劉 丹，張子凡，徐海燕

慢性腦缺血指各種原因?qū)е麓竽X出現(xiàn)慢性的廣泛的腦血流灌注不足，從而引起一系列腦循環(huán)功能障礙的慢性疾病，臨床上以持久或進展性認知功能與神經(jīng)功能障礙為主。有研究表明氧化應(yīng)激損傷是引起慢性腦缺血損傷的重要病理機制之一［1］。本研究通過制備慢性腦缺血大鼠模型，并在早期與造模成功后予以督脈電針干預(yù)，以探討督脈電針對慢性腦缺血大鼠腦組織中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的影響。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 生物醫(yī)學(xué)顯微鏡（南京醫(yī)學(xué)顯微鏡廠），MDFU50V型低溫冰箱（日本三洋），微量加樣器（上海求精生化試劑儀器有限公司），DGX-9143B-1電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海?，攲嶒炘O(shè)備有限公司），MDA、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所），LD4-ZA型低速離心機（北京醫(yī)用離心機廠），Kwd-808脈沖電療儀。

1.2 實驗動物與分組 選用健康雄性Wister大鼠60只，3月～4月齡，體質(zhì)量（180±10）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。隨機將大鼠分為正常組、模型組、立即針刺組、針刺治療組，共4組，每組又分為術(shù)后1個月、2個月、3個月等3個亞組，每組各5只。

1.3 動物模型的制備 采用大鼠分次永久性雙側(cè)頸總動脈阻塞（2VO）法制備慢性腦缺血大鼠模型：大鼠術(shù)前12 h禁食，4 h禁水。用10%水合氯醛（0.3 m L／100 g～0.35 m L／100 g）腹腔注射麻醉，仰臥位固定，頸部去毛消毒后正中切開，鈍性分離出一側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)。用4號絲線雙重結(jié)扎一側(cè)頸總動脈，縫合，切口內(nèi)注32×104U／m L青霉素注射液0.2 m L預(yù)防感染。該側(cè)結(jié)扎后間隔1周，第2次手術(shù)行另一側(cè)結(jié)扎。手術(shù)過程中通過白熾燈照射使其肛溫保持在37℃～38℃，以避免低溫對腦缺血的保護作用。術(shù)后3周慢性腦缺血模型制備成功。

1.4 穴位的選擇及操作 大鼠的取穴標準及針刺方法參照《實驗針灸學(xué)》及《大鼠穴位圖譜》，選取神庭穴、百會穴為一組（神庭穴接正極、百會穴接負極）；風(fēng)府穴、大椎穴為一組（風(fēng)府穴接正極、大椎穴接負極）。立即針刺組從首次造模開始即行督脈電針，接上電療儀，采用持續(xù)脈沖電流，頻率2 Hz，強度2 m A，輸出強度以頭部出現(xiàn)輕微抖動為度，針刺時間30 min，以后每天同一時間針刺1次，直至取材前最后1次。針刺治療組于造模成功3周開始督脈電針干預(yù)，每天1次，直至取材最后1次。正常組及模型組不予以干預(yù)。

1.5 標本的收集與處理 每組大鼠均于末次進針后4 h～6 h內(nèi)，用10%水合氯醛腹腔麻醉，迅速斷頭取腦，取位于視交叉后4 mm處至小腦前的腦組織，迅速置于10%的中性甲醛中，恒溫4℃。固定4 d～6 d后，經(jīng)乙醇常規(guī)脫水，二甲苯透明，石蠟包埋備用。

1.6 MDA、SOD的檢測 取腦組織，常溫解凍，分析天平稱重后按照1∶9（W／V）加入生理鹽水，剪碎組織塊，在水浴中勻漿，在低溫離心機2 000 r／min中離心10 min，取上清液。嚴格按照試劑盒操作程序，分別采用黃嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸顯色法測定MDA和SOD活性。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差±s）表示，多組比較采用多樣本均數(shù)的方差分析，兩組間差異用成組設(shè)計的兩樣本均數(shù)比較的t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

模型組中MDA的含量明顯升高，SOD的活性明顯降低（P＜0.05）；立即針刺組和針刺治療組分別與模型組比較，均能明顯降低MDA的含量，升高SOD活性（P＜0.05）；立即針刺組與針刺治療組比較，降低MDA含量、升高SOD活性差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠不同時間點MDA、SOD含量的變化±s）

表1 各組大鼠不同時間點MDA、SOD含量的變化±s）

組別 n MDA含量（nmol／mg·prot）1個月 2個月 3個月SOD活性（U／mg·prot）1個月 2個月 3個月正常組 15 4.58±0.15 4.56±0.20 4.35±0.19 107.18±4.87 112.03±4.65 109.67±4.90模型組 15 10.82±0.111） 8.52±0.141） 6.88±0.211） 63.81±4.321） 65.23±4.711） 72.58±4.531）針刺治療組 15 6.52±0.161）2） 5.53±0.311）2） 4.96±0.181）2） 84.14±3.871）2） 86.48±4.231）2） 90.63±4.141）2）立即針刺組15 6.18±0.121）2）3） 4.97±0.261）2）3） 4.66±0.151）2）3） 91.78±4.101）2）3） 93.81±4.071）2）3） 101.31±3.921）2）3）與正常組同一時間點比較，1）P＜0.05；與模型組同一時間點比較，2）P＜0.05；與針刺治療組同一時間點比較，3）P＜0.05

