羅淑賢

【摘 要】“瘦肉精”是β-腎上腺受體激動劑類化合物的俗稱，包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇等十幾種物質(zhì)。β-激動劑類化合物大多是醫(yī)學臨床普遍使用的平喘類藥物。它們另一個共同特征是，可大大減少食用動物的脂肪、增加瘦肉，縮短動物的生長期。但是如果大量攝入瘦肉精，這些物質(zhì)很難通過動物的代謝排出體外，而是會聚集于肌肉、內(nèi)臟等各部位。當通過食物鏈進入人體，且累計攝入量超過一定值，就會產(chǎn)生毒副作用。在眾多β-腎上腺受體激動劑類化合物中，鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）和萊克多巴胺（Ractopamine，RAC）因藥效顯著、價格低廉，成為此類藥物在畜禽養(yǎng)殖中應用最為普遍的。雖然世界各國紛紛制定法規(guī)嚴禁鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺用于畜禽養(yǎng)殖，但因利潤驅(qū)使，其非法使用的報道還在不斷出現(xiàn)。如何高效快速地檢測出瘦肉精成分，成為其有效監(jiān)管的重要環(huán)節(jié)。

【關鍵詞】瘦肉精；檢測方法；進展

1.色譜檢測法

目前，檢測瘦肉精殘留常用的色譜技術有高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC-MS） 、毛細管電泳法（CE）等。中國已將高效液相色譜法（HPLC）作為檢測飼料中鹽酸克倫特羅殘留的半確證法，將 GC-MS 法定為確證性方法，主要用于最后確認和仲裁，GB/T22147-2008“飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測定液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法”規(guī)定了同步測定飼料中β-激動劑沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。而對于動物性食品，GB/T 5009.192-2003“動物性食品中克倫特羅殘留量的測定”規(guī)定的第一法為氣相色譜—質(zhì)譜法，第二法為高效液相色譜法，第三法為酶聯(lián)免疫法。

除了國標方法以外，國內(nèi)外許多學者也通過研究建立了檢測瘦肉精的色譜法。

毛細管電泳免疫化學發(fā)光檢測尿液中鹽酸克倫特羅的方法，檢測限1.2nmol/L。對于尿液樣本的檢測結果表明，本方法回收率90%～108%，相對標準偏差小于8%。

通過場放大進樣同步檢測西馬特羅、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇的毛細管電泳法。在該系統(tǒng)的最佳條件下，上述物質(zhì)檢測限低于2.0ng/ml，與傳統(tǒng)的電遷移進樣相比，因更加敏感而更適于尿液中上述指標的測定，在尿液中平均回收率高于95.6%和95.3%，相對標準偏差低于 3.5%。

激光誘導熒光毛細管免疫電泳技術（CEIA-LIF）檢測鹽酸克倫特羅的方法0.7ng/ml。在最優(yōu)條件下，自由和異硫氰酸熒光素（FITC）標記的鹽酸克倫特羅可在8min內(nèi)分離，遷移時間相對標準偏差為 0.72%，峰面積相對標準偏差為 2.8%。此法具有良好的選擇性，高分離效率和靈敏度。與其他免疫方法比較相比，CEIA-LIF的優(yōu)勢在于縮短分析時間，減少試劑消耗，通過消除洗滌步驟簡化檢測方法。適用于尿液和其他生物液體中CLB的檢測。He等（2007）建立了簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性好的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測飼料中的萊克多巴胺和鹽酸克倫特羅，檢測限分別為4μg/kg和2μg/kg。

快速測定飼料及肉類產(chǎn)品中鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇的微型毛細管電泳法，在最優(yōu)條件下，二者可以60s內(nèi)分離，鹽酸克倫特羅的檢測限為12mol/L，而沙丁胺醇的檢測限為0.65nmol/L。鹽酸克倫特羅的平均回收率和相對標準偏差分別為84.2%和1.3%，而沙丁胺醇的平均回收率和相對標準偏差分別為81.2%和1.7%。

