張毅能 章 霞 劉曉林 劉 君 黃東杰 陳 文

（長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院 湖南 長(zhǎng)沙 410219）

復(fù)方阿司匹林片（APC）中含有三個(gè)有效成分，分別是A－阿司匹林（乙酰水楊酸）、P－非那西汀（乙酰對(duì)氨苯乙醚）和C－咖啡因（1，3，7－三甲基黃嘌呤）。阿司匹林容易潮解生成水楊酸，此外樣品在溶解和分析過程中也有降解現(xiàn)象［1］，因此在APC片的有效成分測(cè)定中不可忽視其水解產(chǎn)物水楊酸的干擾。在本實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)阿司匹林在酸性含水體系中水解現(xiàn)象可以得到抑制，在甲醇－水體系中加入少量乙酸和磷酸作為流動(dòng)相，既能有效避免阿司匹林的進(jìn)一步水解，又能將水楊酸與三個(gè)有效組分很好的分離，據(jù)此建立的測(cè)定方法可以同時(shí)且準(zhǔn)確測(cè)定APC中阿司匹林的含量。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑：LC－100高效液相色譜儀；十八烷基鍵合固定相色譜柱；20μL定量進(jìn)樣管；LC－UV600紫外檢測(cè)器；電子天平。

甲醇為色譜純；乙酸和磷酸為分析純；阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)品為分析純；復(fù)方阿司匹林片為市售品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的配制和樣品溶液的制備

1.2.1.1 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取阿司匹林對(duì)照品0.0100 g，置100mL的容量瓶中，加1%乙酸的無水甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL置100mL的容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濃度分別為10、20、30、40、50μg·mL－1。濾膜濾過，取續(xù)濾液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜峰面積和濃度c（μg·mL－1）進(jìn)行線性回歸。

1.2.1.2 樣品溶液的制備：取市售APC片20片于研缽中研細(xì)混勻，準(zhǔn)確稱取相當(dāng)于一片的重量（0.5227g）置于干凈的燒杯中，用適量1%乙酸的無水甲醇溶液充分溶解并濾過殘?jiān)螅D(zhuǎn)移至500mL容量瓶中稀釋至刻度。再加水超聲溶解約10min，最后加水稀釋至刻度。用濾膜過濾后，棄去初濾液，取續(xù)濾液為供試品溶液。

1.3 色譜條件的選擇：本實(shí)驗(yàn)選擇的色譜條件為：流動(dòng)相是甲醇－水－乙酸－磷酸，體積比為68∶30∶1.5∶0.5；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm；流速為1.0mL·min－1；柱溫30℃。

2 結(jié)果和討論

2.1 線性關(guān)系和精密度：色譜峰面積和濃度c（μg·mL－1）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為y＝4077.8x＋1319.5（r＝0.9998）。結(jié)果表明，在10～50μg·mL－1范圍內(nèi)，峰面積與濃度有良好的線性關(guān)系。見表1。取線性項(xiàng)下用30μg·mL－1的溶液連續(xù)平行測(cè)定6次，考察其精密度。結(jié)果表明，精密度良好，能夠滿足含量測(cè)定的需要。有關(guān)結(jié)果見表2。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

表2 精密度測(cè)定結(jié)果

2.2 溶液穩(wěn)定性：取線性項(xiàng)下用30μg·mL－1的溶液，于0、15、30、60、90、120min測(cè)其吸收度，考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果見表3，本品溶液的穩(wěn)定性良好，吸收度在2h內(nèi)未見明顯變化，能滿足含量測(cè)定的需要。

表3 溶液穩(wěn)定性考察

2.3 復(fù)方阿司匹林片阿司匹林的含量測(cè)定：準(zhǔn)確移取8.00mL樣品儲(chǔ)備溶液于250mL容量瓶中稀釋至刻度制成供試液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。平行測(cè)定四次得平均結(jié)果（見表4）。

表4 阿司匹林的含量

2.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取已知含量的樣品，精密稱定，置50mL容量瓶中，共6份，精密加入阿司匹林對(duì)照品，按供試液制備方法制備成相當(dāng)于樣品測(cè)定項(xiàng)下濃度的80%、100%、120%的溶液按上述色譜條件測(cè)定。計(jì)算阿司匹林平均回收率為99.7%，RSD（n＝6）為0.8%。

3 結(jié)論

3.1 樣品溶劑：通過多種溶劑對(duì)APC片各組分的溶解性和穩(wěn)定性的測(cè)試發(fā)現(xiàn)，1%乙酸甲醇溶液做溶劑時(shí)對(duì)APC的溶解性和穩(wěn)定性均較好。實(shí)驗(yàn)表明，在2h內(nèi)測(cè)定樣品溶液，各組分峰面積均無明顯變化，說明降解現(xiàn)象不明顯。

3.2 流動(dòng)相：本實(shí)驗(yàn)比較了多種流動(dòng)相體系，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿司匹林在酸性含水體系中水解現(xiàn)象可以得到抑制。本實(shí)驗(yàn)以流動(dòng)相是甲醇－水－乙酸－磷酸，體積比為68∶30∶1.5∶0.5為流動(dòng)相，既可以使各組分有很好的分離效果，又能保證組分在2h內(nèi)無水解現(xiàn)象。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：精密移取阿司匹林對(duì)照品溶液（30μg·mL－1），在200～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描紫外吸收?qǐng)D譜，結(jié)果在276和227nm處有最大吸收。放置24h后，再掃描吸收?qǐng)D譜，發(fā)現(xiàn)阿司匹林對(duì)照品溶液在303nm的波長(zhǎng)處有明顯吸收，說明此溶液在放置過程中發(fā)生了水解反應(yīng)，有水楊酸產(chǎn)生，然而在276nm的波長(zhǎng)處的變化不大，故選定276nm為測(cè)定阿司匹林的波長(zhǎng)。

本方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，能準(zhǔn)確測(cè)定復(fù)方阿司匹林中阿司匹林的含量，為復(fù)方阿司匹林的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，擬確定復(fù)方阿司匹林片中阿司匹林的平均含量為224.4mg／片。

［1］ 姚如心，許慶琴，杜黎明.大口徑毛細(xì)管氣相色譜法直接測(cè)定復(fù)方阿司匹林制劑［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，23（3）：295－04

［2］ 趙懷清，王學(xué)婭，楊麗，程麗珠.膠束薄層色譜法同時(shí)測(cè)定APC片中3組分含量［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，18（9）：684－689

［3］ 許占方，徐云室，陳立柱.HPLC法測(cè)定阿司匹林的含量［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2007，28（3）