試基地進行室內(nèi)養(yǎng)殖實驗。運輸前后均對魚苗進行消毒、水質(zhì)和水溫適應(yīng)性試驗，然后把魚苗放在經(jīng)過消毒的海水養(yǎng)殖池內(nèi)馴化養(yǎng)殖。所用海水鹽度約27‰～30‰,pH值7.8～8.5,水溫（26±2）℃。馴養(yǎng)中，按實驗方案實行每天24 h充氣，換水80%，并清洗池底。2010年4月28日中午和晚上，投喂了從防城企沙鎮(zhèn)自由市場購買的新鮮小雜魚魚糜。4月29日開始每天死亡魚苗約100尾，至完全控制病情為止，總死亡率約80%。

1.2 病魚表觀及解剖特征

病魚外觀體色稍為變黑，食欲減退，離群獨游，對外界刺激反應(yīng)遲鈍，身體僵直或呈弧狀彎曲，靜止于池底，悄然死去。偶見魚體發(fā)黑者緩慢浮出水面，拼命作水平繞圈，繼而螺旋翻轉(zhuǎn)，疑似痛苦掙扎，數(shù)秒鐘后沉入水底，翻白死去。解剖病魚尸體發(fā)現(xiàn)，其肝腫大、肝腦充血、脾和腎或多或少分布著小米大小的膿包狀白點，嚴重者呈膿包壞死狀，少量病魚的肝也有結(jié)節(jié)小白點(見圖1～圖3）；嚴重者腎臟腫脹，呈貧血狀，脾臟腫脹且呈暗紅色；膽汁呈墨綠色，無病變特征；大多病魚胃腸內(nèi)無食糜，也有的病魚胃腸充滿褐色食糜。取其肝、腎、脾涂片進行瑞氏染色后，于400x顯微鏡下觀察。圖4為肝結(jié)節(jié)白點涂片結(jié)果。

圖1 患病軍曹魚稚魚部分內(nèi)臟的癥狀(肝有結(jié)節(jié)白點，腎腫大，脾為暗紅色)

圖2 患病軍曹魚稚魚肝的結(jié)節(jié)白點

圖3 患病軍曹魚稚魚脾的結(jié)節(jié)白點

圖4 患病軍曹魚稚魚肝結(jié)節(jié)白點涂片的瑞氏染色400x顯微觀察

1.3 分析軍曹魚患病的主要病因

經(jīng)查實，原軍曹魚魚苗場和出售他處的軍曹魚稚魚沒有出現(xiàn)上述患病癥狀，我們選購的軍曹魚稚魚于運輸前和運輸當天也沒有發(fā)生異常死亡現(xiàn)象。只是在實驗操作者臨時改變原實驗方案，給軍曹魚稚魚投喂了二次從防城企沙鎮(zhèn)自由市場購買的新鮮海水小雜魚魚糜后，才發(fā)生持續(xù)大量死亡事故。因此，推測很可能是由當?shù)刈杂墒袌鲑I的海水小雜魚帶來的病菌感染所致。海水小雜魚帶來的病菌可以通過二條途徑感染軍曹魚稚魚：第一，軍曹魚稚魚直接吞食帶病菌小雜魚魚糜；第二，撒在馴化池水中的帶病菌小雜魚魚糜既能使水質(zhì)迅速富營養(yǎng)化，又能使病菌迅猛繁殖蔓延，感染軍曹魚稚魚。這樣病菌由食物至體內(nèi)、由體外至體內(nèi)，雙途徑結(jié)合同時感染軍曹魚，使其稚魚爆發(fā)魚病，產(chǎn)生災(zāi)難性后果。

根據(jù)上述軍曹魚患病的主要癥狀判斷，可能是由神經(jīng)壞死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)、諾卡氏菌（Nocardiaceae）和美人魚發(fā)光桿菌(Photobacterium damselae subsp.)等3種病原引起的綜合癥。其中神經(jīng)壞死病毒(red-spotted grouper NNV,RGNNV)是近年來嚴重危害海水魚苗生產(chǎn)、引起爆發(fā)性流行病的重大病原之一。研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)壞死病毒已經(jīng)感染40多種魚，在亞洲的一些國家，尤其是中國和日本，神經(jīng)壞死病毒對海水養(yǎng)殖的魚類危害十分嚴重。閆云峰等(2010)研究發(fā)現(xiàn)，軍曹魚也是神經(jīng)壞死病毒的易感種群之一，病毒能通過水平傳播感染軍曹魚。我國臺灣學(xué)者從發(fā)生大批死亡的軍曹魚中檢測到魚類神經(jīng)壞死病毒。病毒性神經(jīng)壞死病的主要病癥是，病魚表現(xiàn)出不同程度的神經(jīng)異常，不攝食，腹部朝上，在水面作水平旋轉(zhuǎn)或上下翻轉(zhuǎn)，呈痙攣狀。

