周權明，章加寬，張 思，劉 俊，徐 寧，劉冠苗，簡秋林，楊淑艷 (吉林醫(yī)藥學院:.臨床醫(yī)學院，2.病理教研室，吉林 吉林 3203)

肝缺血再灌注是創(chuàng)傷性休克、肝臟外科等常見的病理生理過程，它不僅引起肝臟本身的功能障礙，還可導致遠隔器官腎臟的損傷，造成腎功能不全，嚴重影響病人手術后的生存率和愈后的生活質量，因此防治肝缺血再灌注后腎損傷具有重要臨床意義。本研究通過復制大鼠肝缺血再灌注的腎損傷動物模型，探討燈盞花素對肝缺血再灌注后腎損傷的保護作用及其機制，為臨床應用燈盞花素防治肝缺血再灌注后腎損傷提供科學的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥品試劑和儀器

燈盞花素液(山西石藥銀湖制藥有限責任公司，11011231)，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及髓過氧化物酶(MPO)試劑盒均購自南京建成生物醫(yī)藥研究所。BA300型數碼生物顯微鏡(中國麥克奧迪實業(yè)集團有限公司);RM2126型輪轉式切片機(上海徠卡儀器有限公司);ZMN-7803型全自動組織包埋機(常州市華利電子有限公司);TD-5A型臺式低速離心機(上海金鵬科學儀器有限公司);AG135電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(北京醫(yī)療設備廠);772可見分光光度計(上海菁華儀器有限公司)。

1.2 實驗動物分組和造模

Wistar雌性大鼠40只，體重(210±20)g，購自吉林大學基礎醫(yī)學院動物實驗室，許可證號SCXK-(吉)2007-2003。將實驗動物隨機分成4組，即假手術組、模型組、燈盞花素低劑量組和燈盞花素高劑量組，每組10只。

造模前，燈盞花素低、高劑量組每天分別腹腔注射燈盞花素液10 mg/(kg·d)和20 mg/(kg·d)，假手術組和模型組每天腹腔注射等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥7 d，各組動物于手術前禁食不禁水12 h以上，腹腔注射10%的水合氯醛0.3 mL/kg進行麻醉，沿腹正中線開腹暴露肝門后，假手術組只開腹暴露肝門，不做其他處理，模型組，燈盞花素低、高劑量組于尾狀葉上方游離肝左葉、中葉、右中葉的血管及膽管，用無損傷鉗夾閉，造成肝缺血30 min后，松夾重新灌注60 min，造成肝缺血再灌注腎損傷動物模型。

1.3 標本采集

于再灌注60 min時，處死實驗動物后，取左腎以10%福爾馬林固定，取右腎制成5%的勻漿(即取100 mg腎組織，用眼科手術剪將其剪碎，加入2 mL勻漿介質液)后，以3 000 r/min離心10 min，輕輕吸取適量上清液，-20℃冰箱保存待測。

1.4 指標檢測

腎組織病理學檢查:固定好的腎經脫水、包埋、切片、HE染色后，在光學顯微鏡下進行組織病理學觀察。

腎組織勻漿MDA、SOD、MPO的測定:將制備好的勻漿嚴格按照試劑盒說明書操作步驟進行。

1.5 統計學方法

所有數據均用均數±標準差表示，用統計學Spss13.0軟件進行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 燈盞花素對大鼠腎組織病理學變化的影響

假手術組腎組織中腎小球、腎小管及腎間質結構正常，未見組織細胞水腫及壞死現象;模型組腎小球毛細血管及腎間質充血，伴有炎細胞浸潤，腎近曲小管上皮細胞明顯水腫，有少數細胞壞死，致使腎小管管腔不規(guī)則、狹窄;燈盞花素低、高劑量組腎小球毛細血管及腎間質輕度充血，無明顯炎細胞浸潤，腎近曲小管上皮細胞輕度水腫，無明顯細胞壞死，腎小管管腔無明顯狹窄，較規(guī)則，腎損傷改變較模型組明顯減輕，兩組無明顯差異。結果見圖1。

2.2 燈盞花素對大鼠腎組織勻漿MDA含量、SOD、MPO的影響

與假手術組比較，模型組SOD活性降低，差異顯著(P＜0.01)，MDA含量升高(P＜0.05)，MPO活性升高(P＜0.05);與模型組比較，燈盞花素低、高劑量組SOD活性升高(P＜0.05或P＜0.01)，MDA含量降低(P＜0.05)，MPO降低(P＜0.05或P＜0.01);與低劑量燈盞花素組比較，高劑量燈盞花素組SOD、MDA、MPO無顯著性差異(P＞0.05)。結果見表1。

圖1 燈盞花素對大鼠腎組織病理學變化的影響

表1 燈盞花素對大鼠腎勻漿MDA、SOD和MPO的影響(±S，n=10)

表1 燈盞花素對大鼠腎勻漿MDA、SOD和MPO的影響(±S，n=10)

與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組 別SOD(U/mgprot)MDA(μmol/gprot)MPO(U/g)假手術組 241±3＊＊ 4.1±0.7* 4.3±0.7*模型組 212±15 4.8±0.5 8.9±1.1低劑量組 236±9* 3.7±0.6* 6.6±1.4*高劑量組 235±10＊＊ 3.2±0.9* 6.1±0.9＊＊

3 討論

肝缺血再灌注所致腎損傷的發(fā)生機制未完全闡明，主要與氧自由基、白細胞的活化及細胞因子等作用有關［1-2］。本研究通過復制大鼠肝缺血再灌注后腎損傷動物模型，組織病理學檢查發(fā)現，模型組大鼠腎小球毛細血管及腎間質充血，腎小管上皮細胞水腫，少數細胞壞死，說明肝缺血再灌注后可導致腎組織發(fā)生損傷。與模型組比較，燈盞花素低、高劑量組腎組織病理變化明顯減輕，提示燈盞花素對肝缺血再灌注后腎損傷具有保護作用。

燈盞花素是從中藥燈盞花中提取的黃酮類有效成分，能夠改善微循環(huán)、清除自由基、減輕脂質過氧化反應，抑制中性粒細胞聚集等作用［3-7］。MPO是存在于中性粒細胞內的一種酶，它是中性粒細胞在組織中聚集程度的指標，本實驗結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠腎組織MPO明顯增加，MDA含量明顯升高，而SOD活性明顯降低;與模型組比較，燈盞花素低、高劑量組大鼠MPO明顯降低，MDA含量明顯降低，SOD活性明顯升高，兩組無明顯差異，這說明燈盞花素對大鼠肝缺血再灌注后腎損傷具有保護作用，其機制可能是抑制中性粒細胞聚集、減輕脂質過氧化反應、提高機體的抗氧化作用有關，但其詳細作用機制有待于進一步研究。

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