丁晟

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

幾種嚙齒類動物高血脂實驗動物模型的建立方法

丁晟

(江西省疾病預(yù)防控制中心，江西南昌330029)

高血脂；動物模型；齒類動物

高脂血癥為終身疾病，在人群中其發(fā)病率逐年增高，目前沒有根治方法。長期高血脂，可引起機(jī)體代謝紊亂，產(chǎn)生進(jìn)行性動脈硬化，進(jìn)而導(dǎo)致心、腦、腎等重要臟器受到損害，嚴(yán)重危害健康，危及生命。探討高脂血癥的預(yù)防和治療,開發(fā)降血脂保健品和藥物,是目前國內(nèi)外的研究熱點之一,因此，選擇一個理想的高血脂動物模型是研究血脂代謝及其影響因素的關(guān)鍵。目前，動物實驗中用嚙齒類動物進(jìn)行高血脂動物模型造模較為常見,造模的方法也較多，本文擬對幾種嚙齒類動物高血脂模型的造模方法作一綜述。

1　高血脂大鼠模型

大鼠是調(diào)血脂藥物臨床前研究和保健食品功能學(xué)檢測應(yīng)用的模型動物之一[1]。Zucker曾報道自發(fā)性高脂血癥大鼠,其異常表型為遺傳性肥胖、高脂血癥、腎臟病變[2]。采用高膽固醇飼養(yǎng)動物誘發(fā)高血脂的實驗?zāi)Ｐ?已為眾多研究者所接受。飼料中增加蛋黃粉、膽鹽和豬油等對誘發(fā)動物高血脂的實驗?zāi)Ｐ陀写龠M(jìn)作用。

1.1喂飼法祁學(xué)忠[3]、李林鵬[4]、李儀奎[5]等學(xué)者均通過高膽固醇飼養(yǎng)動物建立了高血脂大鼠模型，僅在高膽固醇飼料配方和建模時間上略有不同。

1.2注射卵白蛋白法郭延松等[6]用卵白蛋白皮下注射使大鼠致敏,再腹腔注射2.5mg/kg卵白蛋白1周內(nèi)5次,發(fā)現(xiàn)無論有無高膽固醇飲食,都可以使主動脈產(chǎn)生動脈粥樣硬化(AS)。

1.3移植法切下大鼠主動脈約1.5cm,移植到另一只大鼠的腹主動脈上,一端接于腎主動脈上,另一端接于腎主動脈分叉之下,分別于10、20、30、60、90、120、150、180和360d后檢查該動脈,發(fā)現(xiàn)該模型類似人實質(zhì)性器官移植后的血管發(fā)生AS改變,可作為研究模型應(yīng)用[6]。

2　高血脂小鼠模型

小鼠用于制造高血脂動物模型，有遺傳背景清楚，易于飼養(yǎng)和管理,采樣方便等優(yōu)點。但不同品系小鼠對飼料誘發(fā)性高脂血癥和動脈粥樣硬化癥的易感性存在差異，所以模型建立也各不相同。用小鼠建立高血脂動物模型以急性、短期為其主要特點。

閆志芳等[7]利用體重(20±3g)的昆明種小鼠建立急性高血脂小鼠模型。蛋黃乳液：取市售新鮮雞蛋仔細(xì)剝離蛋黃外包膜后抽取蛋黃，用生理鹽水制成75%的蛋黃乳液備用。(1)腹腔注射蛋黃乳液造高血脂小鼠模型：小鼠腹腔注射蛋黃乳液，禁食16h，自由飲水。(2)蛋黃乳液灌胃造高血脂小鼠模型：用蛋黃乳液給小鼠灌胃，禁食16h，自由飲水。該研究結(jié)果表明，以上兩種給樣途徑均可造成小鼠急性高血脂，但采用灌胃的方法造成的小鼠高血脂模型，總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)值不穩(wěn)定，變化較大。與此相比，腹腔注射造成的小鼠高血脂模型穩(wěn)定性、重復(fù)性較好，是一種制備簡單的適合于大面積初篩降血脂藥物的高血脂動物模型。

