■陳憶鳳 曹婷婷 張 麗 鄒思思

（1.江蘇天福萊集團(tuán)有限公司，江蘇連云港 222062；2.淮海工學(xué)院，江蘇連云港 222005）

傳統(tǒng)代謝模型認(rèn)為蛋白質(zhì)必須水解成氨基酸后才能被吸收利用，飼料中氨基酸比例符合理想蛋白質(zhì)模型就能獲得最大的營(yíng)養(yǎng)效果。但是現(xiàn)代研究認(rèn)為，蛋白質(zhì)在動(dòng)物消化酶作用下的水解終產(chǎn)物大部分是由2個(gè)或3個(gè)氨基酸殘基組成的小肽，它們以完整形式被吸收進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)而被組織利用[1]。小肽一般是指二肽或三肽，小肽飼料就是通過(guò)化學(xué)或生物方法將本來(lái)不適合動(dòng)物利用的蛋白原料分解，制成含有大量小肽的飼料產(chǎn)品[1]。肽營(yíng)養(yǎng)作用的新認(rèn)識(shí)是蛋白質(zhì)在酶解過(guò)程中可以產(chǎn)生一些具有特殊生理功能的生物活性肽。這些生物活性肽在調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗高血壓、抗菌、抗血栓、抗病毒、抗癌、清除自由基和促進(jìn)礦物元素吸收等方面發(fā)揮著重要作用[2]。

小肽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值在于小肽的吸收優(yōu)勢(shì)和其自身的質(zhì)量。小肽作為蛋白質(zhì)的主要消化產(chǎn)物，在氨基酸消化、吸收以及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝中起著重要的作用。小肽飼料是一種功能營(yíng)養(yǎng)性添加劑，也稱為小肽營(yíng)養(yǎng)素。小肽能完整地通過(guò)腸黏膜細(xì)胞進(jìn)入體循環(huán)，小肽的吸收具有轉(zhuǎn)運(yùn)速度快、耗能低、載體不易飽和等優(yōu)點(diǎn)，且各種肽之間轉(zhuǎn)運(yùn)無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性與抑制性[1]。小肽的營(yíng)養(yǎng)作用已被越來(lái)越多的人們所重視，小肽在飼料工業(yè)中的應(yīng)用對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)速度、提高機(jī)體免疫力、改善飼料的適口性，促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的攝食量，提高飼料轉(zhuǎn)化率，降低飼料成本，減少資源浪費(fèi)等方面具有十分重要的作用[3]。

海洋捕撈小雜魚(yú)[4]包括蝦唬魚(yú)、拔頭魚(yú)、鶴針魚(yú)、海龍魚(yú)、鳀魚(yú)等，其胰液中含有降解主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的各種酶類，具有小雜魚(yú)消化食物最主要、消化力最強(qiáng)的酶系，其活性高低與動(dòng)物的消化機(jī)能直接相關(guān)。小雜魚(yú)的內(nèi)源酶包括蛋白酶、淀粉酶、糖化酶和脂肪酶等，魚(yú)體蛋白酶包括胰蛋白酶、胃蛋白酶和少量腸道蛋白酶，而其中的胰蛋白酶又為小雜魚(yú)體內(nèi)存在的主要酶。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外內(nèi)源酶的研究主要集中在對(duì)植源性小肽[5-6]和醫(yī)學(xué)方面的研究，也有少量動(dòng)物源性小肽的研究，但是由于研究對(duì)象均為單獨(dú)個(gè)體，大規(guī)模生產(chǎn)中原料來(lái)源不充足甚至困難，所以都無(wú)法在實(shí)踐上實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的目標(biāo)，且沒(méi)有統(tǒng)一、規(guī)范的簡(jiǎn)便方法來(lái)測(cè)定小肽含量。利用海洋低值魚(yú)內(nèi)源酶自體酶解得到小肽的研究幾乎沒(méi)有，且尚無(wú)大規(guī)模生產(chǎn)的報(bào)道。胰蛋白酶是內(nèi)源蛋白酶酶解制備小肽的主要酶系，本研究通過(guò)研究海洋低值魚(yú)內(nèi)源酶最佳酶解條件，尋求低成本、高效益的小肽生產(chǎn)工藝條件，同時(shí)得到氨基酸生產(chǎn)的工藝條件。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 材料與方法(凱氏定氮法[7])

