付偉偉，肖萍，馮志峰，郝興順

（漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西漢中723000）

馬鈴薯試管苗生產(chǎn)技術(shù)探索

付偉偉，肖萍*，馮志峰，郝興順

（漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西漢中723000）

為了探索簡(jiǎn)單、易行、高效的生產(chǎn)技術(shù)，本研究以馬鈴薯‘早大白’品種為試材，研究了激素濃度、接種密度、培養(yǎng)基加入量對(duì)試管苗高度及節(jié)間長(zhǎng)度的影響。結(jié)果表明：利于試管苗高度及節(jié)間長(zhǎng)度的最佳MS培養(yǎng)基為：B9濃度為5～15 mg/L、每瓶接種18株、培養(yǎng)基用量25 mL/瓶。

馬鈴薯；試管苗；生產(chǎn)技術(shù)

目前，我國(guó)很多單位在馬鈴薯脫毒試管苗生產(chǎn)方面已經(jīng)步入了規(guī)?；a(chǎn)階段，但低成本高質(zhì)量的試管苗生產(chǎn)技術(shù)及研究報(bào)道較少，尤其在簡(jiǎn)潔、實(shí)用的生產(chǎn)技術(shù)方面報(bào)道更少。生產(chǎn)中由于沒(méi)有具體的量化參數(shù)來(lái)支撐，培養(yǎng)基配制方面多依靠經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)工人靠經(jīng)驗(yàn)操作完成，常造成培養(yǎng)基配方多亂雜、培養(yǎng)基無(wú)形浪費(fèi)等問(wèn)題，為生產(chǎn)、技術(shù)交流帶來(lái)諸多不便[1,2]。為形成一套易操作、成本低、效率更高的試管苗生產(chǎn)技術(shù)，通過(guò)試驗(yàn)，確定了在MS培養(yǎng)基中加入1種激素的培養(yǎng)基配方，取得了很好的效果。為了將配方結(jié)合快繁形成一套技術(shù)體系，通過(guò)試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基制作中的一些主要因素進(jìn)行定量加入，以期找出最經(jīng)濟(jì)的試管苗培養(yǎng)方法，更好的為馬鈴薯試管苗高效生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)品種為‘早大白’，是漢中市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所莖尖脫毒后，經(jīng)農(nóng)業(yè)部脫毒馬鈴薯研究中心檢測(cè)合格的試管苗。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)用MS培養(yǎng)基，取整株苗的中間莖段，頂端和基部去掉。本試驗(yàn)的激素選用丁酰肼（B9）為生長(zhǎng)延緩劑，主要作用是控制試管苗的生長(zhǎng)高度。試驗(yàn)分為激素濃度（mg/L）、接種密度（株/瓶）、培養(yǎng)基加入量（mL）共3個(gè)試驗(yàn)因素，完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。培養(yǎng)條件為：溫度25±2℃，光照強(qiáng)度3 000 lx，每天光照培養(yǎng)14 h，黑暗培養(yǎng)10 h[3,4]。試驗(yàn)使用高度10 cm，直徑6 cm的圓柱狀玻璃瓶，培養(yǎng)25 d后分別測(cè)量其株高、節(jié)間長(zhǎng)度，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Office Excel軟件統(tǒng)計(jì)分析。每個(gè)因素不同處理水平分別轉(zhuǎn)接15瓶。激素濃度作為試驗(yàn)因素時(shí)，培養(yǎng)基中加入B9的濃度分別為5，15，25，35，45 mg/L 5個(gè)處理水平，接種密度為15株/瓶，加入培養(yǎng)基的量為25 mL/瓶。以接種密度作為試驗(yàn)因素時(shí)，接種密度設(shè)5，8，10，12，15，18株/瓶共6個(gè)水平，培養(yǎng)基量為25 mL/瓶，B9濃度為15 mg/L。以培養(yǎng)基量作為試驗(yàn)因素時(shí)，每瓶加入培養(yǎng)基的量分別為5，15，25，35，45 mL/瓶，接種密度為15株/瓶，B9濃度為15 mg/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同抑制劑濃度對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)的影響

B9濃度5 mg/L時(shí)組培苗的節(jié)間長(zhǎng)度最長(zhǎng)，平均為2.0 cm，而且試管苗整齊度較差。濃度為15～25 mg/L時(shí)節(jié)間長(zhǎng)度差異不明顯，當(dāng)濃度為35～45 mg/ L時(shí)，平均節(jié)間長(zhǎng)度最小，為0.9 cm。從株高曲線可以看出，隨著B9濃度的增加，試管苗株高逐漸下降，當(dāng)B9濃度增大到35 mg/L時(shí)，株高值就已經(jīng)很低了，平均只有3.8 cm（圖1）。說(shuō)明抑制劑濃度超過(guò)15 mg/L時(shí)就會(huì)對(duì)試管苗的高度產(chǎn)生明顯抑制，當(dāng)濃度超過(guò)15 mg/L時(shí)，由于節(jié)間距離變短，操作時(shí)就由原來(lái)一節(jié)作為一個(gè)莖段變?yōu)?～3節(jié)作為一個(gè)莖段繁殖，基礎(chǔ)苗浪費(fèi)嚴(yán)重，影響了擴(kuò)繁的效率。而當(dāng)B9濃度低于5 mg/L時(shí)則相反。結(jié)合實(shí)際操作認(rèn)為，B9濃度以不低于5 mg/L，不高于15 mg/L為宜。

