李艷玲，侯 王月，牛 超，虞立霞，程義勇，洪 燕△

（1.天津市中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院營養(yǎng)科，天津300193；2.軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所，天津300050）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸代謝過程中的重要中間產(chǎn)物。近年來大量的流行病學調(diào)查、臨床和基礎研究表明，高同型半胱氨酸血癥與某些神經(jīng)精神疾患如阿爾茨海默病、帕金森病、抑郁癥及認知障礙等疾病的發(fā)病、發(fā)展和預后存在一定的聯(lián)系。多項研究表明老年癡呆患者血漿的Hcy水平明顯高于對照組［1］，但AD患者的Hcy水平與認知功能的相關性尚需研究資料證實。本研究通過臨床研究觀察AD患者和對照組血清Hcy和葉酸的水平，明確Hcy水平與認知功能的相關性，為探討Hcy在AD發(fā)病中的作用提供了科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例來源

在天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，選擇符合美國精神障礙診斷統(tǒng)計手冊第4版 （DSM-IV）和美國國立神經(jīng)和語言障礙和卒中——老年性癡呆及相關疾病學會（NINCDS-ADRDA）診斷標準患有AD的患者36例，頭顱 CT和／或 MRI顯示腦室擴大，腦裂、腦溝增寬，顳葉海馬萎縮，并排除其他可致認知功能障礙的器質(zhì)性疾病及功能性精神障礙。對照組32例選擇年齡、性別盡量與病例組匹配且無癡呆的老年人。凡正在或1個月內(nèi)服用過B族維生素、葉酸以及合并嚴重肝腎功能異常、有感染征象及免疫性疾病和惡性腫瘤等者均予以排除。兩組應在年齡、性別構成比，合并高血壓、糖尿病、高脂血癥、冠心病、腦卒中以及吸煙、肝腎功能等方面差異均無顯著性。所有入選者對測試均知情同意。對受試者進行認知功能檢測，同時測定血漿中Hcy及葉酸水平。比較AD患者和對照組的Hcy及葉酸水平，對AD組受試者血漿Hcy水平與認知功能障礙程度進行相關性分析。對受試者或其家屬進行膳食調(diào)查，依據(jù)食物調(diào)查表觀察和計算葉酸的攝入量是否與AD的發(fā)生有關。

1.2 認知功能檢測

認知功能障礙評定采用簡易智力狀態(tài)檢查量表（mini－mental state examination，MMSE），癡呆程度評定根據(jù)臨床癡呆評定量表（clinical dementia rating scale，CDR）。

1.3 膳食調(diào)查

膳食調(diào)查采用三天24 h回顧法，資料采集直接通過患者或在其家屬協(xié)助下完成。結合中國食物成分表（2002）中各類食物葉酸的含量，計算受試者的葉酸攝入量。

1.4 血清Hcy水平檢測

采用酶轉化法測定血清中Hcy的總濃度。檢測時先用1，4二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DDT）將氧化態(tài)的Hcy還原，再用基因重組甲硫氨酸分解酶（methioineγ-lyase）將 Hcy反應生成硫化氫（H2S），氨（ammonia）和酮基丁酸（2-ketobutyrate），形成的硫化氫再與適當呈色劑反應形成可測量的熒光化合物。這種熒光物質(zhì)在660 nm刺激后可在710 nm處放出熒光。其定量線性范圍介于 1μmol／L和 100μmol／L之間。具體檢測步驟按照試劑盒的要求進行。Hcy檢測試劑盒和OP-162 Hcy熒光專用檢測儀為上海杏恩生物科技公司產(chǎn)品。血清Hcy正常值是5～15 μmol／L，高于此值為高同型半胱氨酸血癥。

1.5 血清葉酸含量的檢測

血清樣品按照美國DPC公司的電化學發(fā)光免疫法檢測試劑盒中的說明書進行檢測。向預先準備的試管中分別加入200μl校正、質(zhì)控或檢測樣本。向所有試管中加入1 000μl的工作液，旋轉混勻。松開所有試管蓋，將所有試管放入沸騰水?。?00℃）內(nèi)15～20 min。從100℃水浴箱中取出所有試管，放入室溫水浴箱內(nèi)冷卻5 min。向IMMULITE樣本杯加入至少350μl經(jīng)處理的樣本，用美國DPC公司IMMULITE 1000電化學發(fā)光分析儀檢測。

1.6 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，應用SPSS 10.0軟件對計量資料進行方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組血清同型半胱氨酸、葉酸水平比較

結果顯示，AD患者血清Hcy水平顯著高于對照組，AD組有23例（64%）病人有高同型半胱氨酸血癥（Hhcy），對照組 7例（22%），經(jīng)χ2檢驗兩組有統(tǒng)計學意義，血清和膳食葉酸水平顯著低于對照組（P＜0.05，表 1）。

Tab.1 Concentration of Hcy and folate in serum and folate in diet（±s）

Tab.1 Concentration of Hcy and folate in serum and folate in diet（±s）

Hcy：Homocysteine；Hhcy：Hyperhomocysteinemia number of all subjects；FA：Folate*P＜0.05 vs Control