1.1.1 設(shè)備與試劑

設(shè)備包括：蛋白質(zhì)消化爐（上海纖檢儀器有限公司）、蛋白質(zhì)蒸餾儀（上海纖檢儀器有限公司）、恒溫干燥箱（吳江諾陽(yáng)電熱設(shè)備廠）、電子分析天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）。

試劑包括：硫酸（99%）、硫酸銅（固體粉末）、硫酸鉀（固體粉末）、氫氧化鈉(40%)、硼酸(2%)、混合指示劑[（溴甲酚綠的0.1%乙醇溶液的體積）∶（甲基紅0.2%乙醇溶液的體積）=3∶1]、鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.02 mol/l）。

①福林酚試劑的制備：同常規(guī)方法。實(shí)際使用溶液：1份福林試劑與2份水混合，搖勻。

② Britton-Robinson廣泛緩沖液的配制：取2.71 ml正磷酸，2.36 ml冰乙酸，2.47 g硼酸，加蒸餾水定容至1 000 ml。取100 ml該溶液與0.2 mol/l的NaOH溶液混合，所得溶液的pH值和所需NaOH溶液的體積如表1所示。

表1 B-R緩沖液的配制

③1%酪素溶液的配制：同常規(guī)方法，此溶液在冰箱內(nèi)貯存，有效期為3 d。

④ 100 μg/ml L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：同常規(guī)方法。

1.1.2 試驗(yàn)方法

1.1.2.1 試樣的消化

試樣為液體時(shí)，用移液管吸取試樣15 ml放入消化瓶中，加入6.4 g催化劑，與試樣混合均勻，再加入12 ml硫酸，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2 h。

試樣為固體時(shí)，稱取試樣0.5～1 g，準(zhǔn)確至0.000 2 g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4 g催化劑，與試樣混合均勻，再加入12 ml硫酸，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2 h。

1.1.2.2 氨的蒸餾（常量蒸餾法）

將試樣消煮液冷卻，加入30 ml蒸餾水，搖勻，冷卻。將蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有25 ml硼酸吸收液和2滴指示劑的錐形瓶，使溶液混勻后再加熱蒸餾，直至流出液體積接近150 ml。降下錐形瓶，使冷凝管末端離開(kāi)液面，繼續(xù)蒸餾1～2 min，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶?jī)?nèi)，然后停止蒸餾。

1.1.2.3 滴定

吸收液立即用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)色變成灰紅色為終點(diǎn)。

1.1.3 數(shù)據(jù)計(jì)算

式中：X——樣品中蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)；

V2——滴定試樣時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積(ml)；

V1——滴定空白時(shí)所需標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(ml)；

C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mol/l)；

M——試樣質(zhì)量(g)；

V——試樣分解液總體積(ml)；

V3——試樣分解液蒸餾用體積(ml)；

0.014——每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)；

6.25——氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。

1.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

① L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制見(jiàn)表2。

表2 L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

②分別取上述溶液各1.00 ml，各加0.4 mol/l碳酸鈉溶液5.00 ml，福林試劑使用溶液1.00 ml，置于(40±0.5)℃水浴中顯色20 min，取出置于10 mm比色皿中，用分光光度計(jì)于波長(zhǎng)680 nm，以不含酪氨酸的0管為空白，分別測(cè)定其吸光度(A680)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，酪氨酸的濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（此線應(yīng)通過(guò)零點(diǎn)）。

根據(jù)作圖或回歸方程，計(jì)算出當(dāng)吸光度為1時(shí)的酪氨酸的量（μg），即為吸光度常數(shù)K的值，K值應(yīng)在95～100范圍內(nèi)。

1.1.5 內(nèi)源蛋白酶的酶活測(cè)定

①酶液的制備

小魚(yú)20 g加入4倍預(yù)冷的蒸餾水?勻漿?靜置15 min?4 000 r/min離心20 min?取上清液5 ml，用0.03 mol/l CaCl2溶液定容至25 ml?靜置15 min?取1 ml，加入預(yù)冷的適宜pH值的廣泛緩沖液定容至50 ml，為待測(cè)酶樣液。

