陳 丹 李 柯 吳梅青 劉捷頻 李 君

1.湘潭職業(yè)技術學院藥學教研組，湖南 湘潭 411102;2.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長沙 410006;3.中藥新藥研究與開發(fā)湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410013

絞股藍［1－3］為葫蘆科多年生草本植物 Gynostemma pentaphylla(Thunb．)Makino的根莖或全草，味甘、苦，性寒，有益氣健脾、化痰止咳、清熱解毒之功效。現(xiàn)代研究表明絞股藍中含有皂苷、氨基酸、黃酮、多糖和多種無機元素等，其中皂苷有80多種，6種與人參皂苷相似，絞股藍的提取物具有抗疲勞、抗缺氧、免疫調節(jié)、降血脂、降血糖、保肝、抗?jié)兊茸饔?。絞股藍作為五加科以外的唯一含有與人參皂苷相似結構的有效成分的植物，因其所含的化學成份較多，藥理活性廣泛，使其不僅可以供藥用，還可以制成保健滋補品。湖南省有許多地方如綏寧、平江、瀏陽、桑植都產絞股藍，但質量差別很大，目前湖南省還沒有一個絞股藍GAP種植基地，加上對藥材質量監(jiān)控力度不夠健全，使絞股藍藥材質量得不到保障，嚴重的影響了絞股藍及其產品的療效，制約了絞股藍的開發(fā)利用。本文建立了用紫外分光光度法測定絞股藍藥材中皂苷的含量，同時，測定了不同產地絞股藍藥材皂苷的含量。

1 儀器、試劑與藥材

UV－2450紫外分光光度計 (日本島津);HX－06型超聲波清洗器 (武漢恒信世紀科技有限公司);AE－240型電子天平［梅特勒－托利多 (上海)有限公司］。人參皂苷Re購于中國藥品生物制品檢定研究院，批號:110754－200320，其它試劑均為分析純 (湖南匯虹試劑有限公司提供)。絞股藍藥材來源于湖南省瀏陽、平江、桑植、綏寧，經湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥研究室鑒定為葫蘆科植物絞股藍 Gynostema pentaphyllum(Thunb．)Makino的根莖或全草。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱定人參皂苷Re對照品11.42mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末 (過三號篩)約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，靜置過夜，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，離心，取上清液通過D101型大孔樹脂柱 (內徑1.5cm，柱高15cm)，用水洗至流出液無色，再用乙醇25ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液［4－5］。

2.3 最大吸收波長的確定 將顯色后的對照品和各供試品溶液于紫外分光光度計400～600nm波長范圍內掃描，對照品和供試品在550nm附近均有最大吸收。結果見圖1、圖2。

2.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液 (人參皂苷Re C=0.2284mg/ml)0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別置10ml具塞試管中，60℃揮干溶劑，分別精密加入5%香草醛冰乙酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，混勻，密塞，置60℃水浴中保溫15min，取出，冷卻，加冰醋酸5ml，混勻，以空白試劑為對照，在550nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程:人參皂苷Re Y=0.0137X－0.0027，r=0.9991。結果表明人參皂苷 Re在7.61～45.68μg范圍內具有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 取絞股藍藥材按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。精密吸取0.6ml，置10ml具塞試管中，按2.4“線性關系考察”項下進行操作，在同一條件下連續(xù)測得6次吸光度RSD為1.05%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取2.5項下的供試品溶液，精密吸取0.6ml，置10ml具塞試管中，按2.4“線性關系考察”項下進行操作，分別在0.0、0.5、1.0.1.5.2.0.4.0h測得吸光度，RSD為1.21%。

2.7 重復性試驗 取同一批藥材6份，每份2.0g，精密稱定，按2.2“供試品溶液的制備”制成供試品溶液，精密吸取各供試品溶液0.6ml，按2.4“線性關系考察”項下進行操作，測定吸光度，計算其含量，結果RSD為2.3%。

2.8 回收率試驗 稱取6份已知含量的絞股藍藥材0.1g，精密稱定，每份加入人參皂苷Re約2mg，按2.2“供試品溶液制備”項下的方法進行制備，依2.4“線性關系考察”項下測定。計算回收率，人參皂苷 Re平均回收率為96.97%，RSD為1.43%。結果見表1。

表1 人參皂苷Re回收率測定結果表

2.9 不同產地絞股藍含量測定 分別取各產地絞股藍約2.0g，精密稱定，平行2份，按2.2“供試品溶液的制備”方法制備成供試液，分別精密吸取0.6ml，加入具塞試管中，揮干溶劑，按照2.4“線性關系考察”項下方法測定吸光度，計算各產地絞股藍藥材中皂苷含量 (以人參皂苷Re計)，結果見表2。

表2 不同產地絞股藍中皂苷含量測定結果

3.0 不同采收月份絞股藍含量測定 取綏寧產不同采收月份絞股藍約2.0g，精密稱定，平行2份，按2.2“供試品溶液的制備”方法制備成供試液，分別精密吸取0.6ml，加入具塞試管中，揮干溶劑，按照2.4“線性關系考察”項下方法測定吸光度，計算不同月份絞股藍藥材中皂苷含量(以人參皂苷Re計)，結果見表3。

表3 不同采收月份絞股藍中皂苷含量測定結果

3 討論

綜上所述，本測定方法準確、可行，可用于絞股藍中總皂苷的含量測定。為減少誤差，稱樣、加入顯色劑等操作均應由專人操作。

試驗結果:就產地而言，所測樣品中湖南綏寧產絞股藍中總皂苷含量 (2.43%)最高;就采收月份而言，7月采收的絞股藍中總皂苷含量 (2.59%)最高。

［1］何顯忠，邱江沁．絞股藍化學成分和藥理作用研究進展［J］．中國中醫(yī)藥信息雜，2008，5(增刊):84．

［2］孫萬森，吳喜利，喬成林，等．絞股藍總皂苷防治多臟器損傷的藥理研究進展［J］．中成藥報，2009，30(2):241．

［3］李金青，楊洪軍．絞股藍的藥理作用研究進展［J］．中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3(7):189－190．

［4］黃敏珠，王棟，尹忠臣，等．紫外分光光度法測定絞股藍中絞股藍總苷的含量［J］．中國中藥雜志，2010，35(18):2410－2411．

［5］李風華，陳素紅，呂圭源．7個不同產地絞股藍皂苷含量測定［J］．中華中醫(yī)藥學刊，2012，30(4):887－888．