Group n Hcy（μmol／L）Hhcy n（%） FA（μg／L） FA（μg／d ）Control 32 12.38±4.25 7（22） 7.92±2.22 259.74±41.92 AD 36 17.51±5.62*23（64）*5.17±1.76*206.94±44.51*

2.2 AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值的相關性

圖1所示，AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值呈顯著正相關性。

Fig.1 Correlation plots of serum Hcy concentrations and CDR

2.3 AD組受試者血清Hcy水平與MMSE分值的相關性

圖2所示，AD組受試者血清Hcy水平與MMSE分值呈顯著負相關性。

Fig.2 Correlation plots of serum Hcy concentrations and MMSE

3 討論

Hcy是營養(yǎng)必需氨基酸蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物。Hcy的代謝途徑主要有兩條：一是以維生素B12為輔酶，在蛋氨酸合成酶（methionine synthase，MS）、N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）的作用下再甲基化形成蛋氨酸；二是以維生素B6為輔酶在胱硫醚β-合成酶（cystathionine beta-synthase，CBS）的作用下合成胱硫醚。血漿 Hcy的正常值是 5～15μmol／L［2］。血漿的Hcy水平高于此值稱為高同型半胱氨酸血癥，遺傳和后天的多種因素都可導致高同型半胱氨酸血癥。

1976年Wilcken等通過流行病學調(diào)查最先提出Hcy是心腦血管病的一個獨立危險因素，近年來又有研究表明，高同型半胱氨酸血癥與某些神經(jīng)心理疾患如 AD、帕金森病（Parkinson’s disease，PD）、抑郁癥及認知障礙等疾病的發(fā)病、發(fā)展和預后有一定的聯(lián)系。1992年，Bell等首次在一組急性抑郁癥發(fā)作的老年患者中發(fā)現(xiàn)血漿Hcy濃度與認知功能呈顯著負相關［3］。1996年Riggs等報道，在68例58歲及以上的觀察對象中，血漿Hcy濃度與空間模仿技巧呈負相關關系［4］；Den Heijer等（2003）研究了 1077名年齡60～90歲受試者血漿Hcy水平與其腦組織萎縮程度的關系，結果顯示，血漿Hcy水平較高者，大腦皮層和左右兩側海馬的萎縮程度也較高，為Hcy與阿爾茨海默病發(fā)病之間的關系提供了另一有利證據(jù)［5］。Mizrahi等（2004）檢測了 79例 AD患者和 156例健康對照者血漿Hcy、維生素B12和葉酸水平，在校正年齡、性別和吸煙后發(fā)現(xiàn)，AD患者Hcy水平顯著高于對照組，而葉酸和維生素B12并無顯著差異，提示認知功能減退可能是高Hcy血癥直接引起［6］。近年 Kim（2008）、Sung（2009）和 Abderrahim（2010）［7］等的研究顯示，Hcy水平升高與認知功能損傷存在密切聯(lián)系。

葉酸是Hcy代謝過程中的重要輔助因子，影響血漿Hcy水平的因素眾多，但幾無例外，都是通過影響其代謝途徑而起作用的，血漿葉酸水平可能是眾多因素中對血漿Hcy水平影響最大的因素之一。業(yè)已證明血漿Hcy水平與葉酸水平呈負相關，高同型半胱氨酸血癥者較非高同型半胱氨酸血癥者血漿葉酸水顯著降低。Sturat（2004）［8］的 Meta分析表明，相對維生素B12、維生素B6、維生素B2等B族維生素而言，葉酸降低血漿Hcy的能力最強，每日補充0.5～5.0 mg可使血漿 Hcy濃度平均下降約 25%。Tanne（2004）［9］通過對大量的臨床葉酸干預實驗Meta分析后預測，每日攝入200μg的葉酸可使血漿Hcy平均降低4μmol／L，使美國每年死于心血管疾病的患者減少 13 500～50 000人。嚴江濤（2004）［10］等對220例中老年人血漿Hcy及葉酸進行檢測分析以探討它們之間的關系，進而對35例高同型半胱氨酸血癥病人給予口服葉酸治療觀察，結果高同型半胱氨酸血癥組的血漿葉酸水平顯著低于正常組；在血漿葉酸水平低于6μg／L時，高同型半胱氨酸血癥發(fā)生率明顯高于其它組，口服葉酸可以顯著降低血漿Hcy水平。由此可見血漿Hcy水平升高與機體葉酸水平有關，增加富含葉酸的飲食攝入有助于血漿Hcy水平恢復正常。

本研究結果顯示，AD患者血清Hcy水平顯著高于對照組，AD組受試者血清Hcy水平與CDR分值呈顯著正相關，與MMSE分值呈顯著負相關。結果還表明血清和膳食葉酸水平顯著低于對照組。老年人由于機體各器官代謝功能減退，胃腸道消化吸收能力降低、食欲不好、長期進食少以及某些疾病等原因引起偏食、厭食、挑食，或者是由于生活習慣等原因，容易發(fā)生維生素缺乏，所以葉酸缺乏可能是老年人Hcy水平升高進而導致AD發(fā)生的重要原因。

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