②吸光度測(cè)定

先將酪素溶液放入（40±0.5）℃恒溫水浴中，預(yù)熱5 min。用10 mm比色皿于680 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。

式中：X——樣品的酶活力（U/g或U/ml）；

A——樣品平行試驗(yàn)的平均吸光度；

K——吸光常數(shù)；

4——反應(yīng)試劑的總體積（ml）；

10——反應(yīng)時(shí)間以10 min計(jì)；

n——稀釋倍數(shù)。

1.2 氨態(tài)氮含量試驗(yàn)的材料和方法[8]

1.2.1 試劑和設(shè)備

試劑包括甲醛溶液（37%～40%）、0.05 mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

設(shè)備包括酸度計(jì)（PHs-2F數(shù)字pH計(jì)）、磁力攪拌（CJJ-931磁力攪拌器）、HH數(shù)顯恒溫水浴鍋、FS-1高速勻漿機(jī)、FA1604分析天平。

1.2.2 試驗(yàn)方法

準(zhǔn)確吸取5.0 ml小雜魚(yú)酶解混合物，置于100 ml容量瓶中，加水定容至100 ml，混勻。吸取20.00 ml上述樣品稀釋液于200 ml燒杯中，加水60 ml混勻，開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器，用0.05 mol/l NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示pH值8.2，再加入10.00 ml甲醛溶液，然后繼續(xù)滴定至酸度計(jì)指示pH值9.2，記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(V1)。

取80 ml水，在同樣條件下做試劑空白試驗(yàn)，記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（V0）。

1.2.3 計(jì)算方法

X(%)=[(V1-V0)×C×0.014]/5×(V/100)×100。

式中：X——樣品中氨基酸態(tài)氮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)；

V——測(cè)定時(shí)吸取樣品稀釋液體積(ml)；

C——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mol/l)。

2 結(jié)果與分析

2.1 內(nèi)源蛋白酶酶活的測(cè)定

2.1.1福林酚法測(cè)定內(nèi)源酶酶活測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)及酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表3及圖1（吸光度常數(shù)K值為96.9）。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

圖1 L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.2 氯化鈣對(duì)內(nèi)源酶酶活測(cè)定結(jié)果的影響

氯化鈣中的鈣離子是某些酶的激活劑，試驗(yàn)中添加氯化鈣溶液對(duì)內(nèi)源酶起到了一定的激活作用，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.2 內(nèi)源酶作用pH值和溫度范圍的初步確定

2.2.1 內(nèi)源酶作用pH值的初步確定

在不同的pH值條件下，內(nèi)源酶酶活的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 內(nèi)源酶作用pH值的初步確定

由圖2可知，當(dāng)pH值在6.5～8.5范圍內(nèi)變化時(shí)，內(nèi)源酶的酶活力比較高。

2.2.2 內(nèi)源酶作用溫度的初步確定

在不同的溫度條件下，內(nèi)源酶酶活的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 內(nèi)源酶作用溫度的初步確定

由圖3可知，當(dāng)溫度在45～65℃范圍內(nèi)變化時(shí)，內(nèi)源酶的酶活力比較高。

2.3 單因素試驗(yàn)

海洋低值魚(yú)酶解后將產(chǎn)生氨基酸、小肽、部分蛋白質(zhì)。以TCA可溶性氮含量為指標(biāo)，進(jìn)行小肽產(chǎn)品單因素試驗(yàn)，確定小肽的最佳酶解條件，同時(shí)以氨態(tài)氮含量為指標(biāo)，進(jìn)行氨基酸產(chǎn)品單因素試驗(yàn)，確定氨基酸產(chǎn)品酶解條件，即單因素試驗(yàn)1：優(yōu)化酶解得到小肽產(chǎn)品的條件。單因素試驗(yàn)2：優(yōu)化酶解得到氨基酸產(chǎn)品的條件。

2.3.1 單因素試驗(yàn)1（優(yōu)化酶解得到小肽產(chǎn)品的條件）

2.3.1.1 最適溫度

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、pH值為7.0、酶解時(shí)間3 h。在不同的溫度下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定TCA可溶性氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 不同溫度條件下TCA可溶性氮含量