通過將解吸電噴霧電離法與串聯(lián)質(zhì)譜法相結合建立快速檢測尿液中鹽酸克倫特羅的方法，檢測限2.0ng/ml，對不同的尿樣測定的回收率均在100%±20%，分析一個加標尿樣時間在4min以內(nèi)可以完成。除了分析速度快，串聯(lián)質(zhì)譜法還能提供結構信息以對鹽酸克倫特羅確認。

快速分析克倫特羅，沙丁胺醇，丙卡特羅和非諾特羅的毛細管電泳法，檢測時間約1min，檢測限0.5～2.0mg/L，線性范圍2.0～30mg/L，相關系數(shù)>0.996。準確性、特異性高無疑是色譜法檢測瘦肉精的顯著優(yōu)勢，但是由于儀器較為昂貴，其在基層檢測部門推廣應用還存在一定難度，因此，許多學者開展了基于免疫分析法檢測瘦肉精的研究。

2.免疫分析法

在檢測瘦肉精的免疫法中，酶聯(lián)免疫吸附技術（ELISA）較為成熟，國內(nèi)外許多公司都開發(fā)了基于ELISA 法檢測瘦肉精的試劑盒，與 HPLC法相比，更為敏感、快速和經(jīng)濟，但重現(xiàn)性與特異性較HPLC法差，因此適用于大批量樣品的快速初篩。

檢測豬組織中萊克多巴胺時間分辨熒光免疫分析法，當萊克多巴胺濃度為1～10μgkg-1時，加標試驗豬肌肉和肝臟中萊克多巴胺的回收率分別為88.2%～110.6%以及102.3%～118.5%。變異系數(shù)分別為7.1%～16.4% 以及14.3%～20.5%。同時，通過使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同步檢測樣品，證實了時間分辨熒光免疫分析法分析樣品的可行性。

然而，前述方法還存在樣品前處理時間較長、過程較繁瑣的問題，因此，通過制備鹽酸克倫特羅分子印跡聚合物檢測鹽酸克倫特羅的方法，利用分子印跡技術（Molecularly imprinted technology， MIT）制備了對 CLB具有高特異性、高選擇性的 MIPs，進而建立了MISPE 程序，并與 ELISA技術結合，建立了動物組織樣品中CLB的聯(lián)用快速檢測方法，顯著提高了對動物組織類樣品的前處理效率和檢測靈敏度（0.5μg/kg）。更重要的是，這對于食品安全領域中其它違禁藥物等小分子物質(zhì) MIPs的制備和應用提供了一種有益的嘗試和參考。

通過分子印跡聚合物（MIP）的使用檢測動物組織中的痕量萊克多巴胺，該方法對豬肌肉組織和肝臟中萊克多巴胺的檢測限為0.20～0.90mg/L，回收率分別為85.2%～110.2%及83.8%～115.2%。納米材料是非常敏感的化學和生物傳感器，固定有能選擇性結合靶分子的生物探針的納米傳感器稱為納米生物傳感器。它們能和生物芯片、免疫技術、標記技術等技術手段結合，從而使檢測更加高效、簡便。

3.展望

當前，造成鹽酸克倫特羅屢禁不止的原因之一就是國內(nèi)外檢測 CLB的方法、手段還不完善，還沒有建立宰前（毛、尿液）監(jiān)測體系和準確、迅速、方便、精確的檢測方法，從成本現(xiàn)場檢測設備簡便基層同步篩選法檢測（試紙條法、試劑盒法）優(yōu)點是操作簡單、時間短、成本低，適合在現(xiàn)場進行大量樣品的快速篩查，但結果受環(huán)境、溫度等因素影響大，容易出現(xiàn)“假陽性”，因此試紙條法和試劑盒法檢測結果不能直接作為執(zhí)法依據(jù)。確證法檢測采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等大型高精尖儀器設備，優(yōu)點是靈敏度高、準確性好，結果可作為執(zhí)法依據(jù)，但此類儀器設備非常昂貴，環(huán)境要求極高，檢測周期較長，不適用于基層和現(xiàn)場檢測。因此，國內(nèi)外檢測鹽酸克倫特羅等“瘦肉精”藥物通行做法是“先篩選后確證”，以確證法的結果作為監(jiān)管執(zhí)法的依據(jù)，這樣既節(jié)約了成本，又不會誤判。