劉妍妍等

【摘 要】目的：探討環(huán)維黃楊星 D（CVB-D）對大鼠離體胸主動脈環(huán)的作用。方法：采用大鼠離體胸主動脈環(huán)灌流模型，觀察累積濃度CVB-D對鹽酸去氧腎上腺素（PE）或氯化鉀（KCl）預(yù)處理的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮主動脈環(huán)的作用。結(jié)果：累積加入CVB-D 4～64g/ml，對PE或KCl預(yù)處理的主動脈環(huán)均能產(chǎn)生明顯的舒張作用（P<0.01），且其舒張作用隨濃度的增高而增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。在64～256g/ml之間其收縮作用逐漸增強(qiáng)（P<0.01）。在CVB-D濃度高于256g/ml時，其舒張作用又隨著濃度的增高而增強(qiáng)（P<0.01）。結(jié)論：不同濃度的CVB-D對大鼠離體胸主動脈環(huán)具有雙向調(diào)節(jié)作用。

【關(guān)鍵詞】環(huán)維黃楊星D；大鼠；離體胸主動脈環(huán)；雙向作用

環(huán)維黃楊星D（CVB-D）是從黃楊科植物小葉黃楊及其同屬植物中提取分離得到的一種生物堿， 商品名為黃楊寧，亦稱環(huán)常綠黃楊堿D、黃楊堿等，它對心血管系統(tǒng)有重要的作用，具有強(qiáng)心、抗心絞痛、擴(kuò)張血管、抗心律失常等作用[1]。目前對CVB-D的藥理作用已進(jìn)行了廣泛的研究，而CVB-D對大鼠離體胸主動脈環(huán)的雙向作用國內(nèi)未見報道。本文旨在觀察CVB-D對大鼠離體胸主動脈環(huán)的藥理作用，以期為該藥物的進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑

鹽酸去氧腎上腺素注射液：上海禾豐制藥有限公司，批號20060908；環(huán)維黃楊星D：河南開封開抗藥業(yè)有限公司，批號200501018；其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.2 實驗儀器

HV-4離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)、HW-1000超級恒溫水浴及BL-410生物機(jī)能實驗系統(tǒng)：成都泰盟科技有限公司；JH-2張力換能器：北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所。

1.1.3 實驗動物

健康雄性Wistar大鼠，150～180g。由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動物中心提供，動物合格證號：SCXK（京）2005-001。

1.2 方法

1.2.1 大鼠離體胸主動脈環(huán)制備

取健康雄性Wistar大鼠，脫頸椎處死后，立即打開胸腔，迅速取出胸主動脈，小心分離附著的脂肪及結(jié)締組織后，用剪刀剪成寬3mm的主動脈環(huán)。去內(nèi)皮主動脈環(huán)的制備采用機(jī)械法。用2個不銹鋼絲制成的三角支撐架穿過主動脈環(huán)，其中一只掛在浴槽內(nèi)的固定鉤上，另一只用細(xì)線與張力換能器連接固定，用BL-410生物機(jī)能實驗系統(tǒng)記錄主動脈平滑肌張力的變化。將主動脈環(huán)完全浸入37℃恒溫的K-H液中，浴槽內(nèi)持續(xù)通以95%O2和5%CO2的混合氣體，穩(wěn)定過程先以0g張力開始，維持15min后調(diào)節(jié)其基礎(chǔ)張力至2g，平衡1.5h，期間每隔15min更換一次新鮮的37℃恒溫的K-H液。

用PE 10-6mol/L收縮主動脈環(huán)達(dá)峰值后，加入ACh 10-5mol/L以檢驗主動脈內(nèi)皮的完整性。若加ACh后使PE預(yù)處理的主動脈環(huán)舒張80%以上，可認(rèn)為內(nèi)皮完整；若加ACh后使PE預(yù)處理的主動脈環(huán)不舒張或舒張10%以下，則認(rèn)為內(nèi)皮去除[2]。

以PE 10-6mol/L或KC1 60mmo1/L誘發(fā)的最大收縮幅度為100%，以加入藥物后的血管張力幅度與PE或KCI誘發(fā)最大收縮幅度之間的比率做血管舒張反應(yīng)的量-效曲線。

1.2.2 CVB-D對主動脈環(huán)的作用

以PE 10-6mol/L或KC1 60mmo1/L預(yù)收縮主動脈環(huán)達(dá)最大效應(yīng)后，累加CVB-D （終濃度分別為4，8，16，32，64，128，256，512g/ml），每10min加入1次，觀察其對內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮主動脈環(huán)張力的影響；對照組以K-H液代替CVB-D等容加入；乙酸組：以乙酸/K-H液代替CVB-D等容加入。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

結(jié)果以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差（ s）表示，以SPSS15.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析，P <0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 CVB-D對基礎(chǔ)狀態(tài)內(nèi)皮完整動脈環(huán)張力的影響

在內(nèi)皮完整的主動脈環(huán)中，累積給予CVB-D2～256 g/ml，與對照組比較，P均>0.05，各濃度CVB-D對正常主動脈環(huán)張力均無明顯影響（見圖1）。

