王智輝 吳庭安 彭雨 黃秀芳 林大任 李寧

（1江門市中心醫(yī)院腫瘤科 廣東江門 529000；2江門市中心醫(yī)院病理科）

結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生是一個復雜的生物學過程，嚴重影響患者的生存時間。本研究通過檢測80例結(jié)腸癌患者術(shù)后標本 E－cadherin、β－catenin表達，探討這兩種蛋白表達和結(jié)腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移發(fā)生的相關(guān)性，為預測轉(zhuǎn)移的發(fā)生提供客觀參考指標。

1 資料和方法

1.1 一般資料 隨機選取2009年1月至2009年12月在我院確診的DukesC期結(jié)腸癌患者80例，其中20例患者保存新鮮冰凍組織。男38例，女42例，＞60歲患者21例，≤60歲59例，中位年齡52歲。術(shù)前未行輔助治療，術(shù)前檢查及術(shù)中探查均未發(fā)現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移。術(shù)后行輔助FOLFOX6方案化療6～8個療程，每位患者每3～4個月復查胸、腹、盆腔CT，如CT提示肺、肝或局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時，可再行局部穿刺、MRI、PET－CT等檢查證實，以CT檢查時間為轉(zhuǎn)移發(fā)生時間。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化方法 采用S－P免疫組化方法，嚴格按照試劑盒說明書檢測 E－cadherin、β－catenin（一抗：北京中杉公司）在腫瘤組織中的表達。

免疫組化評價標準：由有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師單盲閱片，在10×40倍顯微鏡下觀察記數(shù)，每張切片隨機選擇5個視野，每個視野記數(shù)200個細胞。以胞膜或／和胞漿出現(xiàn)黃色、褐色為陽性染色。E－cadherin評價包括兩個部分：染色強度和染色陽性細胞的百分比（0～100%）.染色強度評分標準：①陰性；②弱陽性；③陽性；將染色強度評分和陽性細胞的百分比相乘，若乘積≥200分，可評價為染色陽性，若乘積評分＜200，評價為陰性。β－catenin從細胞膜、細胞漿、細胞核三個方面進行結(jié)果判斷：細胞膜大于70%的癌細胞陽性為正常表達，反之為減弱表達。胞漿或胞核大于10%為異位表達。胞膜減弱表達、胞漿胞核異位表達均為陽性表達［1］。（圖1）。

圖1 β－catenin、E－cadherin在結(jié)腸癌組織中表達（SP×400）A：β－catenin陽性表達；B：E－cadherin陽性表達

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計分析。比較 E－cadherin、β－catenin蛋白表達水平與轉(zhuǎn)移關(guān)系時采用χ2檢驗；比較表達情況對轉(zhuǎn)移出現(xiàn)時間影響時采用Kaplan－Meier生存分析法。

2 結(jié) 果

2.1 可評價患者臨床特征 所有患者均可評價腫瘤組織β－catenin、E－cadherin染色。隨訪率100%，中位隨訪時間2年。以是否發(fā)生轉(zhuǎn)移將患者分為轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組。共有35（43.75%）例患者確診轉(zhuǎn)移，其中21例為單個臟器轉(zhuǎn)移，14例為多發(fā)臟器轉(zhuǎn)移。

2.2 β－catenin 表達在轉(zhuǎn)移組中共有23（65.71%）例患者β－catenin陽性表達，而非轉(zhuǎn)移組中共有14（31.11%）例患者陽性表達，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P ＝0.002）。同時，雖然原發(fā)灶不同分化程度、不同T分期和N分期中β－catenin表達存在差異，但是差異沒有統(tǒng)計學意義（詳見表1）。

2.3 E－cadherin表達在轉(zhuǎn)移組中共有25（71.42%）例患者 E－cadherin陽性表達，而非轉(zhuǎn)移組中共有9（20.00%）例患者陽性表達，兩組差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.001）。原發(fā)灶不同分化程度、不同T分期和N分期中E－cadherin表達存在差異，但是差異沒有統(tǒng)計學意義（詳見表1）。

