樸松蘭 周禹含

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130017）

抗氧化微量營養(yǎng)素對肥胖大鼠胰島形態(tài)的影響

樸松蘭 周禹含

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130017）

抗氧化；微量營養(yǎng)素；肥胖；大鼠；胰島

隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的生活方式，尤其飲食習(xí)慣發(fā)生了很大的改變，越來越多的人正加入肥胖的行列。由于食物的加工越來越精細(xì)，導(dǎo)致抗氧化微量營養(yǎng)素（antioxidant micronutrients，AM）丟失過多，攝入減少。肥胖患者氧化應(yīng)激明顯增加，而胰島細(xì)胞對氧化應(yīng)激損傷非常敏感。本研究選用硒（Se）、釩（V）、鉻（Cr）和維生素E等微量營養(yǎng)素，觀察其對肥胖大鼠胰島β細(xì)胞形態(tài)的影響，以探討使用抗氧化微量營養(yǎng)素干預(yù)肥胖致2型糖尿病的可行性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級雄性SD大鼠35只，體質(zhì)量150～170g，購于吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

高脂飼料由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心配制：每100g高脂飼料含有基礎(chǔ)飼料60g，豬油15g，蛋黃粉13g，干酪素10g，白糖2g。基礎(chǔ)飼料總熱能3.29Kcal/g(碳水化合64.44%、蛋白質(zhì)21.88%、脂肪13.68%)；高脂飼料總熱能4.62Kcal/g(碳水化合物30.15%、蛋白質(zhì)22.00%、脂肪49.85%)。

1.3 血糖儀

北京怡成JPS-7血糖儀檢測。

1.4 抗氧化微量營養(yǎng)素

硒酸脂多糖為上海天賜福生物公司產(chǎn)品，釩酸鈉為上海試劑三廠產(chǎn)品，醋酸維生素E由浙江新昌制藥有限公司提供，富鉻酵母由北京中科院高能物理研究所提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備及分組

購入大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為2組，正常對照組(10只)，喂以基礎(chǔ)飼料，高脂飼料組（25只），喂養(yǎng)豬油為主要脂肪成分配制的高脂飼料；第8周末，高脂實(shí)驗(yàn)組大鼠體質(zhì)量基本穩(wěn)定，參照正常對照組大鼠的平均體質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)差，篩選肥胖模型（體質(zhì)量大于對照組平均體質(zhì)量加1.96倍標(biāo)準(zhǔn)差），未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)者剔除。將肥胖模型大鼠分為干預(yù)組（9只）和模型對照組（9只）。

2.2 微量營養(yǎng)素補(bǔ)充劑量及方法

每日以按公斤體質(zhì)量140μg Se（16.60mg硒酸酯多糖）、1.785mg V（14mg NaVO4·12H2O）、140μg Cr（127.27mg富鉻酵母）灌胃，飼含VE的軟料（相當(dāng)于100mg VE/公斤體質(zhì)量、每日）。

2.3 胰腺HE切片的胰島定量分析

干預(yù)6周后處理大鼠，取胰腺組織，經(jīng)新鮮配置并預(yù)冷（4℃）的4%多聚甲醛固定，應(yīng)用自動脫水機(jī)進(jìn)行梯度酒精脫水，二甲苯透明，經(jīng)自動包埋機(jī)進(jìn)行石蠟包埋，使用石蠟切片機(jī)切片，切片厚度為4μm。每組取5只小鼠胰腺HE切片，用HPIAS-1000高清晰度彩色圖像分析系統(tǒng)對小鼠胰腺組織切片（HE染色）進(jìn)行體視學(xué)定量分析。測試參數(shù)a：胰島面積與胰腺面積比（%），測定切片胰腺中所有胰島面積總和，后將胰腺整體攝入分析系統(tǒng)并測定整個胰腺面積，計(jì)算二者之比。測試參數(shù)b：胰島形狀因子（L2/4πA，A為面積，L為周長），為所有胰島形狀因子的平均值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 血糖

0周模型對照組和AM干預(yù)組高于正常組對照組，但組間沒有明顯差異。干預(yù)期間正常對照組血糖比較穩(wěn)定，模型對照組和AM干預(yù)組1～6周血糖逐漸下降，第6周末，AM干預(yù)組血糖低于模型對照組，但組間均沒有顯著差異，詳見圖1。

圖1 抗氧化微量營養(yǎng)素干預(yù)期間血糖變化（mmol/L）

3.2 HE染色、定量分析

HE染色顯示，正常對照組大鼠胰島形態(tài)比較規(guī)則，胞漿豐滿。肥胖模型對照組部分胰島細(xì)胞胞漿疏松化，胞漿淡染。AM干預(yù)組胰島與模型對照組相比有不同程度的恢復(fù)，但仍可見少數(shù)胰島細(xì)胞空泡變性。

定量分析結(jié)果表明，模型對照組胰島面積與胰腺面積比低于正常對照組，AM干預(yù)組胰島面積與胰腺面積比高于模型對照組，但各組間均無顯著差異，詳見圖2。模型對照組胰島形狀因子高于正常對照組，AM干預(yù)組低于模型對照組，但各組間沒有顯著差異，詳見圖3。

圖2 實(shí)驗(yàn)各組胰島面積與胰腺面積比檢測結(jié)果（%）

圖3 實(shí)驗(yàn)各組胰島形狀因子檢測結(jié)果

4 結(jié)果分析與討論

血糖檢測結(jié)果顯示，AM干預(yù)期間實(shí)驗(yàn)各組血糖均波動在正常范圍內(nèi)，可能與造模時(shí)間短等因素有關(guān)。第6周AM干預(yù)組血糖低于模型對照組，可能與造模輕、干預(yù)時(shí)間短有關(guān)。大鼠胰腺HE染色觀察結(jié)果顯示，模型對照組胰島細(xì)胞水腫明顯，而AM干預(yù)組胰島細(xì)胞有不同程度改善。圖像分析結(jié)果顯示，第6周，與模型對照組相比，AM干預(yù)組胰島形狀因子、胰島與胰腺面積比有不同程度改善，但不明顯，也可能與造模及干預(yù)時(shí)間短等因素有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，補(bǔ)充AM能夠保護(hù)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠胰島細(xì)胞形態(tài)，可能延緩或防止2型糖尿病的發(fā)生。由于經(jīng)費(fèi)有限，存在干預(yù)時(shí)間短、檢測指標(biāo)不全面等缺點(diǎn)，有待于進(jìn)一步研究、探討。

R-33

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1671-8194（2013）23-0060-02

吉林省教育廳“十一五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目吉教科合字[2010]329號