由圖4可知，TCA可溶性氮含量在60℃時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，但隨著溫度的繼續(xù)升高，其含量呈下降趨勢(shì)。這是因?yàn)樵谝欢ǖ臏囟确秶鷥?nèi)，溫度升高有利于加速酶的催化反應(yīng)，而當(dāng)溫度超過(guò)最適溫度時(shí)，有一部分內(nèi)源酶會(huì)發(fā)生變性，酶活力反而下降。

2.3.1.2 最適pH值

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、溫度60℃、酶解時(shí)間3 h。在不同的pH值下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定TCA可溶性氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 不同pH值條件下TCA可溶性氮含量

由圖5可知，在最適溫度60℃下，隨著pH值的增大，TCA可溶性氮含量升高，但到7.5后開(kāi)始下降。這是因?yàn)閜H值影響了底物的解離狀態(tài)，或者使底物不能和酶結(jié)合，或者結(jié)合后不能生成產(chǎn)物，從而導(dǎo)致酶的活性降低，即蛋白質(zhì)的水解度降低，TCA可溶性氮含量減少。根據(jù)數(shù)據(jù)和圖表，可知TCA可溶性氮含量的最適pH值范圍為7～7.5。

2.3.1.3 最適時(shí)間

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、溫度60℃、pH值為7.5。在不同的時(shí)間下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定TCA可溶性氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 不同時(shí)間條件下TCA可溶性氮含量

由圖6可知，當(dāng)酶解時(shí)間為2 h時(shí)，TCA可溶性氮的含量最高。隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，水解液中可溶性氮的含量也在增加，它們會(huì)與未水解的小雜魚(yú)魚(yú)肉蛋白底物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶，蛋白質(zhì)的水解程度會(huì)降低，TCA可溶性氮的含量也相應(yīng)減少。

2.3.1.4 最佳固液比

試驗(yàn)條件：溫度60℃、pH值為7.5、酶解時(shí)間2 h。在不同的固液比下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定TCA可溶性氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖7 不同底物濃度條件下TCA可溶性氮含量

由圖7可知，在其它的最適條件下，當(dāng)固液比為1∶3時(shí)，TCA可溶性氮含量達(dá)到最高。隨著底物濃度變小，TCA可溶性氮含量有所下降?？紤]到實(shí)際生產(chǎn)中加水量越多，生產(chǎn)成本相應(yīng)越高，選取固液比為1∶3。此時(shí)，酶與底物反應(yīng)時(shí)的比例也是比較適宜的，有利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行，得到的小肽含量也就相應(yīng)更多。

2.3.2 單因素試驗(yàn)2（優(yōu)化酶解得到氨基酸產(chǎn)品的條件）

2.3.2.1 最適溫度

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、pH值為7.0、酶解時(shí)間3 h。在不同的溫度下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定氨態(tài)氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖8。

由圖8可知，當(dāng)溫度為55℃時(shí)，氨態(tài)氮含量最高。隨著溫度的繼續(xù)升高，氨態(tài)氮含量下降。

2.3.2.2 最適pH值

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、溫度55℃、酶解時(shí)間3 h。在不同的pH值下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定氨態(tài)氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖9。

由圖9可知，在最適溫度為55℃時(shí)，氨態(tài)氮含量在pH值為7時(shí)達(dá)到最大，隨后又下降。氨態(tài)氮含量的最適pH值范圍為6.5～7.5。

圖9 不同pH值條件下氨態(tài)氮含量

2.3.2.3 最適時(shí)間

試驗(yàn)條件：20 g小雜魚(yú)+80 ml水、溫度55℃、pH值為7.0。在不同的時(shí)間下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定氨態(tài)氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖10。

圖10 不同時(shí)間條件下氨態(tài)氮含量

由圖10可知，在時(shí)間為3 h時(shí)，氨態(tài)氮含量增大的趨勢(shì)接近平穩(wěn)。所測(cè)數(shù)據(jù)表明，酶解得到氨態(tài)氮含量的最適時(shí)間為3～4 h。

2.3.2.4 最適固液比

試驗(yàn)條件：溫度55℃、pH值為7.0、酶解時(shí)間3 h。在不同的固液比下，進(jìn)行小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解試驗(yàn)，測(cè)定氨態(tài)氮含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖11。