表1 組織中E－cadherin、β－catenin表達同臨床特征間關(guān)系

2.4 β－catenin及E－cadherin表達情況同術(shù)后轉(zhuǎn)移關(guān)系 入組80例結(jié)腸癌患者，β－catenin及E－cadherin均為陽性表達的患者為19例，其中發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移為16（84.21%）例，任一指標表達陽性為31例，其中轉(zhuǎn)移19（61.29%）例，均為陰性表達為30例，其中遠處轉(zhuǎn)移2（6.67%）例。不同表達狀態(tài)同遠處轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學意義（P ＝0.0369）。β－catenin及E－cadherin均陽性表達者轉(zhuǎn)移發(fā)生率明顯高于均陰性表達者（見圖2）。

圖2 E－cadherin、β－catenin共表達同轉(zhuǎn)移出現(xiàn)時間比較（P＝0.0369）（以轉(zhuǎn)移為截點研究）

3 討 論

腫瘤細胞轉(zhuǎn)移是一個復雜的過程，主要包括細胞黏附、細胞運動和突破基底膜3個方面，其中細胞黏附的破壞是啟動轉(zhuǎn)移的重要機制。鈣黏蛋白（Cadherin）主要參與正常上皮細胞間黏附，被認為是腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制基因［2］。鈣黏蛋白包括E－cadherin和P－cadherin。前者主要在整個上皮細胞層表達，后者僅在基底細胞表面表達［3］?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)E－cadherin表達水平和腫瘤細胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲性、預后呈負相關(guān)，并在多種腫瘤中得到部分證實［4、5］。然而，E－cadherin表達同單純術(shù)后轉(zhuǎn)移的關(guān)系并不明確。在本研究中發(fā)現(xiàn)E－cadherin表達同腫瘤不同分化程度、不同T分期和N分期均沒有明顯相關(guān)。轉(zhuǎn)移組患者E－cadherin陽性表達明顯高于非轉(zhuǎn)移組。E－cadherin陽性表達患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的時間也長于陰性表達的患者。E－cadherin對結(jié)腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的發(fā)生有一定的預測作用。

細胞中大部分的β－catenin與細胞膜上的E－cadherin形成功能復合體，當Wnt－1信號與細胞膜上的受體蛋白結(jié)合激活后，導致胞漿內(nèi)游離的βcatenin增加，并進入細胞核與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，從而影響細胞的增殖、分化和凋亡。簡單的說就是βcatenin在胞漿和胞核的蓄積是Wnt通路被激活的標志，wnt通路被激活，導致細胞癌變［6］。在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，以 E－cadherin 為 中 心 的 E－caherin／βcatenin／p120復合體及RhoA蛋白活性發(fā)揮重要作用，很多臨床研究發(fā)現(xiàn)在結(jié)腸癌中E－caherin和βcatenin表達異常與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)［7］。Boman的研究發(fā)現(xiàn)，當腫瘤細胞中β－catenin蛋白含量增高，并進入細胞核中，能夠作為轉(zhuǎn)錄子的輔助因子，激活survivin基因，從而抑制凋亡，開始細胞的無限增殖［8］。本研究中轉(zhuǎn)移組患者β－catenin陽性表達明顯高于非轉(zhuǎn)移組，陽性表達患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的時間也早于陰性表達的患者。對腫瘤組織兩指標的聯(lián)合檢測發(fā)現(xiàn)19例β－catenin、E－cadherin均陽性表達的患者有16（84.21%）例出現(xiàn)了遠處轉(zhuǎn)移，任一指標為陽性表達為31例，其中轉(zhuǎn)移19（61.29%）例，均為陰性表達為30例，其中遠處轉(zhuǎn)移2（6.67%）例。均為陽性表達的患者轉(zhuǎn)移發(fā)生時間最早，明顯高于均為陰性患者。兩項指標的高表達屬于不良預后因素，提示腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的風險較高。兩者聯(lián)合檢測對于預測結(jié)腸癌患者術(shù)后復發(fā)風險具有一定的臨床應(yīng)用價值。

本研究通過前瞻性的分析結(jié)直腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組患者組織E－caherin、β－catenin表達間差異，提示兩者均與結(jié)直腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移相關(guān)，而組織中兩種蛋白同時表達與結(jié)直腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)。兩者聯(lián)合檢測有希望早期發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌術(shù)后轉(zhuǎn)移的發(fā)生，從而采取有效的措施降低轉(zhuǎn)移發(fā)生率，改善結(jié)直腸癌患者術(shù)后生存時間。

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