杜 興 王龍剛 孫建文*

(中國人民解放軍第八五醫(yī)院檢驗科，上海 200052)

高效價冷凝集素對交叉配血的影響及消除方法的探討

杜 興 王龍剛 孫建文*

(中國人民解放軍第八五醫(yī)院檢驗科，上海 200052)

【墑要】目的 探討高效價冷凝集素對血常規(guī)血型鑒定和交叉配血的影響及消除方法。方法 通過臨床病例分析、紅細胞ABO血型鑒定、血清抗體篩選、抗體鑒定、冷凝集素效價測定等血型血清學(xué)檢測來查找配血困難原因。結(jié)果 高效價冷凝集素常造成一些常規(guī)檢驗項目失真，最常見的影響就是對血常規(guī)，血型鑒定，尤其是對交叉配血的干擾。與自身紅細胞發(fā)生明顯凝集，使血型鑒定出現(xiàn)失誤，并干擾交叉配血，因錯誤輸血而導(dǎo)致自身免疫性紅細胞破壞，引發(fā)嚴(yán)重的臨床癥狀。結(jié)論 高效價冷凝集素干擾交叉配血時，應(yīng)選擇有價值的鑒別試驗，如復(fù)核血型、自身對照試驗，抗人球蛋白試驗、聚凝胺法交叉配血試驗等進行多方面排除、鑒定，以確保臨床用血的安全有效性。

冷凝集素；血常規(guī)；血型鑒定；交叉配血

冷凝集素又稱冷型自身抗體、冷型血凝素或冷型溶血素，是紅細胞自身免疫性抗體，其特點是在低溫時，與自身的紅細胞發(fā)生凝集，體外最適反應(yīng)溫度為4～27℃，4℃時反應(yīng)最強[1]。臨床上患者血清中冷凝集素抗體滴度的增高，會給交叉配血試驗帶來困難，在對這些患者進行交叉配血試驗時，避免冷凝集素對其的影響就顯得尤為重要[2-5]。為確保臨床用血的安全性，現(xiàn)對高效價冷凝集素致臨床配血的影響進行分析如下

1 資料與方法

1.1 臨床資料

患者，男，53歲，2012年12月因膽囊癌內(nèi)科治療入院，既往有膽囊結(jié)石多年，無輸血史、藥物過敏史及接觸放射性物質(zhì)，無家族性遺傳病。查血常規(guī)RBC 1.39×1012/L，Hb 43g/L。因貧血明顯，臨床考慮給予輸血，申請2個單位紅細胞懸液。臨床查血型為A型，Rh陽性。在室溫交叉配血時，凝聚胺法出現(xiàn)主側(cè)凝集，次側(cè)呈小顆粒狀凝集（室溫20℃）。重復(fù)操作結(jié)果相同。重新抽取新鮮標(biāo)本送至血液中心要求協(xié)助排查不規(guī)則抗體。其檢測結(jié)果如下：多特異性抗球蛋白試驗：多抗-IgGC3（-）、單抗-IgG（-），抗-C3試驗（-）、鹽水對照（-）（取放散后的患者紅細胞檢測），其他試驗：血清中未檢出IgG類不規(guī)則抗體。

考慮冷凝集素影響，隨后復(fù)查血常規(guī)均在室溫和37℃進行。結(jié)果見表1。

表1 血常規(guī)在室溫和37℃進行的結(jié)果比較

1.2 方法

1.2.1 血型血清型檢測

①試劑：抗A抗B血型定型試劑（單克隆抗體），人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒，RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體），改良凝聚胺試劑盒均為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品。②檢測方法：ABO血型鑒定、Rh血型鑒定均按說明書進行操作；③冷凝集素抗體滴度的測定：取患者不抗凝的靜脈血2mL，置37℃孵育，凝固后分離血清；取患者抗凝血1mL，以溫生理鹽水洗滌紅細胞3次，最后配成2%的紅細胞懸液；取10支小試管，每管加生理鹽水0.2mL，第一管加血清0.2mL，逐管稀釋至第9管，混勻后棄去0.2mL，第10管作對照；每管加2%紅細胞懸液0.2mL，搖勻，置4℃冰箱中12h后觀察結(jié)果。記錄有明顯凝集的最后一管的滴度，若第9管仍然有凝集可繼續(xù)稀釋觀察其最高滴度。滴度＞1∶32有診斷意義，滴度＜1∶32無明確臨床意義。