2.2 接種密度對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)的影響

隨著接種密度的增加，株高和節(jié)間長(zhǎng)度并沒(méi)有相應(yīng)增加和降低的趨勢(shì)。只有5株/瓶時(shí)，平均株高和節(jié)間長(zhǎng)度值最高，原因是平均分配到每株的光照及培養(yǎng)基量的多少有關(guān)。密度在8～18株時(shí)的各個(gè)處理株高和節(jié)間長(zhǎng)度值差異較?。▓D2）。生產(chǎn)上理想的試管苗株高為5 cm即可，試驗(yàn)中每瓶接種8～18株都能滿足生產(chǎn)要求，為節(jié)約成本，可將18株作為合適的接種密度。

圖1 B9濃度對(duì)試管苗株高、節(jié)間長(zhǎng)度的影響（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)誤）Figure 1 Effects of B9concentration on height and internodal length of plantlets in vitro(Error bar represents standard error)

圖2 接種密度對(duì)試管苗株高、節(jié)間長(zhǎng)度的影響（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)誤）Figure 2 Effects of density on height and internodal length of plantlets in vitro(Error bar represents standard error)

2.3 培養(yǎng)基量對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)的影響

從圖3可看出，隨著培養(yǎng)基量的增加，試管苗高度也逐漸增加。當(dāng)培養(yǎng)基的量從5 mL增至25 mL時(shí)，株高呈現(xiàn)急劇增加趨勢(shì)，25 mL后隨著培養(yǎng)基量的增加株高值增加不明顯。培養(yǎng)基加入量在35 mL以下時(shí)，節(jié)間平均長(zhǎng)度差異不明顯，只有在45 mL時(shí)才又明顯高于其他處理。結(jié)合快繁實(shí)際認(rèn)為，25 mL/瓶是快繁培養(yǎng)基較合適的用量。

圖3 培養(yǎng)基量對(duì)試管苗株高、節(jié)間長(zhǎng)度的影響（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)誤）Figure 3 Effectsofmediumvolume on heightand internodallength ofplantlets in vitro (Error bar represents standard error)

3 討論

隨著轉(zhuǎn)接代數(shù)的逐漸增多，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基抑制劑（B9）用量有逐漸減少的趨勢(shì)，這可能和試管苗體內(nèi)抑制劑積累有關(guān)。試驗(yàn)中所用抑制劑的濃度范圍較大，為了進(jìn)一步摸清適合“早大白”品種試管苗擴(kuò)繁的最佳濃度，除應(yīng)考慮試管苗本身積累抑制劑所產(chǎn)生的抑制效應(yīng)外，還需將試驗(yàn)濃度范圍縮小后進(jìn)一步試驗(yàn)。本試驗(yàn)探索了適合‘早大白’品種快繁的B9濃度，試驗(yàn)結(jié)論與崔翠等[5]在研究其他馬鈴薯試管苗時(shí)的結(jié)論相一致。

在試管苗接種密度和接種方式上，可否將密度的最高值設(shè)為25株/瓶或更大，能否將莖段插入培養(yǎng)基的方式改為平放式以提高擴(kuò)繁速度，生長(zhǎng)速度及效率是否有所不同，需要在今后的試驗(yàn)中進(jìn)一步探索。

在試管苗生長(zhǎng)方面，除了試驗(yàn)中提到的一些因素外，還和培養(yǎng)溫度、光照強(qiáng)度、光照質(zhì)量、適當(dāng)?shù)臅円箿夭睢⒒A(chǔ)苗不同節(jié)位等方面息息相關(guān)。在抑制劑用量方面，各品種對(duì)抑制劑的反應(yīng)不同，在進(jìn)入規(guī)模生產(chǎn)前，需要對(duì)目標(biāo)品種進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)以找出適合的抑制劑濃度是十分必要的。

[1]蒙蕊學(xué),虎淑萍,楊智,等.脫毒馬鈴薯試管苗苗源保存技術(shù)[J].中國(guó)馬鈴薯,2009,23(2):117.

[2]李鵬程.馬鈴薯脫毒苗生產(chǎn)技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)科技通訊,2005(6):9.

[3]薛志和,張芳,鄭改平,等.馬鈴薯脫毒試管苗高效低成本生產(chǎn)技術(shù)[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2007(6):214-215.

[4]崔榮昌,李芝芳,吳國(guó)林,等.GB 18133-2000馬鈴薯脫毒種薯[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2000.

[5]崔翠,王季春,何鳳發(fā),等.不同MS和B9濃度對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)的研究[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,23(5):414-417.

Optimization for Production of Potato Plantlets in vitro

FU Weiwei,XIAO Ping＊,FENG Zhifeng,HAO Xingshun
(Hanzhong Agricultural Research Institute,Hanzhong,Shaanxi 723000,China)

At present,no unified standard is available in Hanzhong for the production of potato plantlets in vitro,and this leads to no parameters to follow in the production of plantlets in vitro.In order to search for simple,practical,and high efficient production technique,the potato variety'Zaodabai'was used as plant material to study the effects of plant hormone concentration,inoculated density,and medium volume on plant height and internodal length.The results indicated that MS medium supplemented with B95-15 mg/L,18 cuttings/vessel,and medium volume 25 mL/vessel were optimal for plant height andinternodallength.

Solanum tuberosum L.;plantlets in vitro;production

S532

B

1672-3635（2013）04-0212-03

2012-11-01

陜西省漢中市脫毒馬鈴薯良種繁育基地項(xiàng)目（6111300803）。

付偉偉（1979-），男，農(nóng)藝師，從事脫毒馬鈴薯脫毒及栽培技術(shù)研究。

肖萍，農(nóng)藝師，從事馬鈴薯栽培育種研究，E-mail:nykjk@126.com。