3 討 論

3.1 督脈電針選穴 督脈是人體諸陽經(jīng)脈之海，統(tǒng)帥整個人體經(jīng)脈系統(tǒng)，并與腦、脊髓等關(guān)系密切。神庭穴為督脈上行之氣之所聚之處，具有寧神醒腦等功用；針灸甲乙經(jīng)謂大椎穴為三陽督脈之會，有益氣壯陽之功用；百會穴為手足三陽、督脈之會，能醒神升陽、宣閉開竅。風(fēng)府為天部風(fēng)氣的重要生發(fā)之源，具有散風(fēng)熄風(fēng)、通關(guān)開竅的功用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對督脈電針的治療也有研究證實，羅文舒等［1］研究發(fā)現(xiàn)電針任督脈經(jīng)穴對大鼠局灶性腦缺血的ERK通路起著重要的調(diào)節(jié)作用。韓肖華等［2］實驗結(jié)果表明：電針激發(fā)腦缺血大鼠神經(jīng)干細胞的表達與督脈腧穴作用密切相關(guān)。臨床以督脈經(jīng)穴為主治療慢性腦缺血療效顯著，故本實驗根據(jù)上述理論，制備慢性腦缺血大鼠模型，選取督脈經(jīng)穴為主，按照不同時間予以電針干預(yù)，以觀察督脈電針對慢性腦缺血后繼發(fā)性神經(jīng)元損傷的保護作用。

3.2 慢性腦缺血與氧化應(yīng)激損傷 慢性腦缺血為缺血性腦缺管疾病之一，通過各種原因引起長期的腦灌注不足，促使腦發(fā)生組織病理及生化改變。國內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)老年癡呆癥和腦梗死的發(fā)病前期都曾長期有慢性腦缺血的存在。目前大量研究表明慢性腦缺血的病理機制復(fù)雜，是多環(huán)節(jié)、多基因、多靶點參與的病理過程。氧化應(yīng)激損傷（oxidative stress，OS）是由自由基在體內(nèi)產(chǎn)生的一種負面作用，并被認為是引起慢性腦缺血后神經(jīng)細胞損傷的重要因素之一。自由基通過人體代謝產(chǎn)生，大量的自由基可以造成生物膜系統(tǒng)損傷以及細胞內(nèi)氧化磷酸化障礙，是人體疾病、衰老和死亡的直接參與者。慢性腦缺血時，具有異?；钚缘淖杂苫黠@增多，并通過與生物膜上的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化連鎖反應(yīng)，產(chǎn)生大量脂質(zhì)過氧化物MDA，從而破壞腦組織生物膜的結(jié)構(gòu)與功能，引起細胞破壞、死亡。同時，由于大量氧自由基的產(chǎn)生消耗了自由基清除酶（SOD），使SOD清除自由基能力下降，動態(tài)平衡被破壞，造成慢性腦缺血損傷的進一步惡化。

3.3 督脈電針對慢性腦缺后MDA、SOD變化的影響 針灸是一種可以通過多層次、多途徑、多靶點綜合作用于病理環(huán)節(jié)，且可以長期應(yīng)用無不良反應(yīng)的治療方法。針灸通過刺激某些特定穴位后，可以加快機體微循環(huán)，改善患者的血流狀態(tài)，使腦組織灌流量增加，從而改善中風(fēng)患者大腦的血氧供給［3］。電針作為針灸療法的一種輔助手段，可通過對其頻率、波形、時間的選擇來恒定針刺腧穴的刺激量，以達到穩(wěn)定提高針刺效果。駱仲達等［4］觀察到督脈電針針刺百會穴、大椎穴，可使大腦皮質(zhì)梗死區(qū)內(nèi)TUNEL染色陽性細胞顯著減少。

本研究結(jié)果顯示，同一時間組中，慢性腦缺血模型組與正常組比較MDA明顯升高，SOD明顯降低（P＜0.05），表明慢性腦缺血發(fā)生的機制可能與氧化損傷引起氧自由基含量的增多、自由基清除酶活性降低有關(guān)。兩組督脈電針干預(yù)，均可降低慢性腦缺血大鼠腦組織中MDA含量，提高SOD活性（P＜0.05），提示督脈電針能提高慢性腦缺血大鼠的抗氧化能力，抑制自由基產(chǎn)生，減輕腦組織的過氧化損傷，這可能是督脈電針對慢性腦缺血神經(jīng)保護作用的機制之一。同時，立即針刺組與針刺治療組相比，MDA降低，SOD升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明立即針刺組較針刺治療組比較能更有效的減少慢性腦缺血引起的繼發(fā)性神經(jīng)元損傷，從而達到治療疾病的目的。

［1］ 羅文舒，楊卓欣，于海波.電針任督脈經(jīng)穴對腦缺血大鼠側(cè)腦室下區(qū)ERK通路的影響［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，14（5）：3-5.

［2］ 韓肖華，黃曉琳.電針督脈腧穴對腦缺血大鼠缺血灶周圍巢蛋白表達的影響［J］.華中科技大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，39（3）：383-386.

［3］ 黃泳，賴新生.針刺百會水溝神門影響血管性癡呆患者腦區(qū)血流量的觀察［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2006，21（8）：462-464.

［4］ 駱仲達.電針督脈對缺血性腦損傷大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，21（6）：27-30.