圖1 CVB-D對基礎(chǔ)狀態(tài)內(nèi)皮完整主動脈環(huán)張力的影響（ ±s，n =8）

2.2 CVB-D對PE預(yù)處理的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮的主動脈環(huán)張力的影響

在PE預(yù)處理的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮的主動脈環(huán)，累積加入CVB-D 4～64g/ml，均能產(chǎn)生明顯的舒張作用（P<0.01），且其舒張作用隨濃度的增高而增強(qiáng)，呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。在64～256g/ml之間其收縮作用逐漸增強(qiáng)（P<0.01），在256g/ml時達(dá)最大收縮。在濃度高于256g/ml時，其舒張作用又隨著濃度的增高而增強(qiáng)（P<0.01）。而乙酸組與對照組比較無顯著性差異（P>0.05）（見圖2，圖3）。在CVB-D 64，128，256g/ml時，內(nèi)皮完整組與去內(nèi)皮組比較均有顯著性差異（P<0.05和 P<0.01）（見圖4）。

2.3 CVB-D對KCl預(yù)處理的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮的主動脈環(huán)張力的影響

在KCl預(yù)處理的內(nèi)皮完整的主動脈環(huán)，累積加入CVB-D 4～64g/ml，均能產(chǎn)生明顯的舒張作用（P<0.01）；且其舒張作用隨濃度的增高而增強(qiáng)。在64～256g/ml之間其收縮作用逐漸增強(qiáng)（P<0.01），在256g/ml時達(dá)最大收縮；在濃度高于256g/ml時，其舒張作用又隨著濃度的增高而增強(qiáng)（P<0.01）（見圖5）。

在KCl預(yù)處理的去內(nèi)皮的主動脈環(huán)，累積加入CVB-D 8～32g/ml，均能產(chǎn)生明顯的舒張作用（P<0.01），且其舒張作用隨濃度的增高而增強(qiáng)；在32～128g/ml之間其收縮作用逐漸增強(qiáng)（P<0.01），在128g/ml時達(dá)最大收縮；在濃度高于128g/ml時，其舒張作用又隨著濃度的增高而增強(qiáng)（P<0.01）（見圖6）。

在CVB-D 64，128g/ml時，內(nèi)皮完整組與去內(nèi)皮組比較均有顯著性差異（P<0.05和 P<0.01）（見圖7）。

3 討論

血管平滑肌細(xì)胞的收縮與細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度密切相關(guān)。細(xì)胞內(nèi)Ca2+源于外Ca2+內(nèi)流和內(nèi)Ca2+釋放。細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流主要通過受體門控性鈣通道（ROCC）和電壓依賴性鈣通道（VDCC）以及靜息時的Ca2+內(nèi)流完成；而細(xì)胞內(nèi)的Ca2+釋放主要來自肌漿網(wǎng)。血管平滑肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)內(nèi)Ca2+釋放途徑主要有兩條：一是通過IP3受體，另外是通過ryanodine受體。當(dāng)這些受體被激活開放時，就可導(dǎo)致Ca2+從肌漿網(wǎng)內(nèi)釋放出來，從而升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，引起主動脈環(huán)的收縮[3]。

高鉀主要引起平滑肌細(xì)胞去極化，激活細(xì)胞膜上的VDCC，引起細(xì)胞外Ca2+的內(nèi)流也誘導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)ryanodine敏感鈣池的釋放，即所謂的鈣誘導(dǎo)的鈣釋放（CICR），升高細(xì)胞內(nèi)鈣，增強(qiáng)收縮[4]。PE則主要是通過作用于α1腎上腺素受體，激活了磷脂酶C，產(chǎn)生三磷酸肌醇（IP3）和甘油二酯（DG），從而誘導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)的另一種鈣池IP3敏感鈣池的鈣釋放，PE也可通過激活細(xì)胞膜上的ROCC增強(qiáng)外鈣內(nèi)流[5]。

本實驗在觀察CVB-D對大鼠離體胸主動脈環(huán)的作用時發(fā)現(xiàn)，其對內(nèi)皮完整的正常主動脈環(huán)張力無影響。但在CVB-D 4～64g/ml時對PE或KCl預(yù)處理的內(nèi)皮完整的或去除內(nèi)皮的主動脈環(huán)都具有明顯的濃度依賴性舒張作用，提示CVB-D可能抑制了高鉀和PE引起的胞外鈣內(nèi)流或是抑制了細(xì)胞內(nèi)兩種不同鈣池的鈣釋放，而起到舒張主動脈血管的作用。而CVB-D 在64～128g/ml時對主動脈血管平滑肌的收縮作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 譚峰，顧衛(wèi)，吳海科.環(huán)維黃楊星D的臨床與實驗研究近況[J].中國中醫(yī)急癥，2005，14（7）：683-684.

[2] 林楊闖，胡申江，徐丹蕾，等.苦碟子水提取液對大鼠離體胸主動脈環(huán)的舒張作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志.2007，6，21（3）：202-206.

[3] Junzhi Ji，Christina G，Benishin，et al.Nitric oxide selectively inhibits intracellular Ca2+ release elicited by inositol triphosphate but not caffeine in rat vascular smooth muscle[J].J Pharmacol Exp Ther，1998，285（1）：16-21.

[4] C Zhang，XH Wang，MF Zhong，et al.Mechanisms underlying vasorelaxant action of astragaloside IV in isolated rat aortic rings[J].Clin Exp Pharmacol Physiol，2007， 34（5-6）：387-92.

[5] Il-Woo Shin， Ju-Tae Sohn and Hee-Jin Kim，et al. Etomidate attenuates phenylephrine-induced con?traction in isolated rat aorta[J].CAN J ANESTH 2005，52（9）：927-934.