白 楊，魏秀梅，葉 龍，李曉京，畢繼鑫，丁帥芳，路 陽綜述，鐘秀宏審校 (.吉林醫(yī)藥學(xué)院:009級臨床本科甲班，.009級英語護理本科班，3.病理教研室，吉林 吉林 303)

據(jù)統(tǒng)計，在婦科惡性腫瘤中，卵巢癌是死亡率最高的疾病，其5年生存率極低。這與其發(fā)病隱匿、機制復(fù)雜、進展迅速等因素有關(guān)，給臨床診斷、治療帶來了很大難度。細(xì)胞周期正常運行受細(xì)胞周期蛋白(Cyclins)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDKs)和細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子(CKIs)的共同調(diào)節(jié)。細(xì)胞周期調(diào)控機制失常會使細(xì)胞增殖失控從而導(dǎo)致癌變。目前研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)婦科腫瘤都存在P27蛋白、CyclinE表達異常，且影響某些疾病的預(yù)后。現(xiàn)對P27、CyclinE在卵巢癌中的研究進展綜述如下。

1 P27、CyclinE結(jié)構(gòu)與功能

1.1 P27

P27是從靜息細(xì)胞抽提物中發(fā)現(xiàn)的一種分子質(zhì)量為27 000的熱穩(wěn)定蛋白，p27基因定位于人12號染色體的12P12～13.1交界處。人類p27的cDNA編碼198個氨基酸，其N端有一個廣譜的Cyclin-CDK復(fù)合物結(jié)合位點［1］。

P27是重要的細(xì)胞周期調(diào)控抑制劑，主要調(diào)控機制是抑制Cyclin-CDK復(fù)合物的活性。作用途徑主要有兩條:一是與已經(jīng)活化的Cyclin-CDK復(fù)合物結(jié)合，抑制其活性;二是與未活化的Cyclin-CDK結(jié)合，阻滯其活化過程。沒有活性的Cyclin-CDK不能使pRb磷酸化，細(xì)胞停滯在G1期，生長停止。

P27還可以作為細(xì)胞外刺激信號的潛在媒介來調(diào)控細(xì)胞周期。在多種細(xì)胞外刺激信號作用下，P27的含量在不斷變化。Lee YH等［2］發(fā)現(xiàn)孕酮和三苯氧胺二者聯(lián)合能誘導(dǎo)pRb磷酸化，增加P21、P27等表達水平，從而發(fā)揮生長抑制作用。而免疫抑制劑雷帕霉素［3］可明顯增加CyclinD1蛋白降解，使P27從CyclinD1/CDK4復(fù)合物中釋放增加，繼而與CyclinECDK2結(jié)合增加，從而抑制CDK2的活性，使細(xì)胞停滯在G1期。總之，細(xì)胞外信號調(diào)控細(xì)胞周期與P27活性有重要關(guān)系。

1.2 CyclinE

CyclinE是1991年在釀酒酵母菌中首次發(fā)現(xiàn)的。由395個氨基酸組成，其表達隨細(xì)胞周期呈明顯波動。在G1中期開始合成，并在G1中、后期或S早期達到高峰，進入S期后被S期激酶相關(guān)蛋白2(Skp2)和干細(xì)胞生長因子(SCF)形成的Skp2-SCF介導(dǎo)泛素化，從而水解［4］。CyclinE主要在G1晚期發(fā)揮作用，與CDK2結(jié)合形成的CyclinE-CDK2復(fù)合物是細(xì)胞G1/S期調(diào)控點的關(guān)鍵激酶。CyclinE-CDK2具有激酶活性，參與G1期和S期的pRb磷酸化過程。磷酸狀態(tài)的pRb可使與其結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子E2F發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性，從而啟動DNA的復(fù)制。在人類多種腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有CyclinE的過度表達及擴增。CyclinE過表達會使細(xì)胞失去周期依賴性，S早期不能下調(diào)，整個S期表達CyclinE的細(xì)胞數(shù)量增多，并隨著周期進展遞增。這種過量表達會造成G1期縮短，導(dǎo)致細(xì)胞提前進入S期，干擾DNA、中心體復(fù)制和分裂，導(dǎo)致基因不穩(wěn)定，引起細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和腫瘤的形成［5］。

2 P27、CyclinE與卵巢癌

2.1 P27與卵巢癌

P27的表達與卵巢癌的惡性程度及臨床分期晚等因素有關(guān)。Farley等［6］對91例早期卵巢腫瘤組織和145例早期卵巢癌中P27的表達情況進行了研究，發(fā)現(xiàn)在91例非侵入性卵巢癌組織中，5.4%的患者P27陽性表達率較低，而在早期卵巢癌患者中，16.5%已出現(xiàn)了P27的低表達。這說明缺乏P27這種抑制蛋白的表達，在卵巢腫瘤的發(fā)展中具有一定的作用。付鳳仙等［7］也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果，他們研究了64例卵巢上皮性腫瘤和10例正常卵巢組織，發(fā)現(xiàn)在42例惡性卵巢癌中P27表達水平比交界性及正常卵巢組織中都低。因此推測P27的表達水平可以作為區(qū)別腫瘤良、惡性一個依據(jù)，且可以推測良性或者交界性腫瘤轉(zhuǎn)變?yōu)榘┑内厔莩潭?。流式?xì)胞分析術(shù)能更加準(zhǔn)確的顯示它們之間的差異。