圖11 不同底物濃度條件下氨態(tài)氮含量

由圖11可知，當(dāng)固液比為1∶3時(shí)，氨態(tài)氮含量達(dá)到最高。隨著底物濃度變稀，其含量有下降趨勢(shì)?？紤]到實(shí)際生產(chǎn)中加水量越多，生產(chǎn)成本相應(yīng)越高，選取固液比為1∶3是比較適合的。

2.4 正交試驗(yàn)

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取溫度、時(shí)間、pH值、底物濃度為因素,各取3水平，以TCA可溶性氮含量和氨態(tài)氮含量為指標(biāo)，分別進(jìn)行正交試驗(yàn)[9]。

2.4.1 小肽產(chǎn)品正交試驗(yàn)

小肽產(chǎn)品因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表5，小肽產(chǎn)品正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。

表5 小肽產(chǎn)品因素水平設(shè)計(jì)

表6 小肽產(chǎn)品正交試驗(yàn)結(jié)果

由極差R值可知：D＞B＞A＞C，即底物濃度為最重要影響因素，溫度和pH值次之，時(shí)間為最小影響因素。從正交試驗(yàn)結(jié)果可知：最佳的酶解條件為A1B1C1D1，即pH值7、溫度55 ℃、時(shí)間1 h、固液比1∶2，此組合所測(cè)定的可溶性氮含量數(shù)值也最高（0.361 g/100 ml）。

2.4.2 氨基酸產(chǎn)品正交試驗(yàn)

氨基酸產(chǎn)品因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表7，氨基酸產(chǎn)品正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8。

表7 氨基酸產(chǎn)品因素水平設(shè)計(jì)

由極差R值可知：D＞B＞A＞C，即底物濃度為最重要影響因素，溫度和pH值次之，時(shí)間為最小影響因素。從正交試驗(yàn)結(jié)果可知：最佳的酶解條件為A1B2C3D1，即pH值6.5、溫度55 ℃、時(shí)間3.5 h、固液比1∶2。

表8 氨基酸產(chǎn)品正交試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)對(duì)海洋捕撈小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶活的測(cè)定進(jìn)行了分析，并利用內(nèi)源蛋白酶對(duì)小雜魚(yú)酶解條件進(jìn)行了研究。由試驗(yàn)可知：

①氯化鈣中的鈣離子是某些酶的激活劑，所以添加氯化鈣溶液對(duì)內(nèi)源酶起到了一定的激活作用，由試驗(yàn)結(jié)果可知，用0.03 mol/l的氯化鈣溶液激活內(nèi)源酶，效果最好。

②通過(guò)正交試驗(yàn)對(duì)海洋捕撈小雜魚(yú)內(nèi)源蛋白酶酶解工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，確定了小肽和氨基酸產(chǎn)品最佳酶解工藝條件。

小肽產(chǎn)品的最佳酶解工藝條件：最佳酶解溫度55℃、最佳酶解時(shí)間1 h、最佳pH值7.0、最佳固液比1∶2；氨基酸產(chǎn)品的最佳酶解工藝條件：最佳酶解溫度55℃、最佳酶解時(shí)間3.5 h、最佳pH值6.5、最佳固液比1∶2。

與之前的獨(dú)立的試驗(yàn)用海洋低值魚(yú)的最佳工藝條件試驗(yàn)數(shù)據(jù)相比，胰蛋白酶酶解獲得的小肽產(chǎn)品的最佳酶解時(shí)間是3～4 h，而本試驗(yàn)用內(nèi)源酶來(lái)酶解時(shí)，獲得的小肽產(chǎn)品的最佳酶解時(shí)間1 h，最佳反應(yīng)時(shí)間大大縮短，兩者的其它最佳酶解條件基本一致。從經(jīng)濟(jì)成本考慮，用胰蛋白酶來(lái)酶解，經(jīng)濟(jì)成本較高，而用小雜魚(yú)自身的內(nèi)源酶系來(lái)酶解，可以節(jié)約成本，而且酶解所需的溫度和固液比也符合生產(chǎn)要求。

本研究結(jié)果完全符合本課題的最初要求，工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，便于操作，提高飼料廠場(chǎng)地利用率，縮短小肽制備時(shí)間，并利于現(xiàn)代化管理與控制，提高勞動(dòng)生產(chǎn)率，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。