【摘 要】目的：研究油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脫物、60%醇洗脫物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脫物）體外對陰道毛滴蟲的殺滅作用，評價(jià)它們的抗性病作用。方法：按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）第二部分“消毒劑殺微生物實(shí)驗(yàn)”中的方法和操作程序，結(jié)合陰道毛滴蟲的特點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)，觀察藥物的抗性病作用。結(jié)果：油茶果皮30%醇洗脫物在50mg/ml作用5分鐘時(shí)，不能殺滅陰道毛滴蟲。油茶果皮60%丙酮提取物在25mg/ml作用5分鐘時(shí)，有殺滅陰道毛滴蟲作用。油茶果皮60%醇洗脫物在6.25mg/ml作用5分鐘時(shí)，有殺滅陰道毛滴蟲作用。油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脫物在3.125mg/ml作用5分鐘時(shí)，即有殺滅陰道毛滴蟲作用。這一結(jié)果為將油茶進(jìn)一步開發(fā)成抗性病藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】油茶；抗性病作用；陰道毛滴蟲

油茶（Camellia oleifera Abel.）系山茶科（Theaceae）山茶屬油茶組植物。在我國分布廣產(chǎn)量大，資源非常豐富[1]。中國有油茶面積3660000公頃，年產(chǎn)油茶種子645000噸[2]。將油茶的果皮稱為油茶果皮；種子稱為油茶籽，即茶子心；種子的脂肪油稱茶油；榨去脂肪油的殘?jiān)Q茶麩。本草綱目記載：茶籽苦寒， 可治療急喘咳嗽， 去痰垢[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，油茶籽具有抗菌[4]、抗突變[5]、抗癌[6]，以及抑制心腦血管疾病[7-9]、毒殺軟體動(dòng)物及魚[3，10]等作用。過去，油茶常被用來榨油，而榨出脂肪油后，油茶果皮和茶麩就變成了工廠的廢料，無人問津，殊屬可惜。為了能開發(fā)和綜合利用這一豐富的自然資源，在前期研究工作的基礎(chǔ)上我們對油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脫物、60%醇洗脫物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脫物）體外殺滅陰道毛滴蟲的作用進(jìn)行了觀察，為將油茶進(jìn)一步開發(fā)成抗性病藥物提供依據(jù)?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

陰道毛滴蟲臨床株，于南京市婦幼保健醫(yī)院臨床取材數(shù)株，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室滅菌、分離，得到純培養(yǎng)的陰道毛滴蟲蟲株。

油茶果皮和籽于2005年11月采自廣西壯族自治區(qū)燕洞鄉(xiāng)，并經(jīng)大連大學(xué)中醫(yī)中藥系高松教授鑒定為Camellia oleifera Abel.，批號為20051101。

供試樣品體外試驗(yàn)以泰氏液配成所需濃度混懸液，在體試驗(yàn)以2%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 供試樣品制備

油茶果皮60%丙酮提取物：稱取油茶果皮1000g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次[11]，合并提取液，回收溶劑至干，備用。

油茶果皮30%醇洗脫物：將油茶果皮60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用30%乙醇進(jìn)行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用，又稱油茶果皮多元酚富集物。

油茶果皮60%醇洗脫物：將油茶果皮60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用60%乙醇進(jìn)行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用。

油茶籽60%丙酮提取物：將榨油后的油茶籽再用石油醚脫脂三次，用60%丙酮-水回流提取剩余物3次，1h/次[12]，合并提取液，回收溶劑至干，備用。

油茶籽85%醇洗脫物：將油茶籽60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用85%乙醇進(jìn)行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用，即為油茶皂素。（含量在95%以上）

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.2.1 檢驗(yàn)依據(jù)：按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版第二部分“消毒劑殺滅微生物實(shí)驗(yàn)”中的方法和操作程序，根據(jù)陰道毛滴蟲特點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2.2.2 毛滴蟲懸液：105/ml；

1.2.2.3 樣品配制：實(shí)驗(yàn)前按要求將各藥物配制成100mg/ml的混懸液。方法是先經(jīng)超聲溶解成混懸狀態(tài)，再用無菌蒸餾水倍比稀釋，常規(guī)配成50、25、12.5、6.25、3.125mg/ml濃度的混懸液待用；

1.2.2.4 溶劑：將甲醇用無菌蒸餾水倍比稀釋，常規(guī)配成50、25、12.5%濃度的稀釋液待用；

1.2.2.5 作用時(shí)間：5分鐘；

1.2.2.6 殘留樣品的去除用稀釋法（毛滴蟲液體培養(yǎng)基作為稀釋液）；

1.2.2.7 實(shí)驗(yàn)室溫度：19℃±2；

1.2.2.8 實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)：2次；

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 殘留樣品稀釋離心法去除的鑒定試驗(yàn)（見表1）

2.2 陰道毛滴蟲的殺滅試驗(yàn)（見表2）

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

3.1 甲醇濃度在為25%與滴蟲作用5分鐘時(shí)，無殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.2 油茶果皮30%醇洗脫物濃度在50mg/ml作用5分鐘時(shí)，不能殺滅陰道毛滴蟲。

3.3 油茶果皮60%丙酮提取物濃度在25 mg/ml作用5分鐘時(shí)，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.4 油茶果皮60%醇洗脫物濃度在6.25 mg/ml作用5分鐘時(shí)，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.5 油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脫物濃度在3.125 mg/ml作用5分鐘時(shí)，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王永奇， 吳小娟， 李紅冰， 等. 藥用山茶屬植物的研究. 大連大學(xué)學(xué)報(bào)， 2006， （4）： 47-58.

[2] 高繼銀主編. 山茶屬植物主要原種彩色圖集. [M].浙江科學(xué)技術(shù)出版社. 2005： 3.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典[M]. 上海： 上海科學(xué)技術(shù)出版社. 2000. 上冊： 191.

[4] 朱恒英， 劉克坤， 陳永培， 等. 油茶餅中油茶皂甙體外抑菌試驗(yàn)[J]. 福建中醫(yī)藥， 1989， 20（2）： 44-45.

[5] 陳永培， 鄭鳴金， 朱恒英，等. 油茶餅中油茶皂甙抗突變初步研究[J]. 福建中醫(yī)藥， 1989， 20（3）： 19-20.

[6] 陳惠芳. 植物活性成分詞典[M]， 北京；中國醫(yī)藥科技出版社. 2001

[7] 李萍， 何明， 黃起壬， 等. 油茶皂甙對缺氧復(fù)氧所致大鼠心臟損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制探討[J]. 中草藥， 2000， 31（11）： 841-843.

[8] 黃起壬， 曹守儀， 何明， 等. NO介導(dǎo)的油茶皂甙對在體大鼠產(chǎn)生的藥理性預(yù)適應(yīng)保護(hù)作用[J]. 中草藥， 2001， 32（1）： 44-46.

[9] 黃起壬， 何明， 戴育成， 等. 油茶皂甙對缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷及中性粒細(xì)胞黏附的影響[J]. 中草藥， 2005， 36（12）： 1831-1834.

[10] 李斌， 羅永明. 山茶屬植物化學(xué)成分及生物活性研究[J]. 江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2000， 12（1）： 44-47.

[11] 陳躍龍，唐玲，李紅冰，等. 油茶果皮多元酚富集工藝研究. [J]. 時(shí)針國醫(yī)國藥， 2008， 19（6）： 1369-1370.

6.26辦理

本課題為大連市科技計(jì)劃項(xiàng)目，編號：2007A13GX037。