1.2.2 交叉配血試驗

與A型獻血者在室溫（20℃）進行鹽水法及凝聚胺配血法，操作按說明書進行，主側(cè)出現(xiàn)凝集，次側(cè)也出現(xiàn)凝集，配血不和；隨后用溫鹽水將患者紅細胞洗滌3次，配置2%～5%左右的紅細胞懸液，再次進行交叉配血。判讀結(jié)果在37℃的環(huán)境下進行，取出試管輕輕混合觀察結(jié)果；鏡下觀察時先將玻片置于37℃的溫箱內(nèi)預(yù)熱。

2 結(jié) 果

2.1 患者紅細胞ABO血型鑒定20℃和37℃的結(jié)果見表2。

表2 患者紅細胞ABO血型鑒定20℃和37℃的結(jié)果

2.2 多特異性抗球蛋白試驗：多抗-Ig G C3（-）、單抗-Ig G（-），抗-C3試驗（-）、鹽水對照（-）（取放散后的患者紅細胞檢測）。

2.3 不規(guī)則抗體試驗：血清中未檢出IgG類不規(guī)則抗體。

2.4 冷凝集素試驗：在患者的血清中加入血型相同或O型的正常人的紅細胞，在31℃以下可見紅細胞凝集，置于4℃冰箱可見明顯凝集，將溫度回升至37℃，凝集又消失。

2.5 冷凝集素抗體效價測定：此患者冷抗體效價為1∶256。

2.6 交叉配血試驗：鹽水法及凝聚胺法交叉配血試驗，室溫下主、次管都有不同程度的凝集顆粒出現(xiàn)，部分較明顯，之后用處理后的患者血清，紅細胞做鹽水法及凝聚胺交叉配血，在37℃環(huán)境下輕輕搖動，主次側(cè)均無凝集，倒入預(yù)溫的玻片，顯微鏡下可見紅細胞散在、彌漫排列，可以排除其他亞型抗體導(dǎo)致免疫反應(yīng)影響結(jié)果，交叉配血成功。

2.7 輸血反應(yīng)：保溫緩慢輸注交叉配血成功的A型紅細胞懸液，患者無不良反應(yīng)。

3 討 論

Land于1913年首次對冷凝集素（Cold agglutinin，CA）進行報道。一般正常人的血清中存在CA，其效價不超過1∶16[6]，通常不會導(dǎo)致自身血細胞凝集。當(dāng)溫度低于某一特定溫度時，循環(huán)中的自身抗體就會與紅細胞抗原相結(jié)合。其范圍4～35℃，通常低于25℃。文中患者血樣檢測溫度為22℃。但在某些疾病時，其效價往往＞1∶64，最常見于支原體肺炎，患者自身免疫性貧血、陣發(fā)性血紅蛋白尿、傳染性單核細胞增多癥、白血病、急性肝硬化、病毒性肺炎、支原體性肺炎、精神分裂癥、高齡孕產(chǎn)婦也均可引起冷凝集素短時間升高[7]，即高效價冷凝集素。高效價冷凝集素會造成常規(guī)檢驗項目的失真，最常見的影響就是對血常規(guī)。血清中冷凝集素一般系抗紅細胞I抗原的抗體(IgM)，它能與患者自身紅細胞或O型人紅細胞在32℃以下發(fā)生凝集(0～4℃活性最強)，在37℃時已凝集的紅細胞呈可逆性完全散開[8,9]。本實驗也觀察到這一現(xiàn)象，一般正常人Hb/RBC的比值約為30∶1(Hb的單位為“g/L”，RBC的單位為“1012/L”)[10]，由表1可見在室溫時患者紅細胞和血紅蛋白含量相差懸殊，患者血樣有細小的顆粒狀凝集，溫度升至37℃散開。高效價冷凝集素對血型鑒定以及交叉配血試驗的影響更是不言而喻。由表2知患者血型正定型A型，反定型B，O均凝集，故添加自身對照試驗。自身對照為陽性，該患者無輸血史，家族史，不規(guī)則抗體篩查陰性，正反定型不一致考慮可能為冷凝集素所致，故逐將血型管置于37℃水浴箱中，10min后觀察結(jié)果，反定型O凝集較之前明顯減少，升溫至37℃，凝集均消失，初步定為“A”型；用37℃ 0.9%生理鹽水將患者紅細胞洗滌3次，做正定型為A型。用凝聚胺法進行交叉配血，嚴(yán)格按照冷凝集素抗體存在的情況下進行操作，先用溫鹽水洗滌患者紅細胞，配置2%～5%左右的紅細胞懸液，判讀結(jié)果在37℃的環(huán)境下進行，鏡下觀察時將玻片置于37℃的溫箱內(nèi)預(yù)熱，患者血液最終交叉配血成功，先后成功輸入4個單位的紅細胞懸液。證實患者血清中確實含有高效價的冷凝集素。隨后將患者血清經(jīng)連續(xù)倍比稀釋測得患者冷凝集素效價在4℃為1∶256。