P27還與卵巢癌的預(yù)后有關(guān)。Duncan等［8］對339例卵巢癌中P27的表達進行了免疫組織化學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漿中表達P27者表現(xiàn)出較低的總存活率(P=0.004)。Masciallo等［9］在研究P27表達情況時發(fā)現(xiàn)，正常卵巢組織中P27多表達在核內(nèi)，而卵巢癌組織中P27則多表達在胞漿。這表明P27的核定位是其抑制腫瘤的前提條件，而胞漿P27表達則與生存期減少有關(guān)。Schmider-Ross等［10］在對研究結(jié)果進行單變量和多變量分析時發(fā)現(xiàn)，P27蛋白表達率高的患者有較長的存活期。單變量分析，較長的總存活期只能出現(xiàn)在高表達P27蛋白組(P=0.03)?？梢奝27蛋白是一個獨立的卵巢癌預(yù)后因子，其表達和定位可以作為判斷卵巢癌進展和惡性程度的參考指標(biāo)。

P27蛋白參與多種藥物對卵巢癌的抑制作用。Maria［9］等對全反式維甲酸(tRA)抑制卵巢癌的作用時發(fā)現(xiàn)，經(jīng)tRA處理后，tRA敏感性卵巢癌CAOV3細(xì)胞株P(guān)27表達增加，磷酸化水平也得到增強，可見P27蛋白參與維甲酸介導(dǎo)的腫瘤抑制作用。Goyeneehe等［11-12］研究米非司酮對卵巢癌細(xì)胞的影響時發(fā)現(xiàn)，米非司酮以劑量和時間依賴方式抑制卵巢癌細(xì)胞增生，介導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯與CDK2活性減少有關(guān)。米非司酮能使P21和P27表達上調(diào)，并且增加CDK2與P21和P27的結(jié)合，使CDK2的活性受到抑制。同時加強了P27的核定位，降低了核內(nèi)CyclinE-CDK2的活性、CDK2和CyclinE的量，細(xì)胞G1向S期躍進受阻，細(xì)胞生長停止。上述結(jié)果提示米非司酮對于卵巢癌治療可能有重要意義。

2.2 CyclinE與卵巢癌

大量研究發(fā)現(xiàn)在卵巢癌組織中均有CyclinE的異常表達。Lee YH［13］等分別對55例良性、72例交界性和78例惡性上皮性卵巢癌患者進行觀察研究，發(fā)現(xiàn)CyclinE陽性率在惡性上皮性卵巢腫瘤中的表達最高(P=0.009)，交界性腫瘤次之，良性腫瘤表達最少。這提示CyclinE過表達與預(yù)后不良呈正相關(guān)。Davidson等［14］對卵巢癌中CyclinE蛋白表達進行免疫印跡研究，發(fā)現(xiàn)卵巢癌中過度表達的CyclinE蛋白都為低分子蛋白，而且表達的這些蛋白往往存在于卵巢惡性間皮瘤，且總存活率較低，預(yù)后差。另有學(xué)者［15］對這些低分子質(zhì)量的CyclinE蛋白進行研究，發(fā)現(xiàn)其激酶活性較其他的CyclinE蛋白增強了10倍。因此猜測在卵巢腫瘤中這種過度表達的低分子質(zhì)量形式的Cyclin E蛋白可能改變了細(xì)胞的生物學(xué)特性，為解釋其與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系提出了一種可能的機理?？梢奀yclinE蛋白是一個獨立的卵巢癌預(yù)后因子，測定cyclinE蛋白表達可以作為判斷卵巢癌進展和惡性程度的參考指標(biāo)。

已有研究發(fā)現(xiàn)某些藥物對腫瘤的抑制作用是把CyclinE作為靶點。程虹等［16］發(fā)現(xiàn)，1，25-(OH)2D3能夠調(diào)節(jié)一系列的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白水平或激酶活性來抑制卵巢癌細(xì)胞生長。一方面減少CyclinE和泛素連接酶Skp2表達，然后P27與Skp2結(jié)合減少，使得細(xì)胞的P27蛋白穩(wěn)定性增加。增多的P27 Kip1抑制CyclinD和E相關(guān)的CDK，進而降低Rb蛋白的磷酸化水平，最終使CDK2-CyclinA活性的降低，細(xì)胞周期G1/S轉(zhuǎn)換受阻。結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，高表達表皮生長因子受體(EGFR)使P27蛋白本身表達增加，同時降低了CyclinE。因此，EGFR對于P27和CyclinE有直接的調(diào)控作用，1，25-(OH)2D3則是通過EGFR對卵巢癌細(xì)胞進行細(xì)胞周期調(diào)節(jié)。類似結(jié)論在Shen Z等［17］文獻中也有記載。

3 問題與展望

綜上所述，卵巢腫瘤的形成與細(xì)胞周期調(diào)控關(guān)卡G1/S具有密切的聯(lián)系。鑒于CyclinE、P27是此關(guān)卡中具有重要作用的蛋白，可以將其作為抗卵巢腫瘤的靶點以及討論新的逆轉(zhuǎn)耐藥策略。近年來已有報道應(yīng)用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制CDK2的激酶活性［18］、基因沉默技術(shù)上調(diào)P27的表達水平［19］、RNA干擾技術(shù)特異性下調(diào)CyclinE mRNA水平［20］等方法治療卵巢腫瘤。但是腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多因素共同作用的結(jié)果，且很多研究目前還處于初級階段，如何排除因子之間的交叉影響，找到更有代表性的診斷指標(biāo)仍需作進一步研究。

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