楊赟平，楊雙雙，張莉萍

（重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科 400016）

人乳頭瘤狀病毒（human papillomavirus，HPV）是一種具有高度宿主特異性的嗜上皮病毒，人類是其惟一宿主。研究表明，HPV感染可能誘導多種腫瘤的發(fā)生，例如結(jié)膜鱗狀細胞癌、頭頸部腫瘤、食管癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、陰莖癌等［1］；宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，居女性惡性腫瘤的第二位。在全世界范圍內(nèi)，宮頸癌的發(fā)病率和病死率均較高，我國每年宮頸癌的新發(fā)病例超過13萬，占全球的1／4～1／3，給家庭和社會造成巨大的經(jīng)濟和社會負擔［2］。HPV疫苗的問世使宮頸癌的預(yù)防成為可能。目前在發(fā)達國家HPV疫苗已經(jīng)應(yīng)用于臨床，但研究表明HPV基因型的分布具有明顯的年齡和地區(qū)分布特異性［3］，因此，臨床使用HPV疫苗應(yīng)考慮此異質(zhì)性，目前在中國基于年齡分布的HPV感染研究報道較少，因此，本研究基于高危型HPV感染的現(xiàn)狀以及年齡進行分層分析，旨在為HPV疫苗在重慶地區(qū)人群中的使用提供流行病學參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采集2008年4月至2012年1月本院就診的10 856例女性患者，年齡14～82歲，回顧性收集患者的相關(guān)臨床信息。根據(jù)HPV檢測結(jié)果將10 856例女性患者分為HPV陽性組和HPV陰性組。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及保存方法 用無菌棉拭子將宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，更換宮頸刷，將其置于宮頸口，輕輕順時針旋轉(zhuǎn)5周，所有標本置已加有專用細胞保存液的取樣管內(nèi)，擰緊瓶蓋，立即送檢。

1.2.2 試劑及儀器 購于廣東潮州凱普生物化學有限公司的HPV分型檢測試劑盒，thermal cycler S1000PCR擴增儀以及Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀。

1.2.3 DNA提取 取含有宮頸細胞的細胞保存液0.5mL，按照凱普生物化學有限公司的細胞裂解液說明書步驟提取DNA。

1.2.4 PCR擴增 按照說明書配置PCR mix，加入1μL DNA模板，瞬時離心5s，PCR反應(yīng)條件為95℃，9min；94℃，20s；55℃，30s；72℃，30s；循環(huán)40次；72℃，5min。

1.2.5 雜交及結(jié)果判定 按照說明書進行操作，檢測21種HPV基因型，其中高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型），低危型（6、11、4、43、44型）和其他型（53、66、Cp8304型），并在1h內(nèi)分析結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SAS9.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用表示，用t檢驗分析兩組之間的差異，計數(shù)資料采用率表示，并采用χ2檢驗分析不同年齡組型感染率的差異，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV檢測結(jié)果 在10 856例婦科門診樣本中，HPV陽性者4 050例，檢出率為37.3%，檢出高危亞型2 956例，檢出率為27.2%。其中，單一感染者2 472例，多重感染者484例，其中以二重感染最為常見。而在414例二重感染標本中以16型合并其他高危感染（52、58、33、18、31、39、56型）最為常見，其中16型合并52、58型感染最常見。

2.2 高危型HPV基因亞型分布 本院門診就診婦女單一高危型HPV感染率為22.8%。2 472例女性HPV單一亞型感染標本中，16型911例，18型160例，31型73例，33型203例，35型12例，39型64例，45型14例，51型15例，52型441例，56型41例，58型413例，59型23例，68型102例。16型（36.8%）最為常見，其次為52型（17.8%），58型（16.7%）。

2.3 HPV感染的年齡分層分布情況 HPV陽性組2 956例和HPV陰性組7 900例；HPV陽性組平均（35.99±8.63）歲，HPV陰性組平均（35.81±8.59）歲。結(jié)果顯示 HPV陽性組和陰性組年齡分布差異無統(tǒng)計意義（t＝3.59，P＞0.05），不同年齡段 HPV感染率差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝21.57，P＜0.01）。10 856患者中90例年齡信息不全，其中含有HPV高危型陽性者14例，因此將10 766女性患者按照年齡不同分為4個年齡段，分別為14～＜30歲，30～＜40歲，40～＜50歲，≥50歲。統(tǒng)計不同年齡段女性患者的高危型HPV感染率，結(jié)果顯示14～＜30歲感染率為24.3%，30～＜40歲為28.0%，40～＜50歲為28.4%，≥50歲感染率為31.9%，隨著年齡增長，HPV感染率也逐漸增加，≥50歲患者感染率最高，見表1。

表1 不同年齡段女性患者高危型HPV感染率

3 討 論

HPV感染是女性宮頸癌以及癌前病變的主要病因，目前已發(fā)現(xiàn)100多種HPV基因型，其中至少有40多種基因型主要侵襲生殖道［4］。根據(jù)其導致的病變程度，可將其分為高危型、低危型以及其他型［5］。隨機對照研究結(jié)果顯示HPV的檢測能夠比細胞學檢測更早期地發(fā)現(xiàn)持續(xù)性HPV感染相關(guān)瘤變［6］。由于高危型HPV與腫瘤發(fā)生有直接關(guān)系，因此，高危型HPV的檢測則可能反映早期瘤變，在西方國家已成為婦女普查項目之一［7］。2006年，HPV預(yù)防性疫苗，獲美國FDA批準上市，其的問世使得宮頸癌的預(yù)防和攻克成為可能。目前HPV疫苗主要針對的是高危型16型和18型、低危型6型和11型［8］。但由于HPV基因型的分布具有明顯的地區(qū)差異，因此研究各個地區(qū)HPV高危型的分布有利于有針對性地進行HPV疫苗研發(fā)和臨床應(yīng)用［9］。本研究結(jié)果顯示本院就診婦女HPV檢出率為37.3%，高于國外報道的20%～25%［10］，分析其原因可能是由于本研究的樣本來自門診就診婦女，可能存在選擇偏倚。高危型HPV分型分析顯示重慶婦女的HPV易感基因型以16型、52型、58型為主，這與國內(nèi)其他報道相一致［11］，而作為西方國家HPV感染主要基因型的18型則相對少見，此外，HPV感染主要以單一型感染為主，在多重感染中則以16型合并52型、58型感染最為多見［12］，提示針對16型＋58＋52型三價HPV疫苗的研制將可能覆蓋大多數(shù)易感人群。進一步的HPV感染與年齡的相關(guān)性分析結(jié)果顯示；HPV感染患者年齡差異無統(tǒng)計學意義，HPV感染的年齡分布結(jié)果顯示：隨著年齡增長，HPV感染率也逐漸增加，≥50歲患者感染率最高。這與國外報道“雙峰型”感染率一致［13］，提示不同地區(qū)HPV感染率的年齡分布特點也各有差異，這也為HPV疫苗的臨床使用提出了新的挑戰(zhàn)，各地區(qū)應(yīng)因地制宜的選擇最佳接種年齡。對多重感染的年齡相關(guān)性分析結(jié)果顯示，不同年齡段多重感染呈倒“U”字，與Jin等［14］報道不一致，可能與研究對象異質(zhì)性有關(guān)。但由于HPV疫苗對已感染的HPV的患者無明顯治療作用，推測早期接種可能意義更大，本研究顯示于本院就診的25歲以下的患者僅占12.15%。綜上所述，本研究結(jié)果為重慶地區(qū)HPV疫苗臨床使用前基因型的選擇以及年齡的考慮等提供了流行病學資料。

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