在冬季遇到紅細胞和血紅蛋白含量相差懸殊，血型鑒定正反定型不符和交叉配血不相合時，應(yīng)考慮高效價冷凝集素的存在與否，同時排除血清中可能存在的其他不規(guī)則抗體。若存在高效價冷凝集素，在進行血細胞分析樣本時，應(yīng)仔細觀察樣本，在審核報告單時重點審查Hb/RBC的比值，尤其是MCHC，可以幫助及時發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重錯誤。做血型鑒定及交叉配血時，環(huán)境溫度嚴(yán)格控制在37℃進行，配血時應(yīng)注意與血清中可能存在的其他不規(guī)則抗體相鑒別，特別是Rh抗-D，最好用“1+1”配血法，即除用鹽水法配血外，還應(yīng)加做酶法或抗人球蛋白或聚凝胺法配血，以選擇相容的同型血輸注，同時鏡檢是不可避免的環(huán)節(jié)。另外建議此類患者盡量少輸血，輸入的血必須選擇與同種抗體相溶的血液，血液在輸入之前在37℃水浴適當(dāng)加溫，輸入過程中保溫緩慢滴入，這樣可以使患者用血更安全有效。對于臨床檢驗及血庫工作人員，在工作中難免會碰到高效價冷凝集素的病例，只有認真仔細的對待，其對血常規(guī)，血型鑒定及交叉配血的影響才能被及時發(fā)現(xiàn)，從而確保臨床用血的安全有效性。

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Influence Investigation of High Titer Cold Agglutinin on Clinical Cross-matching Test and Its Eliminate Measures

DU Xing, WANG Long-gang, SUN Jian-wen
(Department of Clinical Laboratory, 85th Hospital of PLA, Shanghai 200052, China)

Objective To investigate the effect of high titer cold agglutinin on clinical cross-matching test and its eliminate measures. Methods The result of cross-matching test trouble that high titer cold agglutinins caused was searched by medical record analysis, ABO blood group identification, serum antibody screening, antibody identification, cold agglutinin titration, etc. Results The reason of disturbing routine blood, blood group identification and cross-matching blood test, the presence of high-titer cold agglutinins usually cause routine inspection items misfit by causing obvious agglutination with its own red blood cells, and make mistakes to blood type identification, or interfere with cross-matching blood test, sometimes destruct autoimmune red blood cell caused by transfusion errors, even trigger severe clinical symptoms. Conclusion When high-titer cold agglutinins interfering with cross-matching blood test, valuable identification tests should be thought so as to make sure with safety and efficacy of blood clinical using, such as depleted and identified by countercheck blood type, autoantibody absorption test, antiglobulin test of coombs, polybrene cross-matching blood test, irradiation teat.

Cold agglutinin; Routine blood test; Blood group identification; Cross-matching test

R446.11

B

1671-8194（2013）23-0026-02

*通訊作者：E-mail：doctorsjw@hotmail.com