李蔥曉 宋宏曉 王天奇等

摘要：利用人工感染試驗(yàn)，研究柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株的致病性。結(jié)果表明，隨著感染劑量的提高，其死亡率上升，平均增重下降、平均病變記分提高，半數(shù)致死量（LD50）為3.248 7×104 個(gè)/只。為洛陽地區(qū)防控其柔嫩艾美耳球蟲所病提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：雞；柔嫩艾美耳球蟲；致病性

中圖分類號(hào)：S852.723 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2013）09-0011-02

雞球蟲病是由艾美耳屬球蟲中的一種或幾種寄生于雞腸道黏膜上皮引起的一種寄生性原蟲病， 以腸道損傷、下痢或血便為特點(diǎn)。它可以引起雞只死亡、發(fā)育停滯、產(chǎn)蛋減少、飼料報(bào)酬降低等，給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 球蟲病每年給全世界養(yǎng)雞業(yè)造成80 億美元的經(jīng)濟(jì)損失。世界公認(rèn)的雞艾美耳屬球蟲有7種，即柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球蟲（E.maxima）、堆形艾美耳球蟲（E.acervulina）、毒害艾美耳球蟲（E.necatrix）、布氏艾美耳球蟲（E.brunetti）、和緩艾美耳球蟲E.mitis、早熟艾美耳球蟲（E.praecox），其中柔嫩艾美球蟲分布廣泛、致病性最強(qiáng)，國(guó)內(nèi)已有31個(gè)?。ㄊ小⒆灾螀^(qū)）報(bào)道有其分布[1]。研究結(jié)果表明，不同地區(qū)之間的分離株的致病性、耐藥性及免疫原性存在一定的差異[2]。為進(jìn)一步做好洛陽地區(qū)雞球蟲病的防控工作，本試驗(yàn)研究了柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株的致病性。

1 材料與方法

1.1 球蟲卵囊

柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊由河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院寄生蟲課程組提供。該蟲株是用單卵囊分離技術(shù)分離于洛陽地區(qū)自然發(fā)病雞 ，臨用前在小公雞體內(nèi)復(fù)壯，采用反復(fù)水洗沉淀法分離，之后接種于25 g/L的重鉻酸鉀溶液中，孢子化后4保存。使用前離心除去重鉻酸鉀，將卵囊懸浮于生理鹽水中，并計(jì)數(shù)。

1.2 試驗(yàn)用雞

試驗(yàn)用雞為海蘭褐雛雞，公母各半，由洛陽市現(xiàn)代化種雞場(chǎng)提供，出殼后在嚴(yán)格消毒的鐵絲籠內(nèi)飼養(yǎng)，所用器皿經(jīng)煮沸消毒，飼喂不含任何抗球蟲藥物的全價(jià)飼料，自由采食，飲用涼開水，12日齡時(shí)用于致病性試驗(yàn)。試驗(yàn)前連續(xù)兩天檢查糞便無球蟲感染。

1.3 人工感染

將試驗(yàn)用雞逐只稱重，根據(jù)生物統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，剔除體重差異顯著的個(gè)體，逐只帶上腳號(hào)，隨機(jī)分為7組，每組 15 只，使每組雞的總體重大致相等。第Ⅰ至第Ⅵ組為感染組，分別以 2.5×103 、5.0×103 、1.0×104、2.0×104 、4.0×104 、8.0×104 個(gè)/只劑量，用長(zhǎng)頸吸管經(jīng)口插入嗉囊接種感染柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株孢子化卵囊，第Ⅶ組為不感染對(duì)照組。

1.4 致病性觀察及評(píng)價(jià)

接種后每日觀測(cè)雞的精神狀態(tài)、飲食欲，記錄最早血便時(shí)間、血便堆數(shù)及死亡數(shù)。感染后 8 d時(shí)，將雞稱重、剖殺，取出盲腸進(jìn)行病變記分，并以組為單位將盲腸內(nèi)容物勻漿，用 McMasters 法測(cè)定每克盲腸內(nèi)容物的卵囊數(shù)（OPG）[2]。盲腸病變記分參照 Johnson和Reid標(biāo)準(zhǔn)[3]，以病變最為嚴(yán)重的一側(cè)盲腸作為評(píng)價(jià)對(duì)象，采用 5 級(jí)評(píng)分制評(píng)分。未見病變?yōu)?0 分；腸壁僅有少量散在出血點(diǎn)，壁不增厚，內(nèi)容物正常為 1 分；盲腸內(nèi)容物混有少量血液，腸壁稍增厚，內(nèi)容物正常，記 2 分；盲腸內(nèi)有多量血液或有盲腸芯（血凝塊或灰白色干酪樣的香蕉型塊狀物），盲腸壁肥厚明顯，腸腔內(nèi)糞便含量少，記 3 分；因充滿大量血液或腸芯而盲腸腫大，腸芯中含糞渣或不含，記為 4 分，死亡雞也記 4分。最后以平均增重 、相對(duì)增重率、死亡率、平均病變記分、組內(nèi)盲腸內(nèi)容物中卵囊數(shù)量（OPG）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)，并用寇氏法計(jì)算卵囊感染的半數(shù)致死量[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