3　高血脂兔模型

兔作為高脂血癥研究的模型動物的優(yōu)點在于高脂飼料易于誘發(fā)高膽固醇血癥,價廉且易于管理。遺傳性高膽固醇血癥家兔WHHL是已發(fā)現(xiàn)的一種家族性高膽固醇血癥的模型動物[8-10]。調(diào)節(jié)血脂藥物和抗動脈粥樣硬化藥物研究首選推薦的動物仍是兔。

3.1喂飼法唐亞輝[11]、蔣人華[12]、陶波[13]均通過喂飼法以新西蘭家兔，建立過高血脂兔模型，僅在高膽固醇飼料配方和建模時間上有差異。

3.2輻射損傷法Cottin等[14]將新西蘭大白兔經(jīng)血管內(nèi)192I的輻射,并喂以2%的高膽固醇飲食。在第2周時被輻射的動脈有局灶性的巨噬細(xì)胞內(nèi)皮下黏附及內(nèi)皮的損傷,在第6周時可觀察到血管內(nèi)AS斑塊明顯增加。

3.3注射血清法一次性靜脈注射牛血清白蛋白給日本大耳白兔,結(jié)合高脂飼料灌胃,3周后血脂水平明顯升高,6周后,除血脂繼續(xù)增高外,肉眼及鏡下均可見動脈壁有明顯的AS斑塊[15]。證明用免疫反應(yīng)損傷法和高膽固醇飼料喂養(yǎng)法結(jié)合可在短時間內(nèi)建立病理變化典型、可靠實用的AS模型。

4　基因建模

4.1顯微注射法此法是將構(gòu)建好的外源基因直接注射到受精卵的雄核中,再植入到假孕養(yǎng)母動物的輸卵管內(nèi),由此發(fā)育成個體。Robin等[16]選用C57BL/6J小鼠的受精卵,制備了攜帶完整人的載脂蛋白A1(apoA-1)的C57BL/6J小鼠,并證明了這一融合基因在肝組織獲得了更高水平表達(dá)ApoA-1基因。

4.2基因敲除法載脂蛋白E(apoE)是清除乳糜微粒和極低密度脂蛋白(VLDL)殘留物的受體的配體,缺乏apoE會引起血漿中富含膽固醇成分的殘留物的堆積,最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化。故有學(xué)者[17]根據(jù)以上假設(shè),通過將胚胎干細(xì)胞進(jìn)行基因打靶獲得缺乏apoE的自發(fā)性高膽固醇血癥的突變系小鼠。該突變小鼠血漿膽固醇濃度比正常小鼠高5倍,并且到3月齡時,其近心端動脈壁富含泡沫細(xì)胞及其產(chǎn)生的沉淀物,隨著這些自發(fā)性病變加劇,到8月齡時,可引起冠狀動脈口嚴(yán)重閉塞。顯然,該突變小鼠可用作自發(fā)性高脂血癥和動脈粥樣硬化癥研究的動物模型,對于探討遺傳與環(huán)境因素在動脈粥樣硬化發(fā)病過程所起的作用，以及藥物治療效果的研究具有重要意義。因此，根據(jù)擬研究內(nèi)容選擇有針對性建立動物高血脂模型將更有益于研究結(jié)果的實際應(yīng)用。

從大量的文獻(xiàn)可知,建立高脂血癥實驗動物模型的方法很多,但建立一種理想的高脂血癥實驗動物模型,與動物的種類、生存環(huán)境及飼養(yǎng)方法、飲食及實驗要求等因素有關(guān)。所以在實踐中,應(yīng)在綜合文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,從中選取一種省時、省力且經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定,適合本實驗室的造模方法，隨著技術(shù)水平的不斷提高，今后通過基因手段，建立高血脂動物模型是一種快速而高效的途徑。

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R-332,R589.2

A

1674-1129(2013)05-0469-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.025

丁晟，男，1972年生，碩士研究生，副主任醫(yī)師，從事疾病控制工作。