諾卡氏菌病魚的主要癥狀是：體表和心、脾、腎等內(nèi)臟出現(xiàn)白色結(jié)節(jié)。目前認為，諾卡氏菌使海水魚致病的途徑：一是攝食了帶病菌的海水小雜魚或魚粉；二是被存于養(yǎng)殖池的病菌所感染。在自然條件下，由于集約化程度高，養(yǎng)殖密度大，魚體容易損傷和體質(zhì)下降，給病原菌提供了致病機會。

美人魚發(fā)光桿菌導(dǎo)致魚結(jié)節(jié)病的主要癥狀是：嚴重感染的魚腎、脾出現(xiàn)大量結(jié)節(jié)，魚肝、腸系膜也會出現(xiàn)結(jié)節(jié)。此病的累積死亡率較高，可達50%～60%。美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種（P.damselae subsp.Piscicida）最早分離于野生美洲狼鱸(Morone americanus)和斑點叉尾鮰(Ictalurus punctatus)。此后嚴重影響日本五條鰤(Seriola quinqueradiata)、香魚(Plecoglossus altivelis)、海鱒(Salmo Trutta)、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、鲆(Bothidae)和鰈類(lefteye flounders)等，半數(shù)致死量約 103～106。美人魚發(fā)光桿菌是一種致病性很高的魚類病原菌，寄生感染宿主不具特異性，能感染多種養(yǎng)殖魚類。美人魚發(fā)光桿菌也可導(dǎo)致軍曹魚結(jié)節(jié)病，該病通常在18～20℃爆發(fā)，曾經(jīng)對臺灣軍曹魚養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。人工將美人魚發(fā)光桿菌感染軍曹魚，2～4 d即出現(xiàn)死魚，其癥狀與本次軍曹魚發(fā)病癥狀基本一致。

由于患病軍曹魚只是皮膚顏色稍為變黑、攝食和活動減少，沒有其他明顯外部癥狀，而且美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種主要通過胞外蛋白酶類、胞外溶血素和細胞溶素等因子使魚致病、死亡，因此在發(fā)病早期很難確診，導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率均很高。

1.4 中西醫(yī)結(jié)合治療軍曹魚綜合癥

根據(jù)上述分析，魚病可能是由神經(jīng)壞死病毒(Nervous necrosis virus,NNV)、諾卡氏菌（Nocardiaceae）和美人魚發(fā)光桿菌(Photobacterium damselae subsp.)等3種病原引起的綜合癥。我們因地制宜，采取了緊急處理方案，立即清除死魚，隔離病魚，消毒馴化池和全部稚魚，并轉(zhuǎn)移上桶分養(yǎng)，以便操作、處理和治療。首先立即停止投喂當?shù)厥袌鲑I的海水小雜魚，改用根據(jù)原實驗方案準備的優(yōu)質(zhì)配合飼料。對全部稚魚實施體內(nèi)、外用藥，中西醫(yī)結(jié)合治療。隔天輪流用標準濃度聚維酮碘（PVP-I，廈門北大泰普動物保健有限公司）或1 mg/l化學(xué)純高錳酸鉀溶液浸浴消毒魚體30 min，并定期清洗、消毒養(yǎng)魚桶，防止病菌繁殖蔓延。同時及時清除糞便和剩餌，防止養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化，每天換用80%以上新鮮過濾的海水，并保持流水和充氣。每天上午按每千克魚體重添加聚維酮碘2 mg、自制穿心蓮粉12 g、自制板藍根粉9 g拌飼料投喂，主要治療細菌性疾?。幌挛绨疵壳Э唆~體重添加研碎的病毒靈(鹽酸嗎啉胍片，錦州生化制藥有限公司)20 mg拌飼料投喂，主要治療病毒性疾?。刂拼瞬『?，停止使用病毒靈），連續(xù)投喂7 d，7 d后藥量減半，直至完全控制疾病，治愈病癥為止。

2 結(jié)果與討論

從2010年5月6日開始我們利用中西綜合療法，一周后，死亡減半，由原來平均每天死魚約100尾降至約50尾，二周后即5月19日完全制止死魚，控制了疾?。ㄒ妶D5）。所治愈的軍曹魚稚魚體色鮮亮，游動活躍，食欲旺盛，搶食兇猛，未出現(xiàn)復(fù)發(fā)病癥。

圖5 用藥前后(4月28日～5月18日)軍曹魚稚魚死亡情況

進行高密度養(yǎng)魚，選好魚苗、科學(xué)管理、提供優(yōu)質(zhì)水源和餌料是十分關(guān)鍵的。只有優(yōu)化“水、種、管、餌”，才能保證水產(chǎn)養(yǎng)殖健康發(fā)展。養(yǎng)魚應(yīng)以防病為主，一旦發(fā)現(xiàn)魚病，應(yīng)立即對病魚消毒、隔離、提供優(yōu)質(zhì)水源和治療等措施，防止魚病繼續(xù)蔓延惡化。

投喂無病菌的優(yōu)質(zhì)飼料是重要措施之一。生物餌料、飼料和添加劑等是水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要投入品，其質(zhì)量優(yōu)劣與養(yǎng)殖水產(chǎn)品的健康和質(zhì)量密切相關(guān)，是保證養(yǎng)殖水產(chǎn)品質(zhì)量和安全的關(guān)鍵因素。因此，必須保證這些投入品的質(zhì)量符合有關(guān)標準和技術(shù)要求，施用方法符合養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范，保證養(yǎng)殖水產(chǎn)品的質(zhì)量安全，防止污染環(huán)境。如果把不消毒或者消毒不徹底的餌料魚或其他帶病菌的飼料投喂所養(yǎng)的魚，不僅導(dǎo)致所養(yǎng)的魚直接感染病菌，而且會使水質(zhì)富營養(yǎng)化，病菌及其他有害微生物大量繁殖。

此次魚病爆發(fā)，很可能是由防城企沙鎮(zhèn)自由市場購買的海水小雜魚帶來的病菌感染所致。因此我們首先立即停止投喂當?shù)厥袌鲑徺I的海水小雜魚，改用根據(jù)原實驗方案準備的優(yōu)質(zhì)配合飼料。這樣一方面切斷外源病原體、防止魚病繼續(xù)擴大、蔓延惡化；另一方面為治療魚病打下基礎(chǔ)，因為優(yōu)質(zhì)配合飼料和科學(xué)投喂方法能增強魚類對疾病的抵抗能力。

軍曹魚稚魚爆發(fā)綜合癥是非常罕見的，目前還沒有特效藥。據(jù)報道，利用赤點石斑魚神經(jīng)壞死病毒衣殼蛋白基因重組蛋白制成疫苗，通過腹腔注射免疫魚有顯著的免疫保護效應(yīng)，可預(yù)防神經(jīng)壞死病毒感染。然而，對軍曹魚疫苗的研究是當前研究的課題，有許多問題尚待解決。

我們利用中西醫(yī)結(jié)合治療軍曹魚綜合癥所述用藥的主要根據(jù)：①聚維酮碘可通過逐漸分解出游離碘（其中80%～90%的結(jié)合碘可解聚成游離碘）而發(fā)揮殺菌作用，直接使病原體內(nèi)的蛋白質(zhì)變性、沉淀，以致病原體細胞死亡，從而達到高效消毒殺菌的目的。其特點是強力殺菌，毒性低，且為廣譜殺菌劑，能殺死病毒、細菌、芽孢、真菌及原蟲；②高錳酸鉀具有強氧化性，可促使細菌或其它有機物立即放出新生態(tài)氧，通過氧化細菌體內(nèi)的活性基因而發(fā)揮殺滅細菌作用，對殺滅原蟲類、單殖吸蟲類和錨頭蚤等寄生蟲有顯著效果，其毒性小、副作用小、用量??；③病毒靈（嗎啉啡雙胍，ABOB）對DNA病毒(腺病毒)和RNA病毒(?？刹《炯傲鞲屑仔筒《?均具有明顯抑制作用，能阻礙病毒脫氧核糖核酸的合成，從而抑制病毒的增殖，用于預(yù)防水產(chǎn)動物病毒性疾病，對多種病毒都有效；④板藍根具有抗菌、抗病毒、抗鉤端螺旋體、解毒、提高免疫力、抗腫瘤和白血病等功能；⑤穿心蓮具有抗菌、抗病毒等作用，且無毒性和副作用。

根據(jù)藥物的特性，聚維酮碘不僅可用于養(yǎng)殖水體消毒，還可拌于飼料投喂，殺滅魚體內(nèi)、外的病菌；穿心蓮具有清熱解毒、消炎、殺菌、消腫止痛等作用；板藍根可提高魚細胞分泌干擾素、提高免疫細胞及肝臟網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬作用的功效，因而能有效地抑制病毒的復(fù)制。3者結(jié)合使用對病菌病毒的抑制、撲殺效果很好。用中草藥治療魚病，不僅綠色環(huán)保，對魚體的毒副作用小、殘留量低，還能全面調(diào)節(jié)魚體的生理功能，兼具營養(yǎng)與藥物的雙重作用。因此，上述綜合療法能迅速控制并治愈爆發(fā)的軍曹魚稚魚綜合癥，取得非常理想的效果。

（參考文獻38篇，刊略，需者可函索）