感染初期，試驗(yàn)雞精神、飲食欲無明顯的異常。感染 72 h 后，6 個(gè)感染組雞均表現(xiàn)為飲食欲減少，羽毛逆立，糞便變稀。感染后 80 h ～96 h 出現(xiàn)便血，血便多見于感染后 5～7 d，其中第 6 天血便最為嚴(yán)重。感染雞逐漸表現(xiàn)精神萎靡，食欲不振或廢絕，渴欲增加，不愛運(yùn)動(dòng)， 嚴(yán)重者出現(xiàn)麻痹、痙攣并出現(xiàn)死亡。感染后第 5～7 d均有死亡，但主要集中于感染后第 6 天。第 7 天血便減少，第 8 天末血便停止。不感染對(duì)照組試驗(yàn)雞在整個(gè)試驗(yàn)期間未見異常。不同劑量感染雞的便血及死亡情況見表 1。

2.2 不同感染劑量的致病性

隨著感染的劑量的增大，最便血時(shí)間有變短的趨勢(shì)，臨床癥狀表現(xiàn)更為嚴(yán)重（表1）。平均增重隨感染劑量的增加而減少，第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組差異不明顯（P>0.05），但與其他組均有極顯著的差異（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ組沒有死亡，其他感染組死亡率有極顯著差異（P<0.01）。第Ⅰ、Ⅱ組病變記分差異不顯著，二者均與其他感染組有極顯著差異（P<0.01）。不同感染劑量下OPG也有上升趨勢(shì)（表2）。分離株對(duì)試驗(yàn)雞的半數(shù)致死量（LD50）為3.248 7×104 個(gè)/只，其 95% 置信限為2.35 2 8×104 ～ 4.485 3×104個(gè)/只。

3 小結(jié)與討論

柔嫩艾美耳球蟲是危害養(yǎng)雞業(yè)最為重要的寄生蟲之一，寄生于盲腸導(dǎo)致明顯的血便，并起雞群大批死亡。隨著感染劑量的增加，感染雞的平均增重顯著減少，死亡率明顯增加，盲腸的平均病變記分也顯著提高，這與黃妮等[1]的研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)觀察了不同感染劑量下的最早便血時(shí)間，發(fā)現(xiàn)隨感染劑量的增加，最早便血時(shí)間有變短趨勢(shì)，這可能與盲腸黏膜上皮細(xì)胞所產(chǎn)生的裂殖體數(shù)量有關(guān)。感染劑量較大，可使有限的盲腸黏膜上皮細(xì)胞一次產(chǎn)生數(shù)量較多的裂殖體，從而造成較早出現(xiàn)血便。感染劑量較小，盲腸黏膜上皮細(xì)胞一次產(chǎn)生的裂殖體數(shù)量尚不能致其大面的損傷，待損傷面積增大時(shí)，方可出現(xiàn)出血，故而血便出現(xiàn)較晚。因?yàn)榍蛳x引起的腸道黏膜出血與裂殖體產(chǎn)生和釋放有關(guān)[2]，但感染劑量增加不可能導(dǎo)致裂殖體產(chǎn)生時(shí)間的提前。球蟲引起黏膜出血性病變的量效關(guān)系還要進(jìn)一步研究。

球蟲的致病性與多種因素有關(guān)[2]，其中，分離株的毒力和感染劑量是最為重要的因素。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在感染劑量為 2.5×103 個(gè)/只和5×103 個(gè)/只時(shí)，仔雞沒有死亡，而在 1×104 個(gè)/只以上時(shí)，隨感染劑量增加死亡率提高，這與王仲兵[5]等的研究結(jié)果一致，所不同的是洛陽分離株的半數(shù)致死量（LD50）為3.248 7×104 個(gè)/只，明顯低于王仲兵等[5]報(bào)道的 7.52×104 個(gè)/只，說明柔嫩艾美耳球蟲洛陽分離株毒力高于山西太谷分離株。本試驗(yàn)結(jié)果為洛陽地區(qū)預(yù)防控制柔嫩艾美耳球所起的雞球蟲病提供基本依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 黃 妮，賈燕青，梁武龍，等.雞柔嫩艾美耳球蟲YL株多次傳代后的致病性研究[J] .動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（9）：27-29.

[2] 索 勛，李國(guó)清.雞球蟲病學(xué)[M] .北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1998.149-174.

[3] JOHNSON J， REIDW M. Anticoccidial drugs： Lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens[J]. Exp Parasitol，1970， 28（1）： 30-36.

[4] 周永欣，章宗涉.水生生物毒性試驗(yàn)方法[M] .北京：農(nóng)業(yè)出版社，1989.114-122.

[5] 王仲兵，古少鵬.柔嫩艾美耳球蟲的分離鑒定與致病性測(cè)定[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2010，